劉 穎， 支 爽， 穆 帥， 成 碟， 劉登科

(1. 天津藥物研究院 天津市新藥設(shè)計(jì)與發(fā)現(xiàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193； 2. 天津工業(yè)大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，天津 300160； 3. 天津大學(xué) 化工學(xué)院，天津 300072)

噻氯匹定(Ⅰ)自1978年上市以來得到了廣泛臨床應(yīng)用[1]。1998年，法國(guó)賽諾菲公司開發(fā)的氯吡格雷(Ⅱ)首次在美國(guó)上市，因毒副作用較小而在很大程度上取代了Ⅰ[2]。2009年，第一三共和Eli-Lilly共同開發(fā)出的普拉格雷(Ⅲ)在英國(guó)首次上市，臨床前和臨床試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)其抗血栓活性比Ⅱ作用更強(qiáng)，用藥個(gè)體差異小，起效也更為快速[3]，但存在患者出血傾向嚴(yán)重等缺點(diǎn)。因Ⅰ～Ⅲ均為不同的毒副作用，為此，國(guó)內(nèi)外研究人員設(shè)計(jì)合成了大量的新化合物[4～10]，以期找到更加優(yōu)良的候選藥物。

本文在比較分析現(xiàn)有治療藥物及文獻(xiàn)報(bào)道新化合物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，以Ⅱ?yàn)橄葘?dǎo)化合物，利用生物電子等排原理，把Ⅱ結(jié)構(gòu)中的酯基(-CO2Me)換成酰胺(-COR)基團(tuán)，設(shè)計(jì)并合成了一系列新型的N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(4a～4o， Scheme 1),為尋找到更好的先導(dǎo)化合物打下基礎(chǔ)。4的結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和MS表征，并測(cè)定了其體內(nèi)抗血小板聚集活性。

124a～4o

Scheme1

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

Bruker 400型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；VG ZAB-HS型質(zhì)譜儀；Lab Alliance S1500型高效液相色譜儀。

1[11]和2[8]參考文獻(xiàn)方法合成；薄層層析硅膠板GF-254，青島海洋化工廠；其余所用試劑均為分析純或化學(xué)純。

1．2 4的合成(以4a為例)

在反應(yīng)瓶中加入2 3.1 g(10 mmol)的三氯甲烷(15 mL)溶液和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)1.5 g，攪拌下于室溫反應(yīng)約30 min。依次加入甲氧胺(3a)0.47 g(10 mmol)， 1-乙基-3-[3-(二甲氨基)丙基]碳二亞胺(EDC)2.5 g；于25 ℃反應(yīng)6 h(TLC跟蹤)。用水(3×15 mL)洗滌，分液，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，減壓除溶得淺黃色油狀液體，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑：A=V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1]分離得4a。用類似的方法合成4b～4o。

1．3 生物活性測(cè)試[12]

選用健康雄性Wistar大鼠(體重200 g～250 g)隨機(jī)分組。實(shí)驗(yàn)分兩批進(jìn)行，每批均設(shè)正常和Ⅱ?qū)φ战M，灌胃給藥，劑量30 mg·kg-1。給藥容積均為10 mL·(kg·bw)-1，正常對(duì)照組給予等量0.5%CMC-Na，給藥后2 h腹腔注射40 mg·kg-1戊巴比妥鈉(1 mL·kg-1)麻醉，腹主動(dòng)脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，分別制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，在PAM-3型雙通道血小板聚集儀測(cè)定ADP(終濃度：1.08 μM)誘導(dǎo)的血小板最大聚集百分率。

2 結(jié)果與討論

2．1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與表征數(shù)據(jù)

2和4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，光譜數(shù)據(jù)見表2； 4的抗血小板聚集活性見表3。

表1 2和4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Experimental results of 2 and 4

a展開劑：V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1;bHPLC;c展開劑:無水乙醇

表2 2和4的1H NMR和EI-MS數(shù)據(jù)Table 2 1H NMR and EI-MS data of 2 and 4

續(xù)表2

Comp1H NMR δ(J/Hz)*EI-MS m/z(%)4h8.13(s, 1H, NH), 7.67(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.45(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.33(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.4, 1H, TH), 6.73(d, J=4.4, 1H, TH), 4.68(s, 1H, CH), 4.64(s, 1H, CH), 3.68(s, 1H, OH), 3.48(m, J=52.8, 2H, PH), 3.06(s, 2H, CH2), 2.77(d, J=12.4, 4H, PH), 0.99(s, 3H, CH3)364.1(M+, 1), 262.1(99), 209.1(16), 125.0(36), 45.0(5)4i7.98(s, 1H, NH), 7.69(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.46(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.36(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.25(d, J=4.4, 1H, TH), 6.75(d, J=4.4, 1H, TH), 4.71(s, 1H, CH), 3.72(s, 1H, OH), 3.51(t, 2H, CH2), 3.46(m, J=52.8, 2H, PH), 3.08(t, 2H, CH2), 2.75(d, J=12.4, 4H, PH)350.0(M+, 3), 341.1(9), 222.0(5), 70.0(49), 42.0(15)4j8.06(d, J=7.6, 1H, NH), 7.73(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.43(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.4, 1H, TH), 4.55(s, 1H, CH), 3.88(q, J=20.0, 1H, CH),3.50(s, 2H, PH), 2.76(m, J=11.2, 4H, PH), 1.06(q, J=18.8, 6H, CH3)347.1{[M-1]-, 4}, 264.1(38), 138.1(83), 110.0(16), 43.0(11), 27.0(4)4k8.22(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=9.2,1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, CH2), 3.08(q, J=19.6, 2H, PH), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=14.0, 2H, PH), 1.37(m, J=21.6, 2H, CH2), 1.23(m, J=22.4, 2H, CH2), 0.84(t, J=14.8, 3H, CH3)361.2{[M-1]-, 4}, 262.2(97), 110.0(16), 41.0(8), 29.0(12)4l8.25(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=8.8, 1H, ArH), 7.32(m, J=31.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.56(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, PH), 3.11(m, J=27.2, 2H, CH2), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=22.8, 2H, PH), 1.01(t, J=14.4, 3H, CH3)333.1{[M-1]-, 3}, 262.1(95), 110.0(19), 45.0(8), 29.0(10)4m8.18(d, J=4.4, 1H, NH), 7.70(d, J=7.2, 1H, ArH), 7.44(d, J=7.6,1H, ArH), 7.33(m, J=24.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=42.8, 2H, PH), 2.78(s, 2H, PH), 2.71(d, J=5.2, 2H, PH), 2.62(d, J=4.4, 3H, CH3)321.0{[M+1]+, 9}, 262.1(68), 110.0(41), 58.0(64), 39.0(21)4n7.84(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.54(m, J=15.6, 2H, ArH), 7.22(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.73(d, J=5.2, 1H, TH),4.96(s, 1H, CH), 4.13(t, J=13.2, 2H, PH), 3.96(s, 2H, OH), 3.72(t, J=9.2, 4H, CH2CN), 2.68(m, J=14, 2H, CH2O), 2.48(m, J=8.4, 4H, PH), 2.32(m, J=13.6, 2H, CH2O)394.1(M+, 1), 356.1(13), 307.2(8), 128.1(85), 100.2(57), 45.3(36)4o7.72(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.43(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.32(m, J=32.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.54(d, J=7.2, 2H, PH), 2.74(m, J=26.0, 4H, PH),1.67(m, J=26.8, 4H, AH), 1.20(m, J=87.2, 8H, AH)388.1(M+, 3), 375.0(4), 179.0(20), 70.0(49), 36.0(42)

*T=thiophene, P=piperidine

表3 4的抗血小板聚集活性Table 3 Anti-platelet aggregation activities of 4

從表3可見，4a～4o均有一定的抗血小板聚集作用，其中4a， 4l和4m顯現(xiàn)出比其他化合物更強(qiáng)的活性，對(duì)血小板聚集的抑制百分率分別為60.3%， 63.0%和65.1%。

2．2 合成

1,3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)是一種縮合劑，與少量催化劑DMAP聯(lián)合用于羧酸與醇縮合成酯，與胺縮合生成酰胺是最常用的合成方法[13]。合成本文目標(biāo)酰胺類衍生物前期實(shí)驗(yàn)中即應(yīng)用了此法，但在純化過程中遇到了困難。DCC反應(yīng)后的副產(chǎn)物DCU(二環(huán)己基脲)很難完全分離去除。研究發(fā)現(xiàn)，DCU在三氯甲烷中的溶解度較小，因此嘗試用氯仿溶解目標(biāo)產(chǎn)物后過濾，但是濾液仍需多次柱分離才能得到較好純度的產(chǎn)物。隨后采用了水溶性的脫水劑EDC·HCl，通過水洗的方法即可方便除去副產(chǎn)物，極大地方便了后處理過程，得到的產(chǎn)物純度也較好。

[1] Panak E, Maffrand J P, Picard-Fraire C,etal. Thclopidine:A promise for the prevention and treatment of thrombosis and its complications[J].Haemostasis,1983,13(1):1-54.

[2] Coukell A J, Markham A. Clopidogrel[J].Drugs,1997,54(5):745-750.

[3] Hashimoto M, Sugidachi A, Isobe T,etal. The influence of P2Y12receptor deficiency o the platelet inhibitory activities of prasugrel in a mouse model: Evidence for specific inhibition of P2Y12receptors by prasugrel[J].Biochemical Pharmacology,2007,74(7):1003-1009.

[4] 成碟，劉穎，劉登科，等． 含有取代哌嗪及哌啶結(jié)構(gòu)的噻吩并吡啶類化合物的合成及活性研究[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44(22)：1752-1754.

[5] Cheng D, Liu D K, Liu M,etal. Synthesis and activity evaluation of some novel derivatives of 4,5,6,7-tetrahydrothieno[3,2-c]-pyridine[J].Chinese Chemical Letters,2008,19:689-692.

[6] Cheng D, Liu D K, Liu M,etal. Synthesis,activity evaluation and 3D-QSAR study of some novel derivatives of 4,5,6,7-tetrahydrothieno[3,2-c] pyridine[J].Chinese Chemical Letters,2008,19:1075-1079.

[7] 周云松，王平保，劉穎，等． 噻吩并四氫吡啶衍生物的合成及其抗血小板聚集活性研究[J]．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011,46(1)：70-74.

[8] 陳繼方，王兵，劉穎，等． 氯吡格雷類似物的合成及其抗血小板聚集活性[J]．合成化學(xué)，2010，18(5)：586-590.

[9] 劉登科，王平保，趙專友，等． 噻吩并吡啶取代的乙酰肼衍生物[P]．中國(guó)，200 510 016 205.X，2005.

[10] 劉登科，劉穎，岳南，等． 一類含腈基的噻吩并吡啶酯類衍生物、其制備方法和用途[P]．CN，201 010 171 152.X，2010.

[11] Bousquet A, Calet S, Heymes A. 2-Thienylglycidic derivative,process for its preparation and its use as synthesis intermediate[P].US 5 132 435,1992.

[12] Savi P, Herbert J M, Pflieger A M,etal. Importance of hepatic metabolism in the antiaggregating activity of the thienopyridine clopidogrel[J].Biochemical Pharmacology,1992,44(3):527-532.

[13] Chen W Y, Lu J. Efficient esterification of ferrocenecarboxylic acid in ionic liquids[J].Chinese Chemical Letters,2004,15(10):1146-1148.