北京四環(huán)科寶制藥有限公司（100070） 曹相林 陳婧 魏墨璽

二甲雙胍格列吡嗪片為治療糖尿病的復方制劑，包括格列吡嗪和鹽酸二甲雙胍兩種藥物成分，兩種藥物成分的抗糖尿病作用機制相互補充，提高了對血糖的控制。其有關(guān)物質(zhì)成分的測定方法在USP31[1]中有收載，本研究采用USP31中有關(guān)物質(zhì)的測定方法檢測二甲雙胍格列吡嗪片時，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)峰的分離度達不到要求，不能對雜質(zhì)有效檢出。因此本研究通過大量試驗建立了一種能夠有效檢測復方制劑二甲雙胍格列吡嗪片有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法，并申請了專利。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺對照品（批號：100282-200001）、雙氰胺對照品（批號：100206-200302）、鹽酸二甲雙胍對照品（批號：100664-200602）、格列吡嗪對照品（批號：100281-200602）均購自中國藥品生物制品鑒定所；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗證

2.1 色譜條件的建立 參考中國藥典2010年版[2]中關(guān)于鹽酸二甲雙胍和格列吡嗪的有關(guān)物質(zhì)色譜條件，初步確定采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，在同一色譜條件下檢查二甲雙胍格列吡嗪片的有關(guān)物質(zhì)。進行了如下篩選：①磷酸二氫銨溶液（稱取1.15g磷酸二氫銨和4.32g辛烷磺酸鈉，加水至1000ml，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.05）-乙腈（80：20）為流動相。檢測波長225nm。柱溫：30℃。②將①項下流動相的比例調(diào)整為85：15。③以磷酸二氫銨溶液（0.575g磷酸二氫銨和4.32g辛烷磺酸鈉，加水1000ml，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.05）-乙腈（83：17）為流動相。檢測波長225nm。柱溫：30℃。④將③項下流動相的比例調(diào)整為84：16。結(jié)果發(fā)現(xiàn)④的色譜條件使各雜質(zhì)峰的分離度達到要求。

2.2 檢測波長的確定 分別取兩種主藥及其特殊雜質(zhì)適量，加流動相配制成適宜濃度的溶液。分別于200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，四種物質(zhì)均在225nm附近有最大吸收，并且格列吡嗪和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺在275nm均有較強吸收。結(jié)合破壞試驗的結(jié)果，為減小鹽酸二甲雙胍對格列吡嗪和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺測定的干擾，最終確定鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)測定的檢測波長為225nm，格列吡嗪有關(guān)物質(zhì)的檢測波長為275nm。

2.3 最小檢測限的確定 通過試驗確立了雙氰胺和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺的最小檢測限分別為0.1ng和0.5ng。靈敏度符合要求。

2.4 輔料干擾試驗 經(jīng)試驗驗證選用本研究中的HPLC測定方法，空白輔料不干擾樣品的雜質(zhì)檢測。

2.5 破壞試驗 取格列吡嗪原料、二甲雙胍格列吡嗪片、鹽酸二甲雙胍與空白輔料、鹽酸二甲雙胍原料、格列吡嗪與空白輔料分別進行酸、堿、氧化、高溫及光照等試驗。試驗結(jié)果表明，在本研究建立的色譜條件下，主峰與有關(guān)雜質(zhì)及降解物的雜質(zhì)峰能夠完全分離，說明此色譜條件可以完全滿足樣品有關(guān)物質(zhì)的測定。

2.6 樣品測定 按本研究中建立的HPLC測定方法和USP31分別對同一批二甲雙胍格列吡嗪片進行了檢測。對樣品中鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)中已知雜質(zhì)雙氰胺和未知雜質(zhì)的單雜和總雜的檢測結(jié)果表明，新建立的HPLC測定方法均比USP31的方法檢測靈敏度高。對樣品中格列吡嗪有關(guān)物質(zhì)的測定結(jié)果表明，新建立的HPLC測定方法能夠使已知雜質(zhì)苯磺酰胺有效檢出，分離度達到要求；而在USP31方法的色譜條件下，已知雜質(zhì)苯磺酰胺和格列吡嗪出峰時間非常接近，兩者基本重合為一個峰，不能使苯磺酰胺有效檢出。結(jié)果見附表。

附表 二甲雙胍格列吡嗪片有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

本研究通過進行流動相的篩選、檢測波長的確定、最小檢測限的確定、輔料干擾試驗、破壞試驗及與美國藥典方法的對比檢測實驗等相關(guān)研究，重新建立了二甲雙胍格列吡嗪片的有關(guān)物質(zhì)測定方法，該方法快速準確，重現(xiàn)性好，可用于二甲雙胍格列吡嗪片的質(zhì)量控制。