曾 峰，譚永嘉，曾慶良△

(1.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院，貴州遵義 563003；2.第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院普外科，重慶 400038)

新輔助化療(neo-adjuvant chemotherapy，NAC)已經(jīng)成為局部晚期乳腺癌治療中的標準組成部分，并取得一定的療效，然而耐藥問題依然是限制NAC的應(yīng)用，以及影響乳腺癌治療效果的主要問題之一。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及藥物抵抗密切相關(guān)[1-2]。目前，針對臨床常用化療藥物與乳腺癌MAPK通路的研究多局限于離體細胞實驗，臨床實驗方面的研究罕見報道。本文旨在通過研究TE方案(多西他賽聯(lián)合表柔比星)NAC前后對乳腺癌患者的MAPK細胞信號轉(zhuǎn)導通路的關(guān)鍵蛋白有絲分裂原蛋白激酶-細胞外信號調(diào)節(jié)激酶的激酶(mitogen activated protein kinse-extracellular signal-regulated kinase,MEK)的影響以及與療效之間的關(guān)系，探討TE方案NAC治療乳腺癌的作用和對pMEK表達的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2008年10月至2011年2月于遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院甲乳外科進行TE方案(多西他賽75 mg/m2聯(lián)合表柔比星60 mg/m2，每周期21 d)NAC的15例乳腺癌患者。均為女性，年齡32～55歲，中位43.7歲。

1.2方法

1.2.1標本的采集與處理 化療前行空芯針穿刺組織及術(shù)后進行腫瘤組織pMEK的免疫組化測定,所有標本均用10%中性甲醛固定、石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片，用載玻片裱片，60 ℃烤片2 h后待用，進行免疫組化染色。免疫組化染色按PV-9000兩步法試劑盒操作說明進行，用PBS代替一抗作陰性對照，用已知乳腺癌陽性切片作陽性對照。由病理科專業(yè)人員單獨閱片，在200倍光鏡下隨機選擇10個視野，計算出每1 000個腫瘤細胞中陽性細胞所占百分比值。

1.2.2pMEK判定 pMEK主要定位于細胞質(zhì)，細胞核可能有少量表達，以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。顏色強度分為三級：1級為淺棕色；3級為深褐色；2級介于1級和3級之間。結(jié)合細胞染色強度，表達率標準：陽性細胞數(shù)小于10%為陰性(-)(封3圖1)；陽性細胞數(shù)10%～25%為弱陽性(+)；陽性細胞數(shù)大于25%～50%為陽性(++)(封3圖2)；陽性細胞數(shù)大于50%為強陽性(+++)。pMEK陽性反應(yīng)僅有程度改變稱量變,由陽性/陰性變?yōu)殛幮?陽性稱狀態(tài)改變。

1.3統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，pMEK的表達與化療療效之間的關(guān)系采用雙向有序變量的列聯(lián)表Gamma相關(guān)分析，化療對pMEK的影響采用配對樣本的秩和檢驗分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1化療效果 化療3～4個周期結(jié)束后，15例患者中均無臨床完全緩解(CR)病例，部分緩解(PR)者12例，有效率80.00%(12/15)，2例疾病穩(wěn)定(SD)，1例疾病進展(PD)。化療后部分患者臨床分期出現(xiàn)不同程度的降低，化療前、后患者臨床分期之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 化療前后臨床分期情況比較(n)

△：P<0.05，與化療前比較。

2.2化療前pMEK的表達情況與TE方案NAC療效間的關(guān)系 pMEK：陰性3例、弱陽性7例，均為PR，有效率為100.00%；陽性4例(PR 1例、SD 2例、PD 1例)，強陽性1例(PR)，pMEK高表達的有效率為40.00%(2/5)。pMEK的表達與化療效果呈負相關(guān)(r=-0.818，P=0.026)。

2.3TE方案NAC對pMEK的影響 pMEK化療前高表達者占33.33%(5/15)，化療后為6.67%(1/15)?；熀髉MEK表達下調(diào)者有8例，其中3例為量變，包括PR 1例、SD和PD各1例(化療前pMEK均為高表達)，5例為狀態(tài)改變(均為PR)；表達不變的6例，包括PR 5例(均為低表達)和SD 1例(為高表達)；表達上調(diào)者1例(-→+)為PR?；熀髉MEK表達水平有下調(diào)的趨勢，與化療前比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.021)。

3 討 論

近年來的研究發(fā)現(xiàn),MAPK通路與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移以及化療藥物抵抗密切相關(guān)，并且其通路關(guān)鍵蛋白分子已成為目前研制分子靶向治療藥物的重要靶點[3]。Fidds等[4]應(yīng)用MEK特異性抑制劑PD98059作用于人類乳腺癌T-47D細胞株后發(fā)現(xiàn)，此舉將阻斷細胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化的過程，從而抑制細胞增殖； MacKeigan等[5]報道，應(yīng)用MEK抑制劑U0126則可增強紫杉醇誘導的凋亡作用。姚青等[6]研究表明，有絲分裂原蛋白激酶-細胞外信號調(diào)節(jié)激酶的激酶1/2(MEK1/2)蛋白在癌細胞系中的表達及活化水平均增高，通過抑制MEK蛋白可抑制癌細胞的增殖。本實驗中TE方案NAC療效明顯(有效率為80.00%)、化療前后腫瘤分期下降差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且化療后 pMEK表達明顯下降(P<0.05)，表明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與MAPK通路活化密切相關(guān)；TE方案可通過抑制MAPK通路關(guān)鍵蛋白MEK，達到抑制腫瘤細胞增殖產(chǎn)生療效。檢測乳腺癌患者MAPK通路的關(guān)鍵蛋白pMEK的表達對乳腺癌的診斷和指導治療有一定價值。

本結(jié)果顯示，化療前pMEK的表達與化療效果呈負相關(guān)(P<0.05)?；熐皃MEK呈低表達者客觀有效率為100.00%(10/10)，而高表達者的客觀有效率則僅為40.00%(2/5)，而療效不佳和無效患者達60.00%。結(jié)果提示TE方案NAC對pMEK高表達的患者效果不佳。有研究表明，MAPK通路的過度激活可引起腫瘤細胞的化療藥物的耐藥[7-8]。Ding等[9]通過對紫杉醇耐藥的卵巢癌A1847/TX細胞系的研究顯示，多藥耐藥蛋白-1(MDR-1)可以激活ERK1/2，并引起腫瘤細胞對紫杉醇高度耐藥，而應(yīng)用ERK通路抑制劑U0126或PD98059至少可以使其耐藥性降低20倍；Jin等[10]研究表明，大鼠肉瘤 (rat sarcoma,Ras)蛋白可以引起乳腺癌MCF7細胞株對阿霉素和5-氟尿嘧啶的耐藥，此過程與磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)通路的活性升高有關(guān)，抑制PI3K/Akt的活性則可以逆轉(zhuǎn)MCF7的耐藥性。結(jié)合國內(nèi)外的研究結(jié)果，考慮本實驗中TE方案對pMEK高表達的患者療效不佳的原因可能與MAPK通路的激活導致多藥耐藥蛋白的產(chǎn)生有關(guān)。

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