彭道勇 王蘇平 李 迪 張志清 朱曉鈺

（大連市中心醫(yī)院，遼寧 大連 116021）

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是造成中毒性死亡最常見(jiàn)的窒息性氣體，部分患者經(jīng)過(guò)數(shù)日或數(shù)周的假愈期后，還會(huì)發(fā)生遲發(fā)性腦?。╠elayed neuropsychologic sequelae，DNS），臨床表現(xiàn)為一組以急性癡呆為主的精神神經(jīng)功能紊亂，其發(fā)病機(jī)制不清。本研究檢測(cè)CO中毒遲發(fā)記憶障礙的小鼠血CD11b/CD18的表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選用健康昆明小鼠80只，體質(zhì)量18～20g，鼠齡2～3個(gè)月，每籠5只溫室飼養(yǎng)。99.9%CO氣體；熒光素（PE）標(biāo)記的小鼠CD61抗體及同型對(duì)照；流式細(xì)胞儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備

將小鼠飼養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境后行光電刺激小鼠條件反射跳臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練，讓小鼠學(xué)會(huì)跳上安全臺(tái)。

1.3 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒

采用按體質(zhì)量（1.5mL/10g）每間隔6h連續(xù)8次注射99.9%的CO氣體致小鼠中毒進(jìn)行染毒。

1.4 遲發(fā)記憶障礙小鼠的篩選

小鼠CO中毒后第1、3、5、7、11、15、20、25、30d，分別利用光電刺激小鼠條件反射跳臺(tái)儀記錄小鼠跳下安全臺(tái)的跳臺(tái)潛伏期，作為評(píng)價(jià)小鼠的記憶保持鞏固能力的指標(biāo)。篩選出遲發(fā)記憶障礙小鼠。

1.5 標(biāo)本制備

從小鼠眶動(dòng)脈和眶靜脈采血0.5mL（3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝），按步驟制備標(biāo)本：100μL全血+10μL對(duì)照試劑，100μL全血+10μL實(shí)驗(yàn)試劑避光孵育15min，自動(dòng)定溶到1mL，上機(jī)待測(cè)。

1.6 中毒小鼠血小板CD11b/CD18水平測(cè)定

用流式細(xì)胞儀檢測(cè)標(biāo)本，每管收集10000個(gè)CD11b/CD18陽(yáng)性血小板，記錄CD11b/CD18的強(qiáng)度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 CO中毒小鼠記憶保持能力的改變

小鼠腹腔注射CO中毒后第1d記憶保持能力明顯受損，第3d基本恢復(fù)正常，在第5、7、11d的測(cè)試中各有2只、第15、20d各有1只小鼠再次出現(xiàn)記憶保持能力受損。將再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的8只小鼠（標(biāo)記為A組）；在未再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的觀察組中隨機(jī)抽取8只小鼠（標(biāo)記為B組）。與B組相比較，A組小鼠記憶保持能力明顯受損（P＜0.01）；碳氧血紅蛋白（COHb）無(wú)明顯變化。

2.2 流式細(xì)胞儀測(cè)定小鼠血白細(xì)胞表面黏附分子CD11b/CD18表達(dá)水平

與B組相比較，A組血CD11b/CD18表達(dá)增加，呈顯著性差異（P＜0.05 ），見(jiàn)表1。

表1 兩組小鼠記憶保持能力、COHb、血白細(xì)胞表面黏附分子CD11b/CD18表達(dá)（ ±s）

表1 兩組小鼠記憶保持能力、COHb、血白細(xì)胞表面黏附分子CD11b/CD18表達(dá)（ ±s）

注：與B組相比較*P＜0.05；#P＜0.01

n 記憶保持能力（s）COHb（%）CD11b/CD18（熒光指數(shù)）A組 8 73.75±55.23 4.53±0.65 43.28±2.56*B組 8 268.25±30.05# 4.39±0.68 29.02±2.08

3 討 論

對(duì)于急性CO中毒，缺血缺氧機(jī)制易被大家認(rèn)同[1]。但單純的缺血缺氧無(wú)法解釋遲發(fā)性腦病的發(fā)病，因此提示另有其他機(jī)制參與了本病的發(fā)生、發(fā)展。近年來(lái)關(guān)于缺血性腦卒中后炎性反應(yīng)在缺血性腦損傷中所起的重要作用已被證實(shí)[2,3]。但CO中毒后缺血缺氧狀態(tài)下炎性反應(yīng)對(duì)腦組織的影響報(bào)告很少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立急性CO中毒動(dòng)物中毒模型，對(duì)中毒后遲發(fā)記憶礙小鼠多形核白細(xì)胞黏附分子CD11b/CD18的表達(dá)進(jìn)行了研究。

CD11b/CD18屬于白細(xì)胞黏附分子整合素β2亞家族成員，其表達(dá)和活性受多種趨化因子調(diào)節(jié)，可與多種配體相互作用，在細(xì)胞間黏附和炎性反應(yīng)中發(fā)揮生物學(xué)作用。正常情況下，CD11b/CD18僅在單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞膜上呈低水平表達(dá)。在炎性反應(yīng)時(shí)，局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞被受損組織中產(chǎn)生的大量炎性介質(zhì)激活，使CD11b/CD18表達(dá)迅速增加，促使中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，進(jìn)而中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)到外周組織，釋放氧自由基和蛋白酶，最終造成組織損傷和壞死。有文獻(xiàn)報(bào)道，腦缺血后CD11b/CD18含量明顯升高，其表達(dá)量與腦組織損傷的嚴(yán)重程度有關(guān)[4]。

本實(shí)驗(yàn)觀察到CO中毒后遲發(fā)記憶障礙小鼠外周血多形核白細(xì)胞CD11b/CD18表達(dá)顯著增高，說(shuō)明CO中毒后，炎性反應(yīng)對(duì)血管、組織的損傷持續(xù)存在，這可能是出現(xiàn)CO中毒遲發(fā)腦病的病理原因之一。文獻(xiàn)報(bào)道，地塞米松可以抑制因大鼠缺血性腦損傷引起的白細(xì)胞黏附、浸潤(rùn)等功能[5]。腎上腺皮質(zhì)激素可能減輕和縮短細(xì)胞黏附分子的作用。在高壓氧治療及改善腦缺血基礎(chǔ)上，配合腎上腺皮質(zhì)激素及抗血小板聚集治療就會(huì)對(duì)CO中毒遲發(fā)腦病產(chǎn)生更好的療效。

[1]Kwon OY,Chung SP,Ha YR.Delayed postanoxic encephalopathy after carbon monoxide poisoning [J].Emerg Med J,2004,21(2)：250-251.

[2]張海英,劉郁,趙敏.一氧化碳中毒大鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子、白介素-10的時(shí)程變化[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2002,11(4)：227-228.

[3]Yang J, Zhao X, Zhou Q, et al.Effects of nimodipine and fructose-1,6-diphosphate on cerebral damage in carbon monoxide poisoning mice[J].Chin Med J (Engl).2003,116(12)：1911-1915.

[4]葛環(huán),高春錦,趙立明.高壓氧對(duì)一氧化碳中毒大鼠血小板CD61及多形核白細(xì)胞CD11b/CD18表達(dá)的影響[J].中華航海醫(yī)學(xué)與高氣壓醫(yī)學(xué)雜志,2002,9(2)：135-138.

[5]劉建東,唐汝愚.地塞米松抑制白細(xì)胞功能防治大鼠腦缺血性損傷研究[J].西南國(guó)防醫(yī)藥,1995,5(1)：6-9.