樊冬梅，史惠蓉，陳志敏，劉惠娜，張瑞濤

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州450052 2)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科 洛陽(yáng)471003

(2010-10-12收稿 責(zé)任編輯 趙秋民)

作為婦科三大惡性腫瘤之一，卵巢癌的病死率高居?jì)D科惡性腫瘤之首［1］。因?yàn)槁殉步馄饰恢秒[匿，早期病變常缺乏臨床癥狀，患者就診時(shí)往往已屬晚期，且5 a生存率不足20%［2-3］。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究［4-8］發(fā)現(xiàn)胃泌素釋放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)及其受體(GRPR)在許多惡性腫瘤的發(fā)生中起重要作用。作者應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)卵巢癌組織中GRP和GRPR的表達(dá)情況，并分析二者與卵巢癌患者的臨床病理特征的關(guān)系，探討GRP和GRPR在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 選擇2001年1月至2009年1月就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院的病歷資料完整的卵巢癌患者［58例，年齡39～60(51.3±8.7)歲;有家族史11例;根據(jù)2000年FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期41例;高分化20例，中-低分化38例;漿液性癌29例，黏液性癌16例，子宮內(nèi)膜樣癌8例，其他類型5例;有腹水45例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例;術(shù)前均未接受過(guò)放化療及免疫治療］、良性卵巢上皮性腫瘤［49例，其中漿液性29例，黏液性20例;年齡31～66(48.9±6.5)歲］和同期就診于該院的因子宮脫垂行子宮切除術(shù)要求切除一側(cè)或雙側(cè)正常卵巢［37例，年齡40～70(55.1±9.3)歲］的卵巢組織存檔蠟塊。均經(jīng)病理確診，行5μm厚連續(xù)切片，室溫存放待用。

1.2 不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白的檢測(cè)抗GRP蛋白多克隆抗體(美國(guó)R＆D公司，產(chǎn)品編號(hào)MAB35841)、抗GRPR蛋白多克隆抗體(英國(guó)Abcam公司，產(chǎn)品編號(hào)ab39963)、鏈霉卵白素-過(guò)氧化物酶試劑盒和DAB底物試劑盒購(gòu)自上海越研生物公司。采用免疫組化SP法檢測(cè)GRP和GRPR蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒為陽(yáng)性，均采用已知的胃癌陽(yáng)性石蠟切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)［9］:光鏡下選取20個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。①根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的比例計(jì)分:未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，陽(yáng)性細(xì)胞＜1/3計(jì)1分，1/3～2/3計(jì)2分，＞2/3計(jì)3分。②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分:細(xì)胞無(wú)著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。2項(xiàng)積分之積＞1分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0進(jìn)行分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的差異及其與臨床病理特征的關(guān)系，計(jì)算列聯(lián)系數(shù)分析卵巢癌組織中GRP和GRPR表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白的表達(dá)見(jiàn)圖1和表1。

2.2 GRP和GRPR蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表2。

圖1 不同卵巢組織中GRP(A)和GRPR(B)蛋白的表達(dá)(SP，×400)1:正常卵巢組織;2:良性卵巢上皮性腫瘤組織;3:卵巢癌組織。

表2 GRP和GRPR蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 卵巢癌組織中GRP和GRPR蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 見(jiàn)表3。

表3 卵巢癌組織中GRP和GRPR蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 例

3 討論

正常情況下，GRP是消化道內(nèi)的一種P細(xì)胞產(chǎn)生的分泌性細(xì)胞因子，在局部以旁分泌或自分泌的方式調(diào)節(jié)胃腸激素的分泌和膽囊的收縮，在一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病中還具有傳遞神經(jīng)沖動(dòng)的作用［10］。Qiao等［6］發(fā)現(xiàn)，在上游基因PI3K信號(hào)通路的作用下，GRP能夠顯著增強(qiáng)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖，使其進(jìn)入活躍的細(xì)胞周期，提示GRP參與細(xì)胞的癌變。作者發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中GRP和GRPR呈高表達(dá)，提示二者可能參與了卵巢癌的發(fā)生。惡性腫瘤的發(fā)生早期與細(xì)胞異常活躍的增殖分裂密切相關(guān)，因此，參與惡性腫瘤早期變化的分泌性細(xì)胞因子有可能被釋放到內(nèi)環(huán)境或血液中，成為腫瘤早期診斷的高度特異性指標(biāo)，從這一角度來(lái)看，GRP亦有可能成為卵巢癌早期診斷的一個(gè)有潛力的指標(biāo)。

該研究還發(fā)現(xiàn)，GRP和GRPR均與卵巢癌的分化程度有關(guān)，分化程度越低，二者的表達(dá)就越高，由此可推測(cè)，細(xì)胞的分化程度越偏離正常，其分泌GRP的活性也越高，并且GRPR的表達(dá)也越高，過(guò)高的GRP和高表達(dá)的GRPR結(jié)合后，又發(fā)揮更強(qiáng)的促分裂作用，導(dǎo)致低分化的卵巢癌病情進(jìn)展加速。

除了促細(xì)胞有絲分裂外，Taglia等［11］還發(fā)現(xiàn)GRP與GRPR結(jié)合后可通過(guò)粘著斑激酶(FAK)作用于細(xì)胞間黏附因子-1，引起結(jié)腸癌細(xì)胞的黏附性增加，從而引起腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。該組資料顯示，GRPR還與卵巢癌的FIGO分期和腹水形成有關(guān)，說(shuō)明GRPR不僅參與了卵巢癌變，還可能進(jìn)一步參與了卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移。但該研究發(fā)現(xiàn)GRP與提示卵巢癌轉(zhuǎn)移的臨床指標(biāo)之間無(wú)明顯關(guān)聯(lián)，且GRP和GRPR在卵巢癌組織中的表達(dá)無(wú)關(guān)聯(lián)性。作者認(rèn)為這可能是由于惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多個(gè)基因共同作用的結(jié)果，在進(jìn)展期卵巢癌中可能還存在另外一些調(diào)控GRP表達(dá)和分泌的基因，或者卵巢癌發(fā)生中的另外一些基因也參與了上調(diào)GRPR表達(dá)的過(guò)程。

作者的研究結(jié)果提示GRP和GRPR不僅參與了卵巢癌的發(fā)生，同時(shí)GRPR與腫瘤分化、腹水等臨床病理特征結(jié)合，極有可能成為一個(gè)判斷卵巢癌預(yù)后的有潛力的靶標(biāo)。在下一步的研究中進(jìn)行卵巢癌患者的組織和血清中GRP的檢測(cè)，并比對(duì)其一致性，將有助于探討GRP作為卵巢癌的早期診斷指標(biāo)的價(jià)值。

［1］王翠翠，張曉霞，王麗娜，等.卵巢癌患者血清人激肽釋放酶10的檢測(cè)及臨床意義［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2010，36(3):540

［2］王英芳.上皮性卵巢癌組織中P53和Survivin蛋白的表達(dá)［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2007，42(5):935

［3］ Permuth-Wey J，Sellers TA.Epidemiology of ovarian cancer［J］.Methods Mol Biol，2009，472:413

［4］ Fang J，Lu Y，Ouyang K，et al.Specific antibodies elicited by a novel DNA vaccine targeting gastrin-releasing peptide inhibit murine melanoma growth in vivo［J］.Clin Vaccine Immunol，2009，16(7):1033

［5］ Ischia J，Patel O，Shulkes A，et al.Gastrin-releasing peptide:different forms，different functions［J］.Biofactors，2009，35(1):69

［6］ Qiao J，Kang J，Ishola TA，et al.Gastrin-releasing peptide receptor silencing suppresses the tumorigenesis and metastatic potential of neuroblastoma［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(35):12891

［7］ Fleischmann A，Waser B，Reubi JC.Overexpression of gastrin-releasing peptide receptors in tumor-associated blood vessels of human ovarian neoplasms［J］.Cell Oncol，2007，29(5):421

［8］ Patel O，Shulkes A，Baldwin GS.Gastrin-releasing peptide and cancer［J］.Biochim Biophys Acta，2006，1766(1):23

［9］ Barrette BA，Srivatsa PJ，Cliby WA，et al.Overexpression of P34cdc2 protein kinase in epithelial ovarian carcinoma［J］.Mayo Clin Proc，1997，72(10):925

［10］Flores DG，Meurer L，Uberti AF，et al.Gastrin-releasing peptide receptor content in human glioma and normal brain［J］.Brain Res Bull，2010，82(1/2):95

［11］Taglia L，Matusiak D，Matkowskyj KA，et al.Gastrin-releasing peptide mediates its morphogenic properties in human colon cancer by upregulating intracellular adhesion protein-1(ICAM-1)via focal adhesion kinase［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2007，292(1):G182