李慧麗，呂程云

（太原市中心醫(yī)院，山西太原030009）

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

中華真地鱉煎液（濃度0.5 mg/mL，由太原市中心醫(yī)院中藥房提供），X線攝片儀（德國(guó)西門子公司），雙能X線骨密度儀（美國(guó)Lunar公司），全自動(dòng)石蠟包埋機(jī)（EG-1140H，LEICA BioMED），輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（RM2125，LEICA BioMED），圖像攝影成像系統(tǒng)（020-507010，LEICA BioMED），新西蘭白兔（太原市畜牧所）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 新西蘭白兔骨折模型的構(gòu)建及分組 新西蘭白兔24只，體重3 kg～4 kg，雌雄不限，造雙側(cè)前肢橈骨中段骨缺損，按組間均衡一致原則隨機(jī)分為2組，每組12只。對(duì)照組每天給予生理鹽水灌胃，實(shí)驗(yàn)組每天給予中藥土元煎液1 mL/（kg·d）灌胃。

1.2.2 X線攝片 術(shù)后第20天、第35天、第60天，每組隨機(jī)取4只兔子，處死后取出前臂尺橈骨，肉眼觀察血腫轉(zhuǎn)化及斷端大體情況，行X線攝片，觀察骨折愈合及骨折線處骨痂生長(zhǎng)情況。

1.2.3 骨密度測(cè)量 應(yīng)用雙能X線骨密度儀對(duì)包括骨折處兩端各0.5 cm骨質(zhì)進(jìn)行骨密度測(cè)量。各組、各時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.4 HE染色 蘇木素染液染色5 min，自來(lái)水洗1 min。鹽酸酒精中分化30 s，自來(lái)水洗1 min。稀氨水反藍(lán)30 s，自來(lái)水洗1 min。切片浸入伊紅染液內(nèi)復(fù)染4 min，自來(lái)水洗1 min。梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，同一時(shí)間計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 X線攝片結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)圖1。

術(shù)后第15天：對(duì)照組骨折斷端骨折線較清晰，周圍骨痂生長(zhǎng)較少；實(shí)驗(yàn)組骨折線較模糊，骨折處及周圍密度影高，骨痂較多。術(shù)后第30天：對(duì)照組骨折斷端骨折線仍清晰可見(jiàn)，周圍骨痂生長(zhǎng)少；實(shí)驗(yàn)組骨折處連續(xù)，骨折線較模糊，有大量的連續(xù)骨癡生長(zhǎng)。術(shù)后第60天：對(duì)照組骨折斷端骨折線模糊，斷端有大量骨癡生長(zhǎng)；實(shí)驗(yàn)組骨折線消失，骨皮質(zhì)連續(xù)，周圍有少許外骨痂，髓腔已通。

2.2 各組不同時(shí)間點(diǎn)骨密度測(cè)量結(jié)果比較

各組標(biāo)本用雙能X線骨密度儀測(cè)定，術(shù)后第15天、第30天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組骨密度值高于對(duì)照組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后第60天時(shí)，對(duì)照組骨密度值高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05）；在實(shí)驗(yàn)組中，與其他時(shí)間段比較，第30天時(shí)骨密度值最高（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)骨密度測(cè)量結(jié)果 （g/cm2± s）

表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)骨密度測(cè)量結(jié)果 （g/cm2± s）

注：與對(duì)照組比較，1）P<0.05

組別 n對(duì)照組 12實(shí)驗(yàn)組 12第15天 第30天 第60天0.093±0.005 0.101±0.010 0.167±0.022 0.142±0.0111） 0.193±0.0191） 0.096±0.0081）

2.3 HE染色結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)圖2。術(shù)后第15天：對(duì)照組骨折斷端髓腔內(nèi)可見(jiàn)少量紅細(xì)胞，較多的纖維組織增生和骨小梁；實(shí)驗(yàn)組骨折斷端處可見(jiàn)大量骨小梁形成。術(shù)后第30天：對(duì)照組骨折斷端處有較多的骨小梁，骨小梁邊緣處散在骨基質(zhì)形成，可見(jiàn)少量小血管增生；實(shí)驗(yàn)組骨折斷端處大量骨小梁融合成片，較多骨基質(zhì)形成。術(shù)后第60天：對(duì)照組骨折斷端處骨小梁的邊緣有成片的骨基質(zhì)形成；實(shí)驗(yàn)組骨折斷端處可見(jiàn)成熟的板層骨。

圖2 HE染色結(jié)果

3 討論

地鱉蟲(chóng)功效始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有破瘀血、續(xù)筋骨的功效，現(xiàn)代中藥學(xué)已證實(shí)其主要含有正己烷與正丁醇提取物［3］［如β-谷甾醇（Ⅱ）、鯊肝醇（Ⅲ）、尿嘧啶（IV）、尿囊素（VI）］、石油醚提取物，（如膽甾醇、棕櫚酸、5，4-二羥基-7-甲氧基黃酮）［4］、脂溶性維生素、氨基酸與蛋白質(zhì)和礦物元素等其他成分［5-6］。

本研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組骨痂生成量、骨折端修復(fù)及髓腔再通等方面明顯優(yōu)于對(duì)照組，特別是表現(xiàn)早、中期，其骨痂生成量明顯多于同時(shí)期的對(duì)照組，間接表明地鱉蟲(chóng)可顯著增加早、中期骨折斷端髓腔內(nèi)外骨痂生成。HE染色結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組膠原纖維、軟骨組織、骨小梁及骨基質(zhì)的形成時(shí)均早于對(duì)照組。

雙能X線吸收測(cè)定法（DEXA）可精確地測(cè)量出全身任何部位的骨量，反映局部骨礦物質(zhì)的含量，精準(zhǔn)地預(yù)測(cè)骨折斷端愈合程度。術(shù)后第15天、第30天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組橈骨骨折愈合程度優(yōu)于對(duì)照組。第60天時(shí)，對(duì)照組骨密質(zhì)值高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05），但并不表示對(duì)照組橈骨骨折愈合程度要優(yōu)于實(shí)驗(yàn)組，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)組骨折愈合端的髓腔已通，骨小梁的重建基本已完成，而對(duì)照組正處于骨痂生成的高峰期，因此表現(xiàn)出實(shí)驗(yàn)組“相對(duì)地”骨密度低，而實(shí)際上骨折已經(jīng)愈合。

進(jìn)一步了解中華真地鱉促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制，需要利用分子生物學(xué)及組織工程學(xué)等現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)技術(shù)從蛋白質(zhì)水平，甚至基因水平來(lái)研究地鱉蟲(chóng)的成分及其作用機(jī)制。

［1］李長(zhǎng)福，唐慶峰，張瑞昌，等.中華真地鱉生物學(xué)特性初步研究［J］.昆蟲(chóng)知識(shí)，2003，40（3）：258-261.

［2］付英杰，田景振，郭之平.土鱉蟲(chóng)化學(xué)成分制取方法及藥理作用研究概況［J］.食品與藥品，2005，7（4A）：28-30.

［3］盧穎，江佩芬.土鱉蟲(chóng)化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，1992，17（8）：487.

［4］金向群.土鱉蟲(chóng)脂溶性成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，1993，18（6）：355-366.

［5］楊耀芳.土蟞蟲(chóng)藥效的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.中藥材，2002，25（2）：150-152.

［6］Zhang Y Y，Xuan W J，zhao J L，et al.The complete mitochondrial genome of the cockroach Eupolyphaga sinensis（Blattaria：Polyphagidae）and the phylogenetic relationships within the Dictyoptera［J］.Mol Biol Rep，2010，37（7）：3 509-3 516.