王熙平 唐新(通訊作者) 鐘文

(1、廣西桂玉醫(yī)藥有限責(zé)任公司 廣西玉林 537000; 2、廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司 南寧 530003)

氧氟沙星栓(Ofloxacin Suppositories)為喹諾酮類抗菌藥,對細菌性陰道病具有良好的療效,臨床上用于細菌性陰道炎[1～3]。氧氟沙星栓的含量測定在新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)[4]中采用的是紫外分光光度法,但專屬性差,不能排除雜質(zhì)的干擾,本文改用高效液相色譜法進行測定,可提高專屬性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。

圖1 對照品(A)、樣品(B)、陰性對照品(C)色譜圖Fig.1 HPLCchromatograms of reference substance(A),sample(B)and negative sample without Ofloxacin nitrate(C)

1 儀器與試藥

威瑪龍LC-9000D一體化高效液相色譜儀,南寧市威瑪龍色譜科技有限公司,配有LC-9000D色譜工作站。Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱,5μm,4.6 mm×250mm。

氧氟沙星對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號：130454-200403),乙腈、三乙胺為色譜純,水為高純水,其它試劑均為分析純。氧氟沙星栓及缺氧氟沙星的陰性對照樣品為廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司自制樣品。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料;以0.5mol/L枸櫞酸溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至4.0)-乙腈(85∶15)為流動相;檢測波長295nm;流速為1.0mL/min;柱溫為室溫。

2.2 測定方法

精密稱取氧氟沙星對照品適量,用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋成約含氧氟沙星100 g/mL的溶液,作為對照品溶液;另取本品10粒,切細混勻,精密稱取適量,加入少量0.1mol/L鹽酸溶液溫?zé)釘嚢枋谷芙?再加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋成約含氧氟沙星100 g/mL的溶液,濾過,續(xù)濾液作為供試品溶液。取2種溶液各10μL,用外標(biāo)法以主峰面積定量。

2.3 色譜效果

以0.1mol/L鹽酸溶液為溶劑,制備對照品溶液、樣品溶液及不含主藥的空白樣品溶液,在上述色譜條件下,取10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,輔料在此處無吸收峰出現(xiàn),不干擾主藥的含量測定。色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系

精密稱取氧氟沙星對照品50.04mg,置100mL量瓶中,再加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋置刻度,搖勻,備用。分別精密吸取以上對照品溶液1、3、5、10、15、20mL,分別置25mL容量瓶中,加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,進樣測定。以對照品含量為縱坐標(biāo),峰面積積分值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,則回歸方程為：Y＝+1.56E-8*X-1-3.10E-03,r＝0.999861,表明氧氟沙星在20.02～400.32μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 含量測定結(jié)果(相對標(biāo)示量%,n=2)

2.5 精密度實驗

取對照品溶液重復(fù)進樣5次,每次10μL,測得氧氟沙星的峰面積的RSD為0.54%。

2.6 重復(fù)性實驗

對同一批供試品(批號060414),按正文擬訂的方法平行測定6份,結(jié)果氧氟沙星的平均值為98.94%(RSD=0.45%,n=6),結(jié)果表明,本法的重復(fù)性較好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取同一供試品溶液(批號060414)在室溫下立即測定,放置4、8、12、16、20、24h重新測定,結(jié)果峰面積測得值分別為7139963、7189910、7066691、7119773、7149118、6890728、6987503,平均值為7077669.43,RSD為1.38%,峰面積基本一致,表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率實驗

取空白基質(zhì)約0.08g(80mg),共9份,精密稱定,置100mL量瓶中,加0.1mol/L鹽酸溶液適量,另分別精密稱取氧氟沙星對照品8、8、8、10、10、10、12、12、12mg,分別加入以上量瓶中,水浴中溫?zé)岵r時振搖使基質(zhì)及氧氟沙星溶解,放冷,加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,制成3個不同濃度的供試品溶液((約相當(dāng)于供試品溶液濃度的80%、100%、120%)各3份;分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL注入液相色譜儀,記錄峰面積。按外標(biāo)法計算回收率分別為99.80%、99.51%、100.035、99.33%、99.565、99.18%、99.03%、99.135、98.40%,平均回收率為99.33%,RSD為0.45%。

2.9 樣品測定

精密稱取氧氟沙星對照品適量,用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋成約含氧氟沙星100 g/mL的溶液,作為對照品溶液;另取本品10粒,切細混勻,精密稱取適量,加入少量0.1mol/L鹽酸溶液溫?zé)釘嚢枋谷芙?再加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋成約含氧氟沙星100 g/mL的溶液,濾過,續(xù)濾液作為供試品溶液。取2種溶液各10μL,用外標(biāo)法以主峰面積定量。另按文獻[4]法測定含量現(xiàn)行方法所測含量偏高,而高效液相色譜法測定結(jié)果則較為準(zhǔn)確,2種測定方法的偏差均在合格范圍內(nèi),可作為本品的含測方法,見表1。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

氧氟沙星能溶于酸性溶液,故采用0.1mol/L鹽酸溶解,但需充分振搖。

3.2 波長的選擇

在200～400nm波長范圍進行掃描,結(jié)果顯示,氧氟沙星對照品溶液和供試品溶液均在295nm波長處有最大吸收,故本法選295nm為紫外檢測波長。

3.3 小結(jié)

本文建立的高效液相色譜法與原標(biāo)準(zhǔn)比較,結(jié)果較為準(zhǔn)確,且簡便、快速、專屬性強、可靠。

[1] 張瑜,王玉啟.氧氟沙星栓劑的研制及臨床應(yīng)用[J].中國基層醫(yī)藥,2001,8(4)：360.

[2] 馬建新.氧氟沙星栓劑的制備及臨床應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2003,20(4)：333～335.

[3] 杜金芳,張靜.氧氟沙星栓劑治療淋球菌性陰道炎120例[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,25(5)：406.

[4] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-027)-2002Z[S].28～167.