崔明宇，孫志偉，王艷，馬英麗

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040)

蓬子菜(Galium verum L.)為茜草科(Rubiaceae)拉拉藤(Galium)屬植物蓬子菜的干燥全草，又名雞腸草、黃牛尾、黃花米等。在我國(guó)東北地區(qū)分布廣泛，資源豐富。蓬子菜在東北民間有廣泛的藥用基礎(chǔ)，性溫，味苦、甘，具有清熱解毒、行血、利濕止癢之功效，即可內(nèi)服又可外用，用于治療肝炎、稻田皮炎、跌打損傷、蕁麻疹、婦女血?dú)馔吹?。臨床用其治療周?chē)懿∪〉昧己茂熜В?］。研究表明，蓬子菜總黃酮為治療周?chē)懿〉挠行Р课?，為保證臨床用藥的安全性，為新制劑的開(kāi)發(fā)提供可靠的安全性資料，本實(shí)驗(yàn)對(duì)蓬子菜總黃酮灌胃給藥的急性毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 藥品

蓬子菜總黃酮提取物(本實(shí)驗(yàn)室自提，總黃酮含量57%)，以0.5%CMC溶液配制成最大給藥濃度(約含蓬子菜總黃酮0.50g/mL)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠80只，雌雄各半，5～6周齡，體質(zhì)量18～22g，購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評(píng)價(jià)中心，動(dòng)物合格證號(hào):SYXK黑2008001。雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由飲水和進(jìn)食，室溫18～20℃，相對(duì)濕度50%，實(shí)驗(yàn)室觀察1周。

2 方法與結(jié)果［2－3］

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

昆明種小鼠20只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，分設(shè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組以最大給藥濃度、最大給藥劑量(0.3mL/10g)一次灌胃蓬子菜總黃酮，給藥后立即觀察動(dòng)物中毒癥狀，連續(xù)觀察7天，期間觀察小鼠死亡數(shù)和一般情況。對(duì)照組灌胃等量0.5%CMC溶液，余同給藥組。

2.2 最大耐受量的測(cè)定

昆明種小鼠60只，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，按性別和體質(zhì)量隨機(jī)分成3組，雌雄各半，每組20只。分別設(shè)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)一組、實(shí)驗(yàn)二組，對(duì)照組給予同量0.5%CMC溶液，實(shí)驗(yàn)組以最大給藥濃度、最大給藥劑量(0.3mL/10g)灌胃，其中實(shí)驗(yàn)一組每日灌胃1次，實(shí)驗(yàn)二組每日灌胃2次(間隔8h)，灌胃1日。連續(xù)觀察7日，詳細(xì)觀察與記錄對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組體重、飲食、精神狀態(tài)、大便和皮膚毛色變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將全部動(dòng)物處死、解剖、尸檢，肉眼檢查主要臟器組織有無(wú)異常病變情況，計(jì)算最大耐受量(MTD)。

2.3 結(jié)果

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，小鼠以最大給藥濃度和最大給藥劑量灌胃后，觀察1周，無(wú)1例死亡，小鼠活動(dòng)和飲食狀況良好，因此測(cè)不出LD50，故進(jìn)行最大耐受量(MTD)測(cè)定。以最大給藥濃度和最大給藥劑量分別進(jìn)行灌胃給予蓬子菜總黃酮提取物，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，小鼠在第1次灌胃后均無(wú)異?，F(xiàn)象，而在第2次灌胃后有部分小鼠出現(xiàn)自主活動(dòng)減少現(xiàn)象，但無(wú)豎毛、抽搐、驚厥、翻倒等異?，F(xiàn)象，且在灌胃后1～4h后活動(dòng)恢復(fù)正常。灌胃后的小鼠連續(xù)觀察7日，小鼠灌胃后的體質(zhì)量、四肢活動(dòng)、精神、毛發(fā)、飲水、糞便、尿液情況見(jiàn)表1，2。7日后處死受試小鼠并解剖、尸檢，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，外觀未見(jiàn)異常改變。結(jié)果，小鼠口服蓬子菜總黃酮MTD為30g/kg/d。

表1 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗(yàn)小鼠體質(zhì)量變化(g，±s，n=10)

表1 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗(yàn)小鼠體質(zhì)量變化(g，±s，n=10)

組別 性別 實(shí)驗(yàn)前 第1天 第3天 第5天 第7天對(duì)照組 雌 20.76 ±1.61 20.9 ±1.62 22.1 ±1.76 22.58 ±1.58 23.16 ±1.59雄 20.38 ±1.1120.78 ±1.1321.38 ±1.2122.06 ±1.26 22.86 ±1.22實(shí)驗(yàn) 雌 21.99 ±1.5722.21 ±1.6122.77 ±1.6623.31 ±1.55 23.81 ±1.67一組 雄 21.05 ±1.7221.31 ±1.7321.92 ±1.5922.44 ±1.62 23.01 ±1.60實(shí)驗(yàn) 雌 21.80 ±1.5722.01 ±1.5822.44 ±1.6322.82 ±1.66 23.23 ±1.64二組 雄 21.76 ±1.5921.95 ±1.5822.39 ±1.5722.89 ±1.54 23.31 ±1.45

3 討論

由表1可以看出，實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量的增加比對(duì)照組略少，可能為灌胃操作刺激或藥物本身對(duì)小鼠食欲造成一定影響，應(yīng)通過(guò)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)做進(jìn)一步考察。

由表2可知，小鼠灌胃后的四肢活動(dòng)、精神、飲水、尿液情況均正常，但灌胃后前3日糞便顏色加深，3～4日后轉(zhuǎn)為正常，應(yīng)該為藥物排泄所致。

小鼠灌胃后，對(duì)照組與雄性實(shí)驗(yàn)組毛發(fā)正常，但雌性實(shí)驗(yàn)組在灌胃后，毛發(fā)更為整齊和光亮，提示蓬子菜總黃酮提取物可能具有雌激素樣作用，此項(xiàng)藥理作用還有待進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

表2 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗(yàn)小鼠反應(yīng)情況(±s)

表2 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗(yàn)小鼠反應(yīng)情況(±s)

組別 四肢活動(dòng) 精神 毛發(fā) 飲水 尿液 糞便 死亡對(duì)照組 雌 正常 正常 正常 正常 正常 正常0雄 正常 正常 正常 正常 正常 正常 0實(shí)驗(yàn) 雌 正常 正常 光亮 正常 正常 便色加深3日后正常0一組 雄 正常 正常 正常 正常 正常 便色加深3日后正常0實(shí)驗(yàn) 雌 正常 正常 光亮 正常 正常 便色加深4日后正常0二組 雄 正常 正常 正常 正常 正常 便色加深4日后正常0

小鼠口服蓬子菜總黃酮MTD為30g/kg/d，如按臨床劑量，蓬子菜總黃酮成人(60kg)每日1.5g計(jì)算，小鼠MTD相當(dāng)于60kg體重成人臨床日用量的132倍。說(shuō)明蓬子菜總黃酮的急性毒性很小，臨床用藥的安全性較大。

由于急性毒性實(shí)驗(yàn)是在1日內(nèi)給藥1次或數(shù)次，且觀察時(shí)間也比較短，雖然蓬子菜急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其具有較高的安全性，但其安全性評(píng)價(jià)還應(yīng)結(jié)合長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)做進(jìn)一步驗(yàn)證，以全面保證臨床用藥的安全性。

［1］ 趙鋼，呂勃川，孫秋，等.蓬子菜水溶液對(duì)股動(dòng)脈硬化閉塞癥家兔模型血清 C－反應(yīng)蛋白的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(1):20－22.

［2］ 劉霞，王軍永，張佐.雙向固體發(fā)酵后雷公藤菌質(zhì)的急性毒性研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(2):33 －35.

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