榮愛梅，郭長青

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科鄭州450052

(2010-11-24收稿 責(zé)任編輯 王 曼)

POKemon基因即POK紅系髓性致癌因子，是POK轉(zhuǎn)錄抑制物家族成員，能特異性抑制抑癌基因ARF，促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展［1］。該基因在肝癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌、乳癌及惡性膠質(zhì)細胞瘤等多種腫瘤組織中表達明顯增高［2-6］。P14ARF是細胞周期依賴性激酶4抑制因子家族中的一員，通過細胞周期的調(diào)控發(fā)揮抑癌作用［7］。作者通過檢測POKemon和P14ARF蛋白在食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)及正常組織中的表達，探討POKemon和P14ARF與ESCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2009年1月至2010年3月經(jīng)病理證實的ESCC患者的病理組織蠟塊88例及部分相應(yīng)的正常食管黏膜組織蠟塊28例，均為胸外科手術(shù)切除標本?；颊咝g(shù)前均未接受過放化療及免疫治療，男65例，女23例，年齡45～74歲;高分化23例，中分化40例，低分化25例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期49例，Ⅲ、Ⅳ期39例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例。

1.2 POKemon及P14ARF蛋白的免疫組化染色POKemon、P14ARF兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，抗體工作濃度分別為1∶100和1∶200。SP-9001免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，采用SP三步法，按試劑盒說明操作，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇分色。以PBS替代一抗作為空白對照，用已知陽性片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 POKemon和P14ARF蛋白陽性表現(xiàn)為胞膜及胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色染色。每張切片取5個400倍視野，首先按染色強度計分:無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;然后計數(shù)陽性細胞:陽性細胞百分數(shù)＜5%為0分，5% ～為1分，25% ～為2分，≥50%為3分;兩項積分之和≤3分為陰性(－)，＞3分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0進行分析。正常食管黏膜和ESCC組織中2種蛋白陽性表達率的比較應(yīng)用配對χ2檢驗，不同臨床病理特征的ESCC組織中2種蛋白陽性表達率的比較應(yīng)用χ2檢驗，以列聯(lián)系數(shù)評估ESCC組織中2種蛋白表達的關(guān)系，檢驗水準 α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 正常食管黏膜和ESCC組織中P14ARF和POKemon的表達 見圖1、表1。

圖1 正常食管黏膜及ESCC組織中POKemon和P14ARF免疫組化染色(SP，×400)A，B:分別為ESCC及正常食管黏膜組織中POKemon蛋白的表達;C，D:分別為正常食管黏膜及ESCC組織中P14ARF蛋白的表達。

表1 正常食管黏膜及ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白的表達 例

2.2 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

2.3 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達的關(guān)聯(lián)性分析 見表3。

表2 POKemon和P14ARF蛋白的表達與ESCC臨床病理特征的關(guān)系

表3 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達的關(guān)聯(lián)性 例

3 討論

癌基因POKemon是近年發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄抑制因子，廣泛存在于人類成熟組織的細胞系中。Stogios等［8］研究表明POKemon的POZ結(jié)構(gòu)域是一個轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器，POKemon抑制多種重要基因的轉(zhuǎn)錄，包括ARF、c-fos和 c-myc等。Maeda等［1］研究發(fā)現(xiàn)，POKemon過表達無論在轉(zhuǎn)基因鼠的體內(nèi)還是體外都導(dǎo)致了明顯的致癌性細胞轉(zhuǎn)化，說明POKemon與腫瘤有著密切的關(guān)系。該研究結(jié)果表明，POKemon在ESCC癌組織中高表達，而在正常組織中低表達，POKemon的表達與ESCC的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與性別、年齡及分化程度無關(guān)。說明POKemon在ESCC的發(fā)生及浸潤轉(zhuǎn)移中起重要作用。

抑癌基因P14ARF位于INK4a/ARF基因位點，此基因位點在人染色體9p21上，可編碼 P16和P14ARF 2種蛋白。P14ARF對細胞周期有顯著的負性調(diào)控作用，多種研究［9-10］表明其抑癌機制為通過P14ARF的N端與MDM2的C端結(jié)合，抑制MDM2在胞核與胞質(zhì)中穿梭，促使其降解，從而抑制P53的降解，將細胞周期阻斷在G1期和G2/M轉(zhuǎn)換期或促進凋亡，抑制腫瘤發(fā)生。也有研究［11］認為P14ARF可以通過非依賴p53途徑發(fā)揮抑癌作用。Cheng等［12］研究表明在人ESCC組織中P53的表達與MDM2、P14ARF有關(guān)，并且P14ARF常見于P53和MDM2都表達陽性的標本。由以上研究可以推斷ESCC的發(fā)生可能是通過下調(diào)ARF→上調(diào)MDM2→下調(diào)p53→腫瘤發(fā)生。該研究結(jié)果顯示P14ARF在ESCC中低表達，P14ARF的表達與ESCC組織的分化程度有關(guān)，而與性別、年齡、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)。

該研究結(jié)果還顯示，ESCC中 POKemon與P14ARF表達呈負相關(guān)，兩者表達失衡可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。POKemon與P14ARF在多種腫瘤組織(乳癌［13］、非小細胞肺癌［3］等)中的表達具有相關(guān)性，并且POKemon是P53途徑的一個重要的控制器［14］。POKemon致癌機制可能為POKemon的過表達特異性抑制 P14ARF的轉(zhuǎn)錄活性，通過 ARFMDM2-P53途徑促使腫瘤發(fā)生。

綜上所述，POKemon與P14ARF在ESCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，有望成為ESCC診斷、基因治療的新靶點和預(yù)后判斷的重要指標。

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