陳曉梅

（安徽環(huán)球藥業(yè)股份有限公司，安徽 蚌埠 233010）

依托泊苷（etoposide）為鬼臼毒素（podophyllotoxin）的糖代謝產(chǎn)物，屬細(xì)胞周期特異性抗腫瘤藥物，主要用于治療小細(xì)胞肺癌、淋巴癌等[1]。目前主要有片劑、膠囊、注射劑等劑型供臨床使用，這些劑型在胃腸道溶出度較差，生物利用度不高，制成自乳化微乳制劑可提高其溶出度，有助于藥物的吸收，且有望解決臨床口服制劑存在的因溶解吸收不同而導(dǎo)致的個(gè)體差異較大的問(wèn)題[2]。本文研究測(cè)定依托泊苷自乳化膠囊的含量和體外溶出度，以便更好的研究其體內(nèi)給藥情況。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀，色譜柱：VP-ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），CBM-102色譜工作站。依托泊苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100388-200701）；依托泊苷（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：070502）；依托泊苷自乳化膠囊：浙江瑞達(dá)藥業(yè)有限公司杭州賽利藥物研究所制備（批號(hào)：081009，081025，081106，規(guī)格：25mg/粒）；進(jìn)口依托泊苷膠囊（參比制劑，日本化藥株式會(huì)社，規(guī)格25mg/粒，批號(hào)：RH0312）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 依托泊苷自乳化膠囊的制備

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)[3]，以自乳化時(shí)間和乳化粒徑為指標(biāo)，以表面活性劑吐溫80、助表面活性劑丙二醇與油相硬脂酸作為研究的3 因素，每因素設(shè)計(jì)3水平，即3×3析因設(shè)計(jì)方案，按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表試驗(yàn)。最終確定處方為：1g/粒膠囊中依次加入25mg依托泊苷原料藥和10%苯甲醇、2%枸櫞酸、13%吐溫80、10%丙二醇、62.5%油相硬脂酸，混勻，經(jīng)含量測(cè)定合格后裝入膠囊，制備成25mg/粒的托泊苷自乳化膠囊。

2.2 樣品測(cè)定

2.2.1 樣品的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取依托泊苷對(duì)照品2.51mg，置10mL容量瓶中加甲醇定容，制得251μg·mL-1的對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液1mL置10mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋，定容，即得。

供試品溶液的制備：精密稱定依托泊苷膠囊內(nèi)含物1.0g，置10mL容量瓶中，加甲醇8mL，超聲10min，放至室溫，加甲醇至刻度，精密量取上述溶液1mL置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容，制得供試品溶液。

2.2.2 色譜條件

日本島津高效液相色譜儀（LC-10ATVP、SPD-10AVP、CBM-102色譜工作站），VP-ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相甲醇-水（70∶30）；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm；流速：1.0mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL[4]。取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，依托泊苷與其他成分分離完全，專屬性好。

2.2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品貯備液0.1、0.5、1、1.5、2mL各置25mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，制成梯度濃度的依托泊苷對(duì)照品溶液，依次測(cè)定。以對(duì)照品溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=19682C-6846 （R=0.9998）。表明依托泊苷在1～20 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.4 精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按2.2.2條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定10次，計(jì)算得依托泊苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為0.7%（n＝10）。精密稱取依托泊苷膠囊內(nèi)容物0.5、1.0、1.5g，各3份，各置50mL容量瓶中，按2.2.1配制方法制備，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得依托泊苷的平均含量為98.6%，RSD為0.8%（n＝9）。取同一濃度供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8、10和12h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得依托泊苷的平均含量為98.2%，RSD為0.56%（n＝8），結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 加樣回收率試驗(yàn)

取依托泊苷對(duì)照品20、25、30mg，各3份，置50mL容量瓶中，加入適量空白微乳，超聲溶解10min，放冷至室溫，加空白溶液定容，得待測(cè)溶液。按2.2.1配制方法處理，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得依托泊苷平均回收率為99.8%，RSD為0.9%（n＝9）。

2.2.6 樣品含量測(cè)定

取供試品內(nèi)容物約1.0g，精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液方法處理，精密量取續(xù)濾液20μL，進(jìn)液相，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.3 釋放度的測(cè)定

測(cè)定方法：照中國(guó)藥典2005 年版溶出度測(cè)定法第二法（槳法），以水900mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速200r/min，37℃，依法操作。分別于5、10、20、30、40min 取溶出液10mL（補(bǔ)充同體積、同溫介質(zhì)），0.45μm 濾膜濾過(guò)。取續(xù)濾液用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定，計(jì)算溶出度。分別測(cè)定供試制劑和參比制劑在各取樣點(diǎn)的溶出度，溶出曲線見(jiàn)圖2。

3 結(jié) 果

3.1 樣品含量測(cè)定

圖1 專屬性HPLC譜圖

圖2 依托泊苷膠囊釋藥曲線

三批樣品的含量測(cè)定結(jié)果，含量占標(biāo)示量的百分比分別為97.8%、97.5%和99.9%。符合藥典有關(guān)膠囊劑的要求，見(jiàn)表 1。

3.2 體外溶出度結(jié)果

供試制劑在20min時(shí)釋藥完全，而參比制劑較供試制劑慢10min左右釋藥完全?？赡苁怯捎谌榛瘎┑募尤朐黾恿艘劳胁窜盏娜芙庑裕沟靡劳胁窜崭喔斓倪M(jìn)入釋放溶液中，見(jiàn)圖 2。

4 討 論

藥物自乳化工藝是一種現(xiàn)代化的制藥技術(shù)，國(guó)外研究不多，國(guó)內(nèi)也正起步，現(xiàn)在上市的藥品僅有環(huán)孢素軟膠囊等品種。自乳化釋藥系統(tǒng)作為一種非常有前景的新劑型，對(duì)那些水中不穩(wěn)定，水溶性差，生物利用度又低的藥物意義重大，具有很大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

依托泊苷自乳化膠囊在水溶液，使藥物自乳化形成乳劑，使得很好的分散在水溶液中。而且，乳劑的形成，較大程度增加了依托泊苷的溶出度，有利于提高藥物生物利用度。

[1]Aisner J,Lee EJ.Etoposide.Current and future status[J].Cancer,1991,67(1 Suppl)：215-219.

[2]袁開(kāi)紅,曹德善,李萌等.依托泊苷軟膠囊的研制及人體生物利用度的研究[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2004,35(5)：279-281.

[3]張桂俠,杜青.依托泊苷自微乳的處方研究 [J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,32(3)：401-403.

[4]尹東東,王杏林,趙廣榮等.依托泊苷微乳的HPLC測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2007,38(2)：121-122.