李仁偉，程明川，李 想，瞿 進(jìn)，鐘紅霞，嚴(yán) 峻，董 麗，唐 詩

(四川省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測院，四川成都610031)

凝膠滲透色譜-高效液相色譜法檢測食用油中鄰苯二甲酸酯類的含量

李仁偉，程明川，李 想，瞿 進(jìn)，鐘紅霞，嚴(yán) 峻，董 麗，唐 詩

(四川省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測院，四川成都610031)

建立了以凝膠滲透色譜(GPC)和高效液相色譜(HPLC)聯(lián)用技術(shù)檢測食用油中鄰苯二甲酸酯類含量的方法。樣品經(jīng)GPC處理后，采用乙腈/水體系為流動(dòng)相，ODS柱分離，PDA檢測器檢測，檢測波長224nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:該方法在0.1～8.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;DMP、DEP、BBP、DBP、DNOP的儀器檢出限(S/N=3)分別為10、10、25、50、50μg/L，低、中、高三個(gè)濃度水平的回收率均在95%～110%之間。結(jié)論:該方法準(zhǔn)確可靠，精密度較高。

凝膠滲透色譜(GPC)，高效液相色譜(HPLC)，鄰苯二甲酸酯類

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙酸乙酯(農(nóng)殘級(jí))，環(huán)己烷(農(nóng)殘級(jí))，乙腈(色譜級(jí)) 美國 Sigma公司;鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸丁芐酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP) 美國 chemservice公司，增塑劑標(biāo)準(zhǔn)品制備，各取100mg標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解后定容于100mL容量瓶中，配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

LC-20AT、PDA檢測器(HPLC) 日本島津公司;凝膠凈化色譜儀(GPC) 德國LC-Tech公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Heildoph公司;AE-200S電子天平 瑞士METTLER TOLEDO公司。

表2 回收率的測定(n=3)

1.2 色譜條件

色譜柱：intersil ODS-sp(5μm，4.6×150mm);流動(dòng)相：乙腈/水體系梯度洗脫［梯度洗脫程序：0～6min (乙腈85%)，6～7min(乙腈85%→100%)，7～17min (乙腈100%)］;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;檢測波長：224nm;進(jìn)樣量10μL。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 將鄰苯二甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈稀釋配制成0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)液相色譜分析后，將所得色譜峰的濃度和對(duì)應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3.2 樣品處理 稱取樣品1.0g(精確至0.1mg)，用乙酸乙酯-環(huán)己烷(體積比1∶1)定容至10.0mL，混勻，經(jīng)凝膠凈化色譜儀純化。進(jìn)樣量為5mL，洗脫液為乙酸乙酯-環(huán)己烷(體積比1∶1)，流速5.0mL/min，15～30min收集分離液，再減壓濃縮至近干，乙腈定容至5mL，經(jīng)過0.45μm濾膜過濾后，取10μL供HPLC檢測分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GPC條件

對(duì)GPC的收集時(shí)間進(jìn)行了考察，當(dāng)運(yùn)行時(shí)間達(dá)到15min時(shí)，能徹底去除油脂，當(dāng)運(yùn)行時(shí)間達(dá)到30min時(shí)，對(duì)加標(biāo)樣品測定的回收率達(dá)到最高值，且運(yùn)行時(shí)間再增加，回收率變化不大，結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，能較為徹底地除去樣品中的油份，分析時(shí)間短，同時(shí)有很好的回收率。

2.2 色譜條件

對(duì)吸收波長的考察表明，DMP、DEP、BBP、DBP、DNOP五種物質(zhì)均在224nm處有最大吸收。對(duì)流動(dòng)相的考察表明，在相同條件下乙腈/水體系流動(dòng)相的背景響應(yīng)低于甲醇/水體系，對(duì)PAEs各組分的分離效果更好;乙腈檢測截止波長為190nm，低于甲醇的截止波長205nm，對(duì)色譜圖干擾相對(duì)較小，確定選擇乙腈/水體系。分別對(duì)柱溫25、30、35、40、45℃進(jìn)行考察，結(jié)果表明隨柱溫的升高，各組分保留時(shí)間有一定減小，響應(yīng)值略有增加;隨柱溫升高，BBP與DBP的色譜峰靠近，分離度降低;柱溫35℃時(shí)，BBP和DBP的峰寬也影響了分離度，只有40℃時(shí)分離度大于1.5，因此，柱溫確定為40℃。標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖1所示。

2.3 檢出限與線性范圍

圖1 PAEs標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜圖

儀器自動(dòng)計(jì)算S/N=3時(shí)各組分響應(yīng)值對(duì)應(yīng)的最低檢出濃度分別為 DMP=9.926μg/L、DEP= 12.729μg/L、BBP=26.954μg/L、DBP=47.177μg/L、DNOP=39.211μg/L。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，按3倍信噪比水平，DMP、DEP檢出限為10μg/L，BBP檢出限為25μg/L，DBP、DNOP檢出限為50μg/L。該結(jié)果與儀器直接計(jì)算的最低檢出濃度基本一致，確定為儀器的最終檢出限。精密吸取PAEs各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，制成0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L系列水平濃度，以峰面積為縱坐標(biāo)，PAEs各組分濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程見表1。結(jié)果表明，PAEs各組分在0.1～8.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 標(biāo)準(zhǔn)校正曲線

2.4 精密度與加標(biāo)回收率

取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD≤1%;對(duì)同一加標(biāo)樣品平行處理6份，RSD≤5%，實(shí)驗(yàn)表明，方法的精密度良好。將加標(biāo)量不同的樣品應(yīng)用本方法進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)(n=6)，方法的回收率在95%～110%之間。

3 結(jié)論與討論

采用凝膠滲透色譜-高效液相色譜聯(lián)用法檢測食用油中的鄰苯二甲酸酯類的含量，方法學(xué)實(shí)驗(yàn)表明該方法準(zhǔn)確可靠，并采用該方法連同本課題組另建立的GC-MS法和HPLC-MS/MS法對(duì)157批次的金屬蓋玻璃瓶裝含油脂類調(diào)味品和192批次的食用植物油進(jìn)行了檢測，共有47個(gè)樣品檢出鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，包括20個(gè)金屬蓋玻璃瓶裝含油脂類調(diào)味品和食用植物油27個(gè)樣品，前者檢出主要為DIBP，后者檢出為DEHP。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，盡管每個(gè)時(shí)間段內(nèi)抽檢的樣品數(shù)量不同，但檢出率逐漸增加，PAEs組分隨貯存時(shí)間的延長，其遷移風(fēng)險(xiǎn)也加大。

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Determination of phthalic acid esters in edible oil by gel permeation chromatography and HPLC spectrometry

LI Ren-wei，CHENG Ming-chuan，LI Xiang，QU Jin，ZHONG Hong-xia，YAN Jun，DONG Li，TANG Shi
(Sichuan Institute of Product Quality Supervision＆Inspection，Chengdu 610031，China)

The method for determination of phthalic acid esters in edible oil by gel permeation chromatography and HPLC was described.The chromatographic analysis was achieved after the pretreatment by GPC.The separation was performed in a ODS column，acetonitrile-water as mobile phase.A PDA detector was used to detect the compositions at 224nm.The assay linear calibration range was 0.1～8.0mg/L.The limit of quantitation(S/N=3)of DMP，DEP，BBP，DBP，DNOP were 10，10，25，50，50μg/L，respectively.The recoveries at the three spiked levels were ranged from 95%to 110%.The results of repeatability test and reproducibility test provided that this method was repeatable and reproducible.

gel permeation chromatography(GPC);high performance liquid chromatographi(HPLC);phthalic acid esters

TS207.5

A

1002-0306(2011)12-0484-03

鄰苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)又名酞酸酯，為一類普遍使用的化學(xué)工業(yè)產(chǎn)品，主要用作塑料的加工助劑之一，即增塑劑(Plasticizer)。PAEs是目前主要的環(huán)境有機(jī)污染物之一，其毒性及危害是具有微弱的雌激素效應(yīng)，產(chǎn)生生殖毒性，導(dǎo)致生物繁殖能力下降和生殖器官畸形，還有致突變和致癌作用。歐盟2005/84/EC指令、REACH指令、RoHS指令2.0版，美國2008消費(fèi)品安全改進(jìn)法案(CPSIA)以及我國國家標(biāo)準(zhǔn)都針對(duì)不同產(chǎn)品嚴(yán)格規(guī)定了鄰苯二甲酸酯類禁止使用的種類和限量。食品在塑料包裝材料中儲(chǔ)存的時(shí)間越長，或用于包裝食品的塑料材料中鄰苯二甲酸酯類含量越高，都會(huì)加大鄰苯二甲酸酯類向食品中遷移的量，即對(duì)食品的污染程度越大［1］。目前，鄰苯二甲酸酯類增塑劑的測定方法包括GC法［2］、GC-MS法［3-6］、HPLC法［7-8］及HPLC-MS法［9-10］，提取技術(shù)主要有超聲提取、索氏提取、固相萃取等，但這些方法存在著試劑毒性較大/過程復(fù)雜/消耗時(shí)間長等缺點(diǎn)。本文首次建立了GPC-HPLC聯(lián)用檢測食用植物油中鄰苯二甲酸酯類的方法，此方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、自動(dòng)化程度高。

2010-12-15

李仁偉(1965-)，男，高級(jí)工程師，研究方向:食品科學(xué)。

四川省公益性科技計(jì)劃項(xiàng)目(2008NG0008)。