北京市海淀區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100083）張靜 劉志杰 李東輝

維生素B12片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》第十一冊(cè)，含量測(cè)定采用紫外分光光度法。維生素B12光學(xué)穩(wěn)定性差，一般采用包糖衣這種劑型。糖衣對(duì)紫外吸收有影響，這就要求在避光條件下剝?nèi)ヌ且隆４朔ㄙM(fèi)時(shí)且對(duì)人員操作要求高，結(jié)果重現(xiàn)性差。筆者采用高效液相色譜法，排除了糖衣包衣對(duì)含量測(cè)定的影響，省去了剝?nèi)ヌ且碌姆爆嵅襟E，從而解決了重現(xiàn)性差的問(wèn)題。

附圖 維生素B12 HPLC色譜圖

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津LC-20AT，島津SPD20A檢測(cè)器，LCsolution色譜工作站；電子天平：sartorius BP211D（d=0.01mg）。維生素B12對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)： 100248-200201）；乙腈（色譜純），磷酸二氫鉀（分析純）；維生素B12片3批（批號(hào)為C 090102；C 090302；C 080703）及空白輔料（由山西云鵬制藥有限公司提供）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 參考文獻(xiàn)[1～3]中選用色譜柱：SymmetryC18（150mm×4.6mm，5μm）（Waters），流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（13∶87），檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm，室溫，流速：1.0ml·min-1，進(jìn)樣量10μl，理論板數(shù)按維生素B12峰計(jì)算不低于2000，空白輔料無(wú)干擾。見(jiàn)附圖。

2.2 溶液的制備 （避光操作）

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取維生素B12對(duì)照品10.20mg，置200ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取維生素B12片（25μg）50片，置25ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取廠家提供的空白輔料同法制備。

2.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別取上述對(duì)照品溶液5μl，8μl，10μl，12μl，15μl注入液相色譜儀，每個(gè)進(jìn)樣梯度連續(xù)進(jìn)樣3次，取平均值，以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，方程為Y=1.162×106X+6.920×103，線性范圍為0.255～0.765μg/ml。

2.4 精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，維生素B12峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.27%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液，分別于0，2，4，8小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，維生素B12峰面積基本保持不變，RSD為0.87%。

2.6 回收率試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液12.5ml，維生素B12片（25μg）25片，置同一25ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。根據(jù)峰面積計(jì)算其回收率（n=3）為98.5%，RSD為0.08%。

2.7 最低檢測(cè)限 將對(duì)照品溶液逐步稀釋，以信噪比為3作指標(biāo)，測(cè)得維生素B12的最低檢測(cè)限分別為 2ng。

2.8 樣品測(cè)定 按上述色譜條件進(jìn)樣10μl分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，3批樣品含量依次為102.5%（n=3，RSD=0.2%）、103.3%（n=3，RSD=0.1%）、102.8%（n=3，RSD=0.2%）。

3 討論

本文采用HPLC法測(cè)定維生素B12片含量。本法省去剝糖衣步驟，直接加樣溶于容量瓶中，過(guò)濾后測(cè)定，減少了避光操作帶來(lái)的不便。此法操作方便，快速，重現(xiàn)性好，可用做測(cè)定維生素B12含量的方法。