王聞珠

江蘇省食品藥品監(jiān)督管理局認證審評中心，南京 210002

無菌檢查是藥品生產(chǎn)企業(yè)判斷其無菌制劑或無菌原料藥是否無菌的一種方法，雖然它存在一定的局限性，但仍是無菌產(chǎn)品合格放行或質(zhì)量監(jiān)督的一個重要項目。無菌檢查室的管理涉及到無菌檢查操作人員、無菌檢查環(huán)境、菌種、培養(yǎng)基、驗證等多個方面的管理，其管理水平也往往反映了該藥品生產(chǎn)企業(yè)GMP的實施水平。筆者曾參加了省內(nèi)多家藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢查室的專題調(diào)研，了解到各藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢查室管理水平參差不齊，尚存在一些普遍的或共性的問題。為此，結(jié)合《中國藥典》（2010年版）的相關(guān)要求，從以下六個方面進行探討，并作簡要的分析，旨在為藥品生產(chǎn)企業(yè)進一步規(guī)范無菌檢查工作提供參考。

1 現(xiàn)狀及存在問題

1.1 人員培訓(xùn)

藥品生產(chǎn)企業(yè)專門從事無菌檢查工作的相關(guān)人員均進行了微生物知識、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范、《中華人民共和國藥典》附錄、無菌檢驗操作規(guī)程等的培訓(xùn)，并建有培訓(xùn)檔案，但培訓(xùn)的針對性不強：沒有根據(jù)微生物學(xué)科的特殊性、結(jié)合無菌檢查這一具體的崗位設(shè)定培訓(xùn)內(nèi)容；培訓(xùn)和考核方式單一，主要是書面培訓(xùn)、試卷考核；操作技能考核無記錄；對無菌檢驗人員從事無菌檢查工作的實際情況缺少再次的確認或考核等。

1.2 培養(yǎng)基

藥品生產(chǎn)企業(yè)使用的培養(yǎng)基主要為脫水培養(yǎng)基，主要從藥檢所、培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家或進口代理商處購買，購買的培養(yǎng)基均附有相應(yīng)的檢驗合格報告，并儲存在培養(yǎng)基標(biāo)簽規(guī)定的條件下。雖然《中華人民共和國藥典》附錄對培養(yǎng)基的配制、滅菌、儲存、質(zhì)量控制等均有明確的規(guī)定，但不少企業(yè)常常忽略一些問題：未規(guī)定啟封后的脫水培養(yǎng)基的保存條件及使用有效期；未測定培養(yǎng)基滅菌前后的pH值；采用直火加熱的方法溶解培養(yǎng)基；培養(yǎng)基滅菌過程無記錄；配制分裝好的培養(yǎng)基標(biāo)識內(nèi)容不全，如未標(biāo)明配制批號、配制日期或配制人等，僅憑經(jīng)驗根據(jù)培養(yǎng)基的性狀、顏色及其深淺或分裝的容器等進行判斷；配制好的培養(yǎng)基置于無菌檢查室內(nèi)保存，但由于無菌檢查室未使用連續(xù)運行的空氣凈化系統(tǒng)，難以保證培養(yǎng)基的儲存要求；個別企業(yè)尚未開展培養(yǎng)基的靈敏度檢查等。

1.3 菌種

藥品生產(chǎn)企業(yè)購買的菌種來源主要有兩個：一是從藥品檢驗所購買斜面的標(biāo)準(zhǔn)菌株（一般為第2-3代）定期轉(zhuǎn)種傳代；二是從美國菌種保藏中心（ATCC）或中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC）標(biāo)準(zhǔn)菌株的凍干粉，制成甘油管或瓊脂斜面管后保存在相應(yīng)的條件下并定期轉(zhuǎn)種傳代。企業(yè)均建立了菌種的管理規(guī)程，對菌種的申購、貯存、傳代及傳代次數(shù)、培養(yǎng)、保存和滅活等內(nèi)容進行了規(guī)定，但內(nèi)容較簡單，可操作性不強。個別藥品生產(chǎn)企業(yè)對菌種的管理尚不夠規(guī)范，如銅綠假單孢菌斜面在冰箱內(nèi)保存；自行傳代的菌株標(biāo)識不全，如缺傳代日期、代數(shù)或傳代人等內(nèi)容；在傳代過程中未進行菌種的形態(tài)學(xué)觀察；未規(guī)定菌懸液保存時間等。此外，大多數(shù)藥品生產(chǎn)企業(yè)尚不具備對菌種的純度、特性等關(guān)鍵指標(biāo)進行確認的條件。

1.4 實驗室的布局和運行

無菌檢查實驗室均能按照無菌檢查工作的需求配備了培養(yǎng)基及實驗用具準(zhǔn)備（包括滅菌）、培養(yǎng)（包括實驗結(jié)果觀察）、菌種貯存等功能間或區(qū)域，無菌檢查亦按照《中國藥典》（2010年版）的規(guī)定在萬級背景下的超凈臺或生物安全柜中進行操作，且無菌檢查室與微生物限度檢查室和陽性對照室三室分開，有的還采用了獨立的空氣凈化系統(tǒng)和單獨分開的人流、物流。但是現(xiàn)場檢查仍發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)尚存在不少缺陷：尚未開展空氣凈化系統(tǒng)的再驗證工作；采用不連續(xù)開啟的空氣凈化系統(tǒng)未對自凈時間進行驗證；無菌檢查時只對超凈臺進行了動態(tài)檢測，未對無菌檢查操作人員及操作環(huán)境進行動態(tài)監(jiān)控。

1.5 設(shè)備

無菌檢查工作涉及培養(yǎng)基的滅菌設(shè)備、集菌儀、培養(yǎng)箱、超凈臺等主要設(shè)備，對這些設(shè)備的驗證以及日常檢測、管理也是無菌檢查室的一項重要工作。發(fā)現(xiàn)不少企業(yè)使用的壓力蒸汽滅菌器雖采用自動控制程序，但無自動記錄設(shè)施，不能監(jiān)控具體的滅菌時間和滅菌溫度；滅菌設(shè)備驗證內(nèi)容不全，性能確認中僅進行了生物指示劑的驗證；培養(yǎng)箱無連續(xù)記錄溫度的設(shè)施或溫度超標(biāo)報警裝置；未定期對超級凈化層流臺進行高效過濾器的檢漏等。

1.6 文件

藥品生產(chǎn)企業(yè)建立了包括人員、培養(yǎng)基、菌種、設(shè)備、實驗室安全、無菌檢驗的操作方法等一系列與無菌檢查工作相關(guān)的文件，但從現(xiàn)場抽查的情況看，發(fā)現(xiàn)企業(yè)對文件的重要性認識不足，具體表現(xiàn)在：培養(yǎng)基配制等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程描述不詳細，缺乏可操作性；高壓滅菌器等設(shè)備的使用記錄內(nèi)容不全；無菌檢驗記錄簡單，未記錄所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基等關(guān)鍵信息；配制好的培養(yǎng)基無編號，導(dǎo)致培養(yǎng)基的配制、滅菌、檢驗、使用等整個環(huán)節(jié)難于追溯；無菌檢驗方法驗證資料中未記錄集菌儀的轉(zhuǎn)速、缺沖洗液的沖洗方法和用量的確認等[1]；未對培養(yǎng)基的滅菌程序進行驗證。

此外，在現(xiàn)場調(diào)研中發(fā)現(xiàn)大多數(shù)藥品生產(chǎn)企業(yè)無偏差記錄；無菌檢查結(jié)果未出現(xiàn)陽性或即便出現(xiàn)了陽性結(jié)果亦未進行系統(tǒng)的分析和詳細的記錄。

2 建 議

2.1 加強檢驗人員的培訓(xùn)與考核

一是根據(jù)從事無菌操作人員所具備的微生物專業(yè)知識、操作技能、實踐經(jīng)驗等實際情況，結(jié)合生產(chǎn)品種的特性，開展有針對性的培訓(xùn)。新的從事無菌檢查操作人員必須進行大量的無菌檢驗操作練習(xí)，并通過規(guī)定批次產(chǎn)品的無菌檢查試驗的考核，合格后才能上崗；上崗后亦要定期進行再培訓(xùn)，以便更新相關(guān)知識、回顧以前工作中的偏差和不足[2]。

二是選擇培訓(xùn)教師時不僅要考慮到培訓(xùn)的內(nèi)容，還要注重其資質(zhì)。培訓(xùn)教師不僅要有優(yōu)秀的無菌檢查操作技能，還要有良好的口頭表達和評價能力[2]，以避免考核流于形式。

三是定期對檢驗人員的實際工作情況進行評估，如回顧分析無菌檢驗人員記錄情況、因操作技能不過硬造成假陽性的幾率等。這不僅有助于企業(yè)制定培訓(xùn)計劃，還能讓員工清楚地了解自己的工作情況，同時也是一種考核的方式。

2.2 加強無菌實驗室的管理

一是藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)根據(jù)《中國藥典》（2010年版）附錄中有關(guān)微生物實驗的指導(dǎo)原則和企業(yè)長期的實驗室管理實踐，修訂完善所有與無菌檢查工作相關(guān)的管理規(guī)程、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、檢驗方法等，從文件上規(guī)范實驗室的管理，并定期監(jiān)督其執(zhí)行情況。

二是規(guī)范實驗室的各項記錄，對實驗過程中的原始數(shù)據(jù)、出現(xiàn)偏差情況或日常檢查結(jié)果等應(yīng)及時、詳實的記錄，如無菌檢驗原始記錄應(yīng)載有使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基等的關(guān)鍵信息；培養(yǎng)基配制的原始記錄應(yīng)包含或可追溯到所用的脫水培養(yǎng)基的相關(guān)信息、實際稱量數(shù)、所使用設(shè)備、滅菌程序參數(shù)、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（外觀、pH值、無菌性檢查、靈敏度檢查）等相關(guān)信息。一旦無菌檢查出現(xiàn)偏差或異常情況，這些基礎(chǔ)性的信息即是開展調(diào)查的重要依據(jù)。

2.3 規(guī)范實驗室偏差或異常結(jié)果的處理

從事無菌檢查工作，難免出現(xiàn)偏差或異常情況，如何對這些問題處理是無菌檢查工作的一個難點。以無菌檢查結(jié)果出現(xiàn)陽性為例，筆者認為從以下幾個環(huán)節(jié)入手：首先，應(yīng)正確看待這一異常情況，不隱瞞、不盲目復(fù)檢，規(guī)范的記錄是開展工作的前提條件；其次，應(yīng)立即組織相關(guān)人員展開全面、徹底的調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容涉及本次無菌檢查的儀器、所用培養(yǎng)基等材料、人員的無菌檢驗操作、無菌檢查環(huán)境的動態(tài)監(jiān)控、污染菌的鑒定等所有相關(guān)因素，分析出現(xiàn)陽性結(jié)果的原因，判斷污染菌的來源，必要時延伸到生產(chǎn)環(huán)節(jié)；最后，根據(jù)調(diào)查過程中所獲得的有關(guān)信息進行偏差分析，決定是否需要重新取樣復(fù)試，提出有針對性的糾偏措施，并在調(diào)查報告中對產(chǎn)品的無菌性進行評價。此外，整個偏差處理過程應(yīng)有詳細的記錄，對一些分離到的有價值的菌株應(yīng)妥善保存。

[1] 李玉芹.淺談目前無菌檢查和微生物限度檢查存在的問題[J].中國藥事,2007,21(12)：1011-2.

[2] 潘友文.現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理與驗證技術(shù)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004:87.