岳 磊 岳 鑫 郭 紅 (吉林大學(xué)和平校區(qū)門診部，吉林 長(zhǎng)春 30062)

誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，而不對(duì)正常組織產(chǎn)生損傷，是腫瘤治療的理想途徑。低劑量絲裂霉素C的作用機(jī)制主要是誘發(fā)凋亡殺死腫瘤細(xì)胞。故低劑量絲裂霉素C化療不但有提高療效可能，且減輕毒副作用，與常規(guī)化療劑量方案比較，其增效減毒作用顯著。本研究將傳統(tǒng)抗癌藥物重新進(jìn)行劑型改進(jìn)，以生物降解高分子材料丙交酯(LA)己內(nèi)酯(CL)共聚物PLCL(LA/CL 80∶20，SFDA認(rèn)證)為載體制備了新劑型，使抗癌藥物均勻分布，利用藥物載體的逐漸降解而使載藥量緩慢釋放，從而實(shí)現(xiàn)低濃度釋放，且維持時(shí)間延長(zhǎng)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 PLCL(LA/CL 80∶20)由吉林大學(xué)化學(xué)院合成。LA、CL由國(guó)家食品藥品監(jiān)督局(SFDA)審批。擔(dān)載絲裂霉素濃度10%(質(zhì)量百分比濃度)。絲裂霉素購(gòu)于浙江海正藥業(yè)股份有限公司，純度大于99%。靜電紡絲機(jī)、恒溫水浴鍋、自動(dòng)純水儀購(gòu)于上海一恒儀器廠等。掃描電鏡FEG XL30購(gòu)于日本Nicon。

1.2 方法

1.2.1 新劑型載藥纖維的微觀評(píng)價(jià) 載藥納米纖維于光學(xué)顯微鏡(×100)及電子顯微鏡下觀察。

1.2.2 新劑型的藥物釋放測(cè)試 精密稱取絲裂霉素C標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，用pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)定容至50 ml容量瓶中，配成1 mg/ml的溶液，采用倍比稀釋的方法，將溶液稀釋為不同的濃度，并于酶標(biāo)儀下363 nm處讀取OD值，根據(jù)所得OD值與其對(duì)應(yīng)的濃度制作絲裂霉素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

稱取不同質(zhì)量的載藥納米纖維(分別為0.1、1、5、10 mg)放入10 ml離心管中，加入pH7.2的PBS 1 ml。將離心管放置于恒溫培養(yǎng)搖床中，溫度控制在37℃，以100 r/min的轉(zhuǎn)速搖育，在未來(lái)的1 w內(nèi)，每日取100 μl于酶標(biāo)儀下讀取OD值，每次吸樣后補(bǔ)充對(duì)等體積的PBS，共進(jìn)行三次重復(fù)試驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用U檢驗(yàn)及T檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 擔(dān)載絲裂霉素納米纖維的形態(tài)學(xué)觀察 載藥納米纖維光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下纖維形態(tài)呈連續(xù)直線狀，無(wú)卷曲，纖維粗細(xì)較均勻，直徑在230～660 nm;纖維表面光滑，無(wú)藥物積聚。多根纖維結(jié)成均一的網(wǎng)格狀。見(jiàn)圖1。

2.2 擔(dān)載絲裂霉素納米纖維的藥物釋放率 將不同質(zhì)量的納米纖維溶于1 ml PBS中，不同時(shí)間點(diǎn)取出100 μl測(cè)量OD值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，載藥納米纖維在pH7.2的PBS中可緩慢釋放，于第5天達(dá)到最大釋放濃度，其后維持不變，不同質(zhì)量的納米纖維釋載藥率約為10%。見(jiàn)圖2，圖3。

圖1 載有絲裂霉素納米纖維光鏡照片(×100)

圖2 載有絲裂霉素納米纖維電鏡照片

圖3 不同質(zhì)量的擔(dān)載絲裂霉素納米纖維在PBS中的藥物釋放率

3 討論

藥物控釋系統(tǒng)經(jīng)歷了從大分子量藥物到藥物輸送與釋放控制的體系的深化，至今已向智能性控制釋放進(jìn)軍〔1～3〕。本研究隸屬于藥物控釋系統(tǒng)的試驗(yàn)研究，以LA與CL合成的共聚物PLCL(LA/CL 80∶20)作為載體，其本身為經(jīng)典的生物降解高分子材料，材料制備成納米纖維后，作為載體擔(dān)載絲裂霉素治療腫瘤，這一研究領(lǐng)域鮮有學(xué)者涉足。

通過(guò)PLCL(LA/CL 80∶20)制成納米材料后進(jìn)行擔(dān)載藥物，能否維持低釋藥率及釋放的一些基本特點(diǎn)是本研究的中心思想。在本實(shí)驗(yàn)中，藥物釋放率的變化趨勢(shì)呈現(xiàn)出釋藥率首先提升很快，后穩(wěn)定于一基本水平，這與聚酯類降解材料的降解規(guī)律相仿〔4～6〕。藥物釋放率的變化規(guī)律應(yīng)該與載體的降解性能相關(guān)，載體良好的生物降解特點(diǎn)是其結(jié)構(gòu)使然，說(shuō)明本研究選用的載體共聚物PLCL，(LA/CL 80∶20)結(jié)構(gòu)，能夠產(chǎn)生適宜的降解特性進(jìn)而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的低釋藥率。

首先，藥物釋放率的變化趨勢(shì)說(shuō)明，藥物釋放的初始階段以藥物的擴(kuò)散釋放為主，血藥濃度迅速達(dá)到閾值而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，釋放后期藥物隨著作為載體的生物降解高分子材料的逐漸降解而穩(wěn)定持續(xù)的釋放。在早期，藥物釋放率持續(xù)升高，后期趨于平緩，認(rèn)為這是因?yàn)獒尫懦跗谒幬锿ㄟ^(guò)擴(kuò)散作用從高分子纖維上脫落;釋放后期是因?yàn)楦叻肿硬牧辖到夂笮纬晌⑿】锥矗幬飶睦w維空洞中釋放出來(lái)。上述特點(diǎn)首先是納米纖維的高比表面積載藥特性，使得載藥量增加且分布均勻，其次均勻分布的載藥量只能隨材料的不斷降解而釋放，其結(jié)果導(dǎo)致藥物維持低濃度持續(xù)釋放。上述變化趨勢(shì)充分說(shuō)明材料的載藥特性及降解性能是藥物釋放的保證。

其次，通過(guò)納米工藝，利用靜電紡絲制得的高分子納米纖維(PLCL)是一種很好的載藥材料。文中所制的納米纖維擔(dān)載絲裂霉素的量可達(dá)10%，即1 mg載藥納米纖維含絲裂霉素0.1 mg。剪取不同重量的載藥納米纖維溶于1 ml PBS中，不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)其釋放率，結(jié)果表明載藥納米纖維載藥均勻，釋放一致，在不同的時(shí)間點(diǎn)不同質(zhì)量的纖維釋放符合線性規(guī)律，且緩慢釋放后釋藥率可達(dá)10%。

采用PLCL作為載體擔(dān)載絲裂霉素，通過(guò)瘤床填塞、局部給藥方式，既可降低其對(duì)正常細(xì)胞的損害作用，又可通過(guò)藥物濃度的緩慢增加達(dá)到一定濃度后殺死癌細(xì)胞，且低濃度維持時(shí)間延長(zhǎng)，降低了絲裂霉素的副作用，同時(shí)充分發(fā)揮了絲裂霉素的抗癌作用。

1 Uhrich K，Cannizzaro SM，Langer RS，et al.Polymeric systems for controlled drug release〔J〕.Chem Rev，1999;99(11)：3181-98.

2 徐 斌.徐麗灑，葉 磊.藥物控制釋放體系的研究進(jìn)展〔J〕.山東醫(yī)藥工業(yè)，2001;4：20-3.

3 鄭巧東，高春燕，陳歡林.藥物控制釋放研究及應(yīng)用〔J〕.浙江化工，2003;5：26-9.

4 陳宇軒，呂春堂，雷德林，等.生物可吸收材料L/DL-聚乳酸的生物相容性及體內(nèi)降解〔J〕.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000;21(4)：417-20.

5 金大萍，盧澤儉，廖凱榮，等.聚dl-丙交酯-羥基磷灰石復(fù)合材料體內(nèi)外降解行為研究〔J〕.功能高分子學(xué)報(bào)，2000;13(1)：41-4.

6 郭曉東，鄭啟新，杜靖遠(yuǎn).可吸收羥基磷灰石/聚DL-乳酸骨折內(nèi)固定材料機(jī)械強(qiáng)度和生物降解性研究〔J〕.中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)，2001;20(1)：23-7.