杜婷婷，范超君，畢和平，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建藥用植物化學(xué)”教育部重點實驗室，海南 海口 571158）

木棉葉中多糖含量的測定

杜婷婷1，范超君1，畢和平1，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 海口 571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建藥用植物化學(xué)”教育部重點實驗室，海南 ?？?571158）

黎藥木棉葉用石油醚除去脂溶性雜質(zhì)，用水提醇沉法得海南木棉葉的多糖，采用苯酚-硫酸比色法對多糖含量進行了測定.測得木棉葉的多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.72%，加樣平均回收率為101.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.76%.

木棉；多糖；紫外分光光度法

木棉（Bombax malabaricum DC）又稱英雄樹、莫連、紅茉莉、木棉樹、紅棉、攀枝花、斑芒樹等，為木棉科木棉屬植物，為落葉喬木，常先花后葉，開時滿樹，十分壯觀，是南方常見的植物.木棉以花、樹皮和根入藥，具祛風(fēng)除濕，活血消腫、散結(jié)止痛等功效[1-3]，是海南黎族常用藥之一，民間主要是取其根、樹皮、花或葉水煎服，用于治赤白痢疾、濕熱下痢、婦女月內(nèi)風(fēng)，肺癌、腸癌，胃痛，便后下血及痹癥等.文獻曾對木棉的化學(xué)成分及藥理作用的研究進展進行了綜述[4]，研究發(fā)現(xiàn)其化學(xué)成分有香橙素、槲皮素、木犀草素、橙皮苷等黃酮類成分、羽扇豆醇、羽扇豆酮等三萜類化合物，香橙素-4′-甲醚，胡蘿卜苷等其他成分，證明了木棉提取物具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、肝損傷保護等作用.木棉纖維具有的天然抗菌，不蛀不霉的優(yōu)良特性也為眾所周知.多糖是生物體內(nèi)除蛋白質(zhì)和核酸以外的又一類重要的信息分子，具有多種生物活性，與生物機能的維持密切相關(guān)[5-8].本文采用石油醚除去木棉葉中的脂溶性雜質(zhì)后，用水提醇沉法制得木棉粗多糖，采用苯酚-硫酸比色法[9-11]測定了多糖含量.

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

FZ-102型微型植物試樣粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AR2140型電子天平（Ohaus Corp，USA）；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；D2F-200型真空干燥箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）等.

葡萄糖（天津市福晨化學(xué)試劑廠，分析純）；苯酚，濃硫酸，丙酮，氯仿，正丁醇，95%乙醇，石油醚（沸程為60-90℃），碳酸氫鈉等，均為國產(chǎn)分析純.

海南木棉葉采自海南師范大學(xué)南校區(qū)，經(jīng)海南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鐘瓊芯高級實驗師鑒定為Bombax malabaricumDC的葉，自然晾干，粉碎備用.

1.2 苯酚溶液的配制

取苯酚100 g，加鋁片0.1 g和NaHCO30.05 g，蒸餾，收集182℃餾分，稱取12.5 g該餾分，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，搖勻定容，置冰箱內(nèi)備用.

1.3 木棉葉中多糖的提取

取已干燥的木棉葉粉末10 g，用脫脂紗布包好，置于索氏提取器中，加300 mL石油醚脫脂和葉綠素2 h，取出揮去溶媒，換用蒸餾水浸提3次，每次5 h，合并3次水提液，減壓濃縮至50 mL，Sevag法除蛋白，加200 mL95%乙醇，至乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)約80%，靜置12 h（過夜），抽濾，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀2次，置真空干燥箱內(nèi)90℃下烘干，得海南木棉多糖0.1490 g.

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確稱取于105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，溶解定容至100 mL容量瓶中，即得到C=0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用.分別準(zhǔn)確量取0，5.0，10.0，20.0，30.0，35.0 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液至6個已編號的50 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻備用.分別取葡萄糖溶液1 mL至6個干燥的25 mL容量瓶中，分別滴加1.5 mL 5%苯酚溶液，混合均勻后緩慢滴加7.5 mL濃硫酸，充分混勻，室溫下靜置20 min.以未加葡萄糖溶液為隨行空白，用紫外分光光度法于512 nm處測定吸光度.以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.5 木棉葉多糖含量的測定

精確稱取木棉粗多糖10 mg置于100 mL容量瓶中，加入濃硫酸2 mL，加熱水溶解2 h，冷卻至室溫，稀釋至刻度.精確量取1.0 mL樣品液5份置于50 mL小燒杯中，分別加入1.5 mL苯酚溶液，7.5 mL濃硫酸溶液，混合均勻后放置20 min，用紫外分光光度計在512 nm處測其吸光度.

2 結(jié)果與討論

2.1 最大吸收波長的選擇

精密吸取一定量葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.4項下方法操作，在分光光度計上，于波長450—700 nm區(qū)間掃描，確定最大吸收波長為512 nm.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程

測定結(jié)果表明，在標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.00—0.70 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（見圖1）.得回歸方程：A=0.00136×C-0.00509，相關(guān)系數(shù)r=0.9998.式中：C為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），A為吸光度.

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.1Standard curve

2.3 提取溫度的影響

取經(jīng)過脫脂、除雜后的木棉葉粉末6份，每份2.0 g，加水50 mL，分別設(shè)置恒溫水浴溫度為40、50、60、70、80、90 ℃，提取3 h，抽濾，Sevag法脫蛋白質(zhì)，余下按1.4項的方法操作，測定吸光度，計算葡萄糖含量.實驗曲線見圖2.

圖2 葡萄糖提取率與提取溫度關(guān)系曲線Fig.2 Effects of extraction temperature on extraction yield of polysaccharides from Bombax malabaricum DC

試驗證明，葡萄糖提取率與提取溫度成正比關(guān)系，一般來講，溫度越高，提取率也越高.

2.4 加樣回收率實驗

準(zhǔn)確移取80℃條件下提取的樣品多糖溶液1.0 mL，置于25 mL容量瓶內(nèi)，加入一定量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，余下部分按1.4項操作，以不含糖溶液為隨行空白，平行測定5次，測定結(jié)果見表1.

表1 加標(biāo)回收率實驗(n=5)Tab.1 Recovery test(n=5)

2.5 木棉葉中多糖含量測定結(jié)果

測定結(jié)果見表2.

根據(jù)回歸方程及表2，計算得黎藥木棉葉的多糖的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.72%.

表2 木棉葉多糖含量吸光度測定結(jié)果Tab.2 The determination results of polysaccharides content in samples

本文用水提醇沉法提取木棉葉中的多糖，以硫酸-苯酚法測定其含量，方法簡便，可靠，可為木棉的綜合開發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù).

[1]齊一萍,朱惠,郭舜民,等.木棉對小鼠急性肝損傷保護作用的實驗研究[J].福建醫(yī)藥雜志,1998,20(3):103-104.

[2]齊一萍,黎晨光,李小梅,等.木棉根化學(xué)成分的研究（Ⅲ）[J].中草藥,2005,36(10):1466-1467.

[3]王樹山.以攀枝花木棉為主的中草藥保健枕[P].專利:CN1883345,2006.

[4]蘇秀芳,黃長軍.木棉的化學(xué)成分及藥理作用的研究進展[J].廣西民族師范學(xué)院學(xué)報,2010,27(5):13-15.

[5]王寧.天然藥物化學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004.

[6]董群,方積年.多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].中國藥學(xué)雜志,2001,36(10):649-652.

[7]張曉青,劉會東.植物多糖提取分離及藥理作用的研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥,2003,14(8):495-496.

[8]王蓉,吳建波.多糖生物活性的研究進展[J].國外醫(yī)藥:抗生素分冊,2001,22(3):97-100.

[9]畢和平,周賢,陳光英,等.苯酚-硫酸法測定破布葉葉的多糖[J].海南師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,23(4):400-402.

[10]付焱,郭毅,張嫡群,等.歐亞旋覆花中的多糖苯酚-硫酸法測定[J].中草藥,2006,37(4):544-546.

[11]陳建國,胡欣,梅松.茶葉中多糖的提取和測定方法[J].中國衛(wèi)生檢驗志,2004,14(4):432-433.

Determination of Polysaccharides Content from Leave ofBombax malabaricumDC

DU Tingting1，F(xiàn)AN Chaojun1，BI Heping1，2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou 571158，China）

Petroleum ether was used to remove fat-soluble impurities,with Water Extracting-Alcohol Precipitating to get the polysaccharide from leave of Bombax malabaricum DC.The content of polysaccharide was determined with phe?nol-sulfuric acid colorimetry.The mass fraction of polysaccharide from leave of Bombax malabaricum DC was deter?mined as 0.72%with average recovery of 101.1%and the RSD of 1.76%.

Bombax malabaricum DC；Polysaccharide；phenol-sulfuric acid colorimetry

R 284.2

A

1674-4942（2011）03-0307-03

2011-04-20

國家大學(xué)生創(chuàng)新實驗項目（101165804）

*通訊作者

黃 瀾