金 濤

(泰州市人民醫(yī)院，江蘇 泰州 225300)

HPLC法測(cè)定痔浴凈中苦參堿的含量

金 濤

(泰州市人民醫(yī)院，江蘇 泰州 225300)

目的 建立痔浴凈中苦參堿的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法。SunFire C18色譜柱(4.6 mm ×150 mm，3.5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。結(jié)果 此方法線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率為100.29%。結(jié)論 此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于測(cè)定痔浴凈中苦參堿的含量。

痔浴凈;苦參堿;高效液相色譜法

痔浴凈為我市醫(yī)院制劑，由黃柏、苦參、野菊花、大黃炭等14味藥材組成，具有清熱解毒、利濕祛風(fēng)、殺蟲(chóng)止癢的功效?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為泰州醫(yī)院制劑規(guī)范，該標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)?？鄥榉街芯帲溆行С煞譃榭鄥A。為有效控制制劑質(zhì)量，本文采用HPLC法對(duì)制劑中的苦參堿進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與試藥

Waters2996高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器。

痔浴 凈 3批 (批 號(hào) 20111210、20111219、20111222)，自制;苦參堿對(duì)照品(批號(hào)110805－200508)，中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:SunFire C18柱(4.6 mm ×150 mm，3.5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量10μL。在此條件下，樣品溶液中苦參堿吸收峰與其他組分峰能達(dá)到基線(xiàn)分離，分離度大于1.5，理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算大于2 000;陰性樣品溶液(去除苦參，同樣品溶液制備)試驗(yàn)表明，對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品(A)、樣品(B)和陰性樣品(C)溶液高效液相色譜圖

2.2 線(xiàn)性范圍

取苦參堿對(duì)照品約20 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為苦參堿對(duì)照品溶液(0.205 6 mg/mL)。按2.1項(xiàng)下條件，分別進(jìn)樣 2，5，10，15，30 μL，以苦參堿進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。線(xiàn)性回歸方程為:Y=1×107X－48 590，r=0.999 9，苦參堿進(jìn)樣量在0.411 ～6.165 μg范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

分別取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，苦參堿峰面積值的RSD為1.1%。表示儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號(hào):20111210)，按2.7項(xiàng)下方法試驗(yàn)，分別于 0，2，4，8，12，24 h 進(jìn)樣，苦參堿峰面積RSD為0.6%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品(批號(hào):20111210)5份，按2.7項(xiàng)下方法試驗(yàn)，5次含量測(cè)定結(jié)果的RSD為1.5%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(批號(hào):20111210)5 mL，置分液漏斗中，分別精密加入0.535 8 mg/mL苦參堿對(duì)照品溶液3，5，7 mL，每樣3份，按2.7項(xiàng)下方法試驗(yàn)，測(cè)得苦參堿的平均回收率為100.29%，RSD為 0.84%，見(jiàn)表 1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 樣品測(cè)定

精密吸取樣品10 mL，加氨試液2 mL，用乙醚振搖提取 4 次(25，20，15，15 mL)，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液［1］。分別精密吸取苦參堿對(duì)照品溶液(0.205 6 mg/mL)和供試品溶液各10μL，進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。3批樣品(批號(hào)20111210、20111219、20111222)的苦參堿含量分別為 0.525，0.517，0.554 mg/mL;RSD(n=3)分別為 1.0%，0.6% 和1.2%。

3 討論

參照有關(guān)文獻(xiàn)的色譜條件［1-4］，比較了甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)、乙腈-水-三乙胺(3∶97∶0.2)(磷酸調(diào) pH 為 3.5)、甲醇-水-3% 磷酸溶液(80∶5∶12)、乙腈-磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)(25∶75)作為流動(dòng)相的色譜效果，結(jié)果表明，甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)為流動(dòng)相，色譜峰峰形好，能達(dá)到基線(xiàn)分離，保留時(shí)間適宜。

通過(guò)對(duì)三批樣品中苦參堿的測(cè)定，考慮苦參藥材不同批次之間的差異，暫定痔浴凈每1 mL含苦參以苦參堿(C15H24N2O)計(jì)，不得少于0.40 mg。

高效液相色譜法測(cè)定痔浴凈中苦參堿的含量，樣品處理簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，能有效控制制劑質(zhì)量，可作為痔浴凈質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量方法。

［1］仇雅靜，葉 慧.HPLC法測(cè)定康樂(lè)洗液中苦參堿的含量［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2009，23(5):64-65.

［2］任 潔，劉光斌，鄒干朋，等.HPLC測(cè)定舒陰洗液中苦參堿的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(18):76-77.

［3］林祖武.HPLC法測(cè)定苦參洗劑中苦參堿的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，17(10):70-71.

［4］劉永勝，陳 華，金偉華，等.HPLC法測(cè)定抗病毒口服液中苦參堿的含量［J］.中國(guó)藥房，2012，23(4):371-372.

Determination of Matrine in Zhiyujing Mixtures by HPLC

JIN Tao
(Taizhou People's Hospital，Taizhou 225300，China)

Purpose To establish a HPLC methed for the determination of Matrine in Zhiyujing Mixtures.Methods The HPLC method was used at SunFire C18column(4.6 mm ×150 mm，3.5μm).The mobile phase consisted of methanol-water-triethylamine(48∶52∶0.05).The detective wavelength was 220 nm.Results The linearity of this method was good with the average recovery of 100.29%.Conclusion The method is simple and accurate.It can be used for the determination of the contents of Matrine in Zhiyujing Mixtures.

Zhiyujing Mixtures;Matrine;HPLC

R927.2

A

1005-1678(2012)05-0636-02

2012-06-15

金 濤，女，副主任中藥師，E-mail:jt0996@sina.com。