廖 莉 孫婷婷 裴正玲 李 容 潘喬丹 黃鎖義

（1.北海廣播電視大學(xué)，廣西 北海536000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000)

超聲波提取紫露草總黃酮及其鑒別

廖 莉1孫婷婷2裴正玲2李 容2潘喬丹2黃鎖義2

（1.北海廣播電視大學(xué)，廣西 北海536000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000)

為充分利用紫露草植物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討紫露草總黃酮的提取及鑒別方法。采用超聲波乙醇浸提法從紫露草中提取黃酮類物質(zhì)，對(duì)所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測(cè)定含量。測(cè)得樣品中總黃酮的含量C=0.1562mg/ml，回收率為97.4%，其純度和產(chǎn)率均較高。該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取紫露草黃酮類物質(zhì)的有效途徑。

超聲波提??；紫露草；總黃酮；鑒別

紫露草（Tradescantia reflexa）別名紫花鴨草，為鴨跖草科多年生宿根草本，原產(chǎn)于北美，我國(guó)引種栽培。紫露草莖通常簇生，紫露草性喜涼爽，濕潤(rùn)氣候，耐寒性較強(qiáng)，適應(yīng)性廣，耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿，幾乎沒有病蟲害。最常見的是適應(yīng)性非常強(qiáng)的開藍(lán)紫色花的品種。我國(guó)各地均有栽培。紫露草性味淡、甘、涼，可以活血、利水、消腫、散結(jié)、解毒。能治療癰疽腫毒、結(jié)核、淋病等疾病。

近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)此振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)此的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對(duì)提取成分的影響。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取紫露草葉中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道，本文報(bào)道用超聲波提取紫露草總黃酮及鑒別。

（一）儀器與試劑

1.儀器

KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40KHz）；UV-755B紫外可見分光光度計(jì)；ZF-I型三用紫外分析儀；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵。

2.試劑

95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品；新鮮紫露草。

（二）方法與結(jié)果

1.總黃酮成分提取

取新鮮紫露草，烘干，粉碎。稱取紫露草粉末6g，加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩5～7ml為止，放置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.測(cè)定方法依據(jù)

以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定木瓜葉中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

3.定量實(shí)驗(yàn)—總黃酮的含量測(cè)定

（1）波長(zhǎng)的選擇。取樣品液適量，在0.30ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長(zhǎng)范圍測(cè)定螯合物的吸光度，螯合物于510nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故測(cè)定時(shí)選用此波長(zhǎng)。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白，于510nm處測(cè)定吸光度，見表1。根據(jù)上表得回歸方程：A=-2.9069×10-3+12.05C，r=0.9999。

表1 紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度

（3）提取物含量的測(cè)定。精密吸取樣品液 0.50ml，置10.00ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定其吸光度A=0.097，根據(jù)回歸方程：A=-2.9069×10-3+12.05C，計(jì)算樣品中總黃酮的含量C=0.1562mg/ml。

（4）回收實(shí)驗(yàn)。精密量取樣品液1.00ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品1.00ml（0.10mg/ml），同前樣品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，求出回收率為97.4% 。

4.定性實(shí)驗(yàn)—總黃酮的鑒別

（1）顏色反應(yīng)。紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。

濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?.5min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。

三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。

乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。

鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。

（2）紙層析。取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（體積比）為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點(diǎn)。

（三）討論

1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝簡(jiǎn)單，回收率為97.4%，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。

2.黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。紫露草分布廣泛，本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫露草中含有較為豐富的黃酮。因此，紫露草具有廣泛開發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用，加強(qiáng)資源開發(fā)。

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O624.42+1；O6-332

A

1008-1151(2011)04-0129-01

2010-01-06

廖莉（1965－），女，廣西北海人，北海廣播電視大學(xué)講師，從事教學(xué)科研等工作；黃鎖義，右江民族醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室教授，碩士研究生導(dǎo)師。