周樹偉，蘇蓓蓓，陳旻靜

1)新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院頭頸乳腺外科 新鄉(xiāng) 453000 2)新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院皮膚科新鄉(xiāng)453000 3)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科鄭州450052

(2010-09-13收稿 責(zé)任編輯 趙秋民)

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)是一種常見于頭面部的惡性腫瘤，隨著現(xiàn)代化進(jìn)程的發(fā)展，其已成為整形外科及頭頸腫瘤外科的一種常見病。PTEN是繼p53基因之后發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因，近年研究［1-2］發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白失表達(dá)與一些惡性腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)。Ki-67抗原是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的細(xì)胞核內(nèi)蛋白質(zhì)，大量研究［3-5］表明Ki-67標(biāo)記指數(shù)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、預(yù)后、復(fù)發(fā)和死亡相關(guān)。作者采用免疫組化SP方法檢測(cè)了皮膚SCC及正常組織中PTEN和Ki-67蛋白的表達(dá)情況，探討它們異常表達(dá)與皮膚SCC發(fā)生、分化等的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2005年6月至2007年12月存檔且病歷資料完整、病理診斷明確的34例皮膚SCC組織，其中男20例，女14例。根據(jù) Border分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［6］，高分化15例，中分化11例，低分化8例?；颊邿o合并皮膚病、結(jié)締組織病、免疫系統(tǒng)疾病及其他重要臟器疾病，術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療、免疫、冷凍及激光等治療。15例正常皮膚組織(對(duì)照組，男9例，女6例)為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科非癌患者行全厚皮移植時(shí)所修剪剩余的全厚皮。

1.2 2種組織中PTEN及Ki-67蛋白的檢測(cè) 鼠抗人PTEN單克隆抗體(濃縮型)、鼠抗人Ki-67單克隆抗體(濃縮型)、SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照，用已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PTEN及Ki-67(抗體均按1∶50稀釋)蛋白染色陽(yáng)性反應(yīng)信號(hào)均呈棕黃色細(xì)小顆粒，位于細(xì)胞核。參考Mohsin等［7］的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判析。①先在低倍鏡下選取細(xì)胞分布均勻的視野，再在高倍鏡下用CMIAS病理彩色圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，每張切片計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜10%為0分，10% ～為1分，46% ～70%為2分，＞70%為3分。②根據(jù)細(xì)胞著色的強(qiáng)弱:不著色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分。結(jié)果取2項(xiàng)評(píng)分之和:0分為陰性(－)，1～2分為弱陽(yáng)性(+)，3～4分為陽(yáng)性()，5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或四格表確切概率法比較正常皮膚及SCC組織中PTEN和Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的差異、PTEN和Ki-67蛋白的表達(dá)與SCC分化程度的關(guān)系，應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析SCC中PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 正常皮膚及SCC組織中PTEN和Ki-67蛋白的表達(dá) 正常皮膚及SCC組織中PTEN和Ki-67蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.0%、41.2%(14/34)和 26.7%(4/15)、82.4%(28/34)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.909 和 14.245，P 均 ＜0.001)。見圖1。

圖1 正常皮膚(A)及SCC(B)組織中PTEN和Ki-67蛋白的表達(dá)(SP，×400)1:PTEN;2:Ki-67。

2.2 PTEN和Ki-67蛋白的表達(dá)與SCC分化程度的關(guān)系 高分化SCC組織中PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7%(10/15)，在中低分化組織中為 36.4%(4/19)，P=0.013;高分化SCC組織中 Ki-67蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7%(10/15)，在中低分化組織中為90.9%(18/19)，P=0.066。

2.3 SCC組織中PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性 見表1。

表1 SCC中PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性 例

3 討論

作者的研究結(jié)果顯示正常皮膚組織中PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于SCC;且組織分化程度越低，其陽(yáng)性表達(dá)率越低，與國(guó)內(nèi)外多數(shù)學(xué)者［1-2］的研究結(jié)果一致，提示PTEN蛋白低表達(dá)或失表達(dá)可能與SCC的發(fā)生發(fā)展及病理特征密切相關(guān)，檢測(cè)PTEN蛋白可能為SCC的診斷及預(yù)后提供依據(jù)。

在該實(shí)驗(yàn)中，作者觀察到SCC組織中Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)率及陽(yáng)性表達(dá)程度高于正常皮膚組，且Ki-67蛋白陽(yáng)性表達(dá)率隨SCC分化程度的降低逐漸增強(qiáng)，表明SCC較正常皮膚具有更高的增殖活性，Ki-67可以作為SCC發(fā)生與發(fā)展的可靠觀測(cè)指標(biāo)。

該研究結(jié)果還顯示SCC組織中PTEN與Ki-67蛋白的表達(dá)強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)，隨著PTEN蛋白表達(dá)強(qiáng)度的增強(qiáng)，Ki-67蛋白的表達(dá)強(qiáng)度減弱。

總之，細(xì)胞的過度增殖可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，增殖又是腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，因此，聯(lián)合檢測(cè)PTEN、Ki-67對(duì)SCC的診斷、預(yù)后及術(shù)后治療有著極其重要的意義，兩者均有表達(dá)可能是SCC預(yù)后不良的標(biāo)志。

［1］Ming M，He YY.PTEN:new insights into its regulation and function in skin cancer［J］.J Invest Dermatol，2009，129(9):2109

［2］Zolota VG，Tzelepi VN，Leotsinidis M，et al.Histologictype specific role of cell cycle regulators in non-small cell lung carcinoma［J］.J Surg Res，2010，164(2):256

［3］Ikegawa K，Matsukuma S.Immunohistochemical study of p53 and Ki-67 in inverted papillom as and nasal polyps arising from nasal or paranasal regions［J］.Rinsho Byor，2005，53(6):499

［4］ Jung SY，Han W，Lee JW，et al.Ki-67 expression gives additional prognostic information on St.Gallen 2007 and Adjuvant!Online risk categories in early breast cancer［J］.Ann Surg Oncol，2009，16(5):1112

［5］ Choudhury M，Goyal S，Pujani M.A cytohistological study of Ki-67 expression in ovarian tumors［J］.Indian J Pathol Microbiol，2011，54(1):21

［6］趙辨.臨床皮膚病學(xué)［M］.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001:1124

［7］ Mohsin SK，Zhang M，Clark GM，et al.Maspin expression in invasive breast cancer:association with other prognostic factors［J］.JPathol，2003，199(4):432