劉 亮 杜 江 姚 麗 羅海明

1.貴州省遵義醫(yī)藥高等?？茖W校，貴州 遵義 563002;2.貴州省貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002

苗藥觀音草正丁醇萃取工藝的研究

劉 亮1杜 江2姚 麗1羅海明1

1.貴州省遵義醫(yī)藥高等?？茖W校，貴州 遵義 563002;2.貴州省貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002

目的:優(yōu)選觀音草總皂苷的正丁醇萃取工藝。方法:采用正交試驗法，以提取液中總皂苷的含量為考察指標。結(jié)果:試驗設計三因素中正丁醇用量及萃取次數(shù)有顯著影響，最佳的萃取工藝為:用30倍量的正丁醇萃取5次，每次振搖時間30s。結(jié)論:本法操作簡便，經(jīng)濟、可行。

觀音草;正丁醇;萃取工藝

觀音草Reineckia carnea(Andr.)Kunth為百合科植物吉祥草的帶根全草，又名結(jié)實蘭，竹葉草，佛頂珠，小青膽，是一味著名的苗藥。苗醫(yī)藥理論認為其藥性為性冷，質(zhì)征為氣微味甜，入熱經(jīng)，走肺、肝二架，表、中、里三關，治療肺熱咳嗽，跌打損傷，瘡毒等。本試驗旨在為正丁醇萃取法提取觀音草中總皂苷在工業(yè)生產(chǎn)中的應用積累參數(shù)，為觀音草的進一步開發(fā)、利用提供試驗數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

UV75－18可見分光光度計 (天津市拓普儀器有限公司);DHG 90AOA型電熱恒溫鼓風干燥箱 (寧波江南儀器廠);Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申生科技有限公司);FY130型藥物粉碎機 (天津市泰斯特儀器有限公司);DKS－26型電熱恒溫水浴鍋 (寧波江南儀器廠)。

薯蕷皂苷對照品購于上海華壹生物科技有限公司 (批號:19057－60－4);觀音草藥材采集于貴州遵義，經(jīng)遵義醫(yī)藥高等專科學校張學愈副教授鑒定為百合科植物觀音草Reineckia carnea(Andr.)Kunth;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗設計

本試驗以觀音草中總皂苷的含量為指標，選擇正丁醇用量、萃取次數(shù)、振搖時間三因素為考察因素［1～3］，采用L9(34)正交設計表進行試驗。正交因素水平表見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2.2 供試品溶液的制備

準確稱取觀音草藥材粗粉5克，共2份，置索氏提取器中，在78℃水浴中，用20倍甲醇回流提取4h，得到兩份提取液。分別將兩份提取液回收甲醇后加入蒸餾水溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，合并兩份水溶液。準確吸取10mL水溶液于分液漏斗中，用石油醚分6次萃取 (15，10，10，10，10，10mL)，棄去石油醚液，水液再用水飽和正丁醇按照正交表L9(34)安排進行萃取，正丁醇萃取液用正丁醇飽和的水20mL洗滌，減壓回收正丁醇至干，殘渣用甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，作為供試品溶液［4］。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取薯蕷皂苷對照品1.2mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 標準曲線的制備

分別精密移取薯蕷皂苷對照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2mL置于10mL具塞試管內(nèi)，揮干甲醇，再分別加入5%的香草醛－冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，搖勻，密塞，60℃水浴顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，再加入5mL冰醋酸稀釋，搖勻，靜置10min，于460nm處測定其吸光度［5］。以吸光度 (A)為縱坐標，質(zhì)量濃度 (C)為橫坐標進行線性回歸。結(jié)果表明，薯蕷皂苷在4～24μg/mL與吸光度呈良好的線性關系?；貧w方程為A=0.019121C+0.006133，r=0.9995。標準曲線見圖1。

圖1 標準曲線

2.5 供試品溶液的測定

分別精密吸取供試品溶液0.2mL，按2.4項下的操作方法顯色，于460nm處作含量測定，試驗設計及數(shù)據(jù)處理結(jié)果見表2，方差分析見表3。

2.6 結(jié)果與方差分析

由表2分析可知最佳的萃取工藝為A3B3C3。由表3方差分析可知，各因素對總皂苷得率的影響大小順序為A＞B＞C，結(jié)果顯示正丁醇用量及萃取次數(shù)對總皂苷的得率有顯著影響，萃取時間無顯著性。因此，考慮實際情況，提取工藝調(diào)整為A3B3C1，即用30倍量 (與藥材的比例)的正丁醇萃取5次，每次振搖時間30s。

表2 L9(34)正交試驗結(jié)果

3 討論

由于皂苷類化合物在含水正丁醇中具有較大的溶解度，所以本試驗用水飽和的正丁醇作為純化提取皂苷的溶劑。正丁醇萃取法在工業(yè)生產(chǎn)中應用廣泛，與大孔樹脂吸附法比較，具有操作簡單、用時短、工藝成熟等優(yōu)點。本研究結(jié)果表明正丁醇的用量及萃取次數(shù)對總皂苷的含量有顯著性影響。故試驗的最佳工藝為用30倍量(與藥材的比例)的正丁醇萃取5次，每次振搖時間30s。

表3 方差分析表

［1］劉越，張旋，賈璞，等.珠子參薄層色譜鑒別方法的研究［J］.西北藥學雜志，2010，25(3):182－184.

［2］夏勇兵，李林珍，馬琳，等.響鈴草抗炎鎮(zhèn)痛活性部位的確定及其質(zhì)量控制方法的建立［J］.藥物分析雜志，2010，30(9):1599－1603.

［3］李少亮.天然甾體皂苷的提取分離現(xiàn)狀［J］.遼寧化工，2010，39(4):428－430.

［4］丁寧，杜江，賈憲生.黃褐毛忍冬總皂甙的含量測定［J］.貴陽中醫(yī)學院學報，2001，23(2):39－40.

［5］劉亮，杜江，潘爐臺，等.苗藥觀音草中總皂苷的含量測定［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2011，20(4):2－3.

R284.2

A

1007－8517(2011)20－0005－02

貴州省教育廳自然科學研究項目，黔教科 (2007)074號。

劉亮 (1981～)，男，漢，碩士研究生，主要從事中藥、民族藥化學成分及質(zhì)量研究。

2011.09.20)