李光榮

（湖南師范大學(xué)附屬湘東醫(yī)院，湖南 醴陵412200）

隨著科技和醫(yī)療水平的發(fā)展，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注藥物安全，按照以往的看法，中藥的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于西藥，而一度鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)的龍膽瀉肝丸事件，使得人們對(duì)中藥毒性有了更深的認(rèn)識(shí)［1］。本文作者以高效液相色譜法（HPLC）分析關(guān)木通及其配伍中藥中的有毒成分為例簡(jiǎn)單闡述中藥有毒成分分析研究的意義。

1 中藥有毒成分分析研究的現(xiàn)狀

近10年來(lái)，我國(guó)在對(duì)中藥復(fù)雜體系中的有毒成分分析研究方面取得了一定進(jìn)展，建立起了相應(yīng)的分析研究方法，使中藥從定性分析為主逐步過(guò)渡到以定量分析為主［2］，定量分析方法也從薄層色譜（TLC）為主，逐步增加了高酸液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和毛細(xì)管電泳法（CE）等現(xiàn)代分析技術(shù)，使中藥有毒成分分析水平明顯提高。HPLC和CE等現(xiàn)代分析技術(shù)已成為中藥有毒成分分析的首選方法，促使中藥有毒成分的分析研究水平不斷提高。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

LC－10ATvp高效液相色譜儀，馬兜鈴酸A對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量≥98.5%），東北馬兜鈴的干燥藤莖——關(guān)木通，地黃的干燥塊根——生地黃，甘草的根及根莖——甘草，當(dāng)歸的根——當(dāng)歸，大黃的根莖——大黃。所有藥物都來(lái)自湖南師范大學(xué)附屬湘東醫(yī)院門(mén)診二藥房中藥柜，在實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑都是色譜純或分析純。

2.2 色譜條件

使用十八烷基硅烷鍵和硅膠作為填充劑；甲醇—水（30：70）為流動(dòng)相，流速1.0mL／min，檢驗(yàn)的波長(zhǎng)為280nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量10μL。

2.3 溶液的配備

稱取馬兜鈴酸A的對(duì)照品，將其制成對(duì)照品溶液，馬兜鈴酸對(duì)照品溶液的濃度為0.028g／L［3］。將關(guān)木通藥材，烘干粉碎，將準(zhǔn)確稱取的0.6g關(guān)木通藥材放入200mL的燒杯中，之后再放入蒸餾水120mL，煎煮30min后過(guò)濾，然后將濾液收集，再把80mL蒸餾水加入殘?jiān)?，再煎?0min，再過(guò)濾，再把濾液收集，收集兩次濾液，將濾液濃縮至干。加入適量的無(wú)水乙醇溶解，并將其定量轉(zhuǎn)移至10mL的容量瓶中，加入無(wú)水乙醇至刻度，搖晃均勻，在將其放進(jìn)冰箱靜置冷藏，過(guò)夜后，抽取適量上清液，用針頭式過(guò)濾器過(guò)濾，將初濾液棄去，把續(xù)濾液收集，放進(jìn)1mL塑料離心管里，將此作為供試液1。關(guān)木通的其它配伍中藥生地、大黃、當(dāng)歸、生甘草均按以上方法配伍，分別定為供試液2、3、4、5。取0.5mL關(guān)木通樣品溶液，用無(wú)水乙醇將其稀釋并定容為5mL，將其定為供試液6。

2.4 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

（1）線性關(guān)系考察。分別準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL注入液相色譜儀，按照上述色譜條件檢驗(yàn)，做出工作曲線，由此可知，馬兜鈴酸A的線性范圍在0.07～0.42g之間，峰面積與進(jìn)樣量之間呈良好的線性關(guān)系，校正曲線為Y＝5.0×106X－33 827，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 3。

（2）精密度試驗(yàn)。準(zhǔn)確的吸取10μL供試液6，反復(fù)試驗(yàn)5次，得出馬兜鈴酸A的峰面積，RSD為0.31%，結(jié)果表明儀器的精密度非常好，可以穩(wěn)定運(yùn)行。

（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。準(zhǔn)確吸取10μL取供試液6，間隔2h測(cè)定一次，4次測(cè)定以后，到24h再測(cè)定一次，得到RSD為1.5%，結(jié)果表明樣品至少在8h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定。

（4）加樣回收率實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取6份關(guān)木通藥材粉末，約0.3g每份，在每份中分別加入7.5mL馬兜鈴酸A對(duì)照品貯備液，根據(jù)“2.3”項(xiàng)的提取方法制備供試液，然后準(zhǔn)確移取0.2mL制備液，用無(wú)水乙醇稀釋、搖勻定容至1mL，進(jìn)樣10μL，計(jì)算加樣回收率為99.12±0.64，同時(shí)測(cè)定峰面積。

（5）樣品測(cè)定。準(zhǔn)確稱取供試液1、2、3、4、5，在以上色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1可以看出，關(guān)木通及其配伍的中藥中都含有有毒成分馬兜鈴酸A，但其在與生地、當(dāng)歸、大黃、生甘草等中藥配伍后，含有有毒成分馬兜鈴酸A的含量會(huì)有不同程度的降低，其中的原因有待于我們進(jìn)一步研究。

3 討論

關(guān)木通是一種馬兜鈴科植物東北馬兜鈴的藤莖，在臨床上常用來(lái)利尿通淋，但是，近年來(lái)在國(guó)內(nèi)外接連發(fā)生了很多起服用關(guān)木通中毒的事件，經(jīng)檢測(cè)其中主要的毒性成分為馬兜鈴酸A［4］，因此2005年版《中國(guó)藥典》已將該品種取消。那么如何才能保證中藥的安全性與有效性已成為中外關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。中藥是我國(guó)最具優(yōu)勢(shì)和文化特點(diǎn)的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，在過(guò)去的10年里，取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，但中藥除了有很好的療效外，還有很多副作用，甚至?xí)霈F(xiàn)中毒現(xiàn)象。據(jù)統(tǒng)計(jì)多達(dá)數(shù)百種不同劑型的中藥其不良反應(yīng)可同時(shí)累及肝、腎等多個(gè)臟器［5］，少數(shù)甚至可致患者死亡，例如比利時(shí)中藥減肥事件、魚(yú)腥草注射液事件等中藥中毒事件。根據(jù)資料顯示我國(guó)每年約有20萬(wàn)人死于藥物不良反應(yīng)和藥源性疾病。令人擔(dān)憂的是，由于西藥化學(xué)成分明確、研究深入，其引起的不良反應(yīng)多已為人們所知曉，然而對(duì)中藥毒副作用的研究卻相對(duì)滯后，像中藥臨床藥理學(xué)、毒理學(xué)以及藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究均起步較晚，因此，人們對(duì)大多數(shù)中藥的毒副作用認(rèn)識(shí)不足。實(shí)際上，中藥的不良反應(yīng)并非少見(jiàn)，據(jù)中國(guó)藥學(xué)會(huì)對(duì)國(guó)內(nèi)1 551例藥物不良反應(yīng)病例分析，中藥不良反應(yīng)所占的比例僅次于抗生素類藥物而位居第二［6］，因此對(duì)中藥的有毒成分分析研究勢(shì)在必行。

［1］李慶，楊素珍.龍膽瀉肝丸致慢性腎衰竭病例報(bào)告［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2003，10（6）：383.

［2］郭曉莊.有毒中草藥大辭典［M］.天津：天津科技翻譯出版公司，1992：201.

［3］劉燕，王寶琴.馬兜鈴中馬兜鈴酸A的HPLC測(cè)定［J］.中草藥，1990，21（6）：15.

［4］馬紅梅，張伯禮.關(guān)木通腎毒害及其防治［J］.中草藥，2001，32（4）：369.

［5］高學(xué)敏.中藥學(xué)（上冊(cè)）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：769.

［6］HUANG WEN.Chinese medicine treating eczema［J］.JATCM，1996（5）.