杜 亮，賈恩禮，孔憲波

生骨膠囊為筆者所在中心制劑室自行研制、生產(chǎn)的全軍擴(kuò)大調(diào)劑使用制劑。為保證本制劑質(zhì)量，在確保以最小的劑量達(dá)到最佳滅菌效果的前提下，筆者對(duì)不同劑量60Co輻照下生骨膠囊進(jìn)行了研究，建立了定性定量指標(biāo)。

1 儀器與材料

Aglient1100高效液相色譜儀（四泵、手動(dòng)進(jìn)樣），超聲清洗器（KQ-50 型），電子天平（FA-2004 B 型）。

柚皮苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110722-200610），生骨膠囊 （筆者所在中心制劑室自制，批號(hào)090907），試驗(yàn)所用試劑均符合藥典規(guī)定[1]。

2 方法

2.1 隨機(jī)選取包裝完好的生骨膠囊6組 （批號(hào)090907，規(guī)格：0.4 g/粒，60 粒/瓶，100 瓶/箱）放入專用滅菌室，藥品距60Co輻射源在 60 cm 左右。輻射劑量分別為 2、4、6、10、15 kGy，未輻射的樣品作為對(duì)照。輻射單位是山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院60Co輻照中心。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Kromasil-C18柱（4.6×150 mm；5 μm）；乙腈-0.2%磷酸水溶液（13∶87）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。

2.3 生骨膠囊供試品溶液的制備 取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，取粉末1 g，精密稱定，加甲醇50 ml超聲處理30 min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?5 ml微熱使溶解，移至分液漏斗中，加乙醚15 ml提取1次，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇提取5次，15 ml/次，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在110℃干燥至恒重的柚皮苷對(duì)照品10.5 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取3 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每 1 ml中含柚皮苷 63 μg）。

2.5 線形關(guān)系考察 分別精密吸取柚皮苷對(duì)照品溶液1、2、4、8、10 ml至 10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過。分別精密吸取10 μl注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積。進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為Y=1 529.1x-4.500 0相關(guān)系數(shù)0.999 8。結(jié)果表明柚皮苷在0.063～0.63 μg范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6 測(cè)試方法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，做平行樣取平均值，計(jì)算即得。2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取6 kGy60Co輻照后生骨膠囊按測(cè)試方法測(cè)定5次，計(jì)算即得。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取同一批6 kGy60Co輻照后生骨膠囊樣品約1 g，5份，精密稱定，分別精密加入同一濃度的柚皮苷對(duì)照品溶液，加甲醇至刻度，按供試品測(cè)試方法測(cè)定，計(jì)算平均回收率。

3 結(jié)果

不同劑量60Co輻照后，生骨膠囊柚皮苷含量的變化見表1。隨著輻照劑量的增大柚皮苷含量逐漸降低，損耗率逐漸增加。當(dāng)劑量達(dá)到15 kGy時(shí)，其損耗率已超過20%。

表1 不同劑量60Co輻照后柚皮苷的含量

同一批生骨膠囊樣品經(jīng)6 kGy60Co輻照后，柚皮苷含量測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果顯示生骨膠囊樣品經(jīng)6 kGy60Co輻照，柚皮苷含量變化范圍小，重復(fù)性好，見表2。

表2 生骨膠囊樣品6 kGy60Co輻照重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

同一批生骨膠囊樣品經(jīng)6 kGy60Co輻照后，加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 柚皮苷加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4 討論

骨碎補(bǔ)為生骨膠囊君藥，柚皮苷為骨碎補(bǔ)中的主要成分，其含量高低與本制劑療效密切相關(guān)。故以柚皮苷為本制劑的含量指標(biāo)。試驗(yàn)看出，在0～15 kGy范圍內(nèi)隨著輻照劑量增大，柚皮苷含量總趨勢(shì)隨著劑量增大逐漸降低，當(dāng)劑量達(dá)到15 kGy時(shí)，其損耗率已超過20%。對(duì)其活性成分骨碎補(bǔ)具有分解損失作用。6 kGy60Co輻照生骨膠囊后，其微生物限量檢測(cè)指標(biāo)符合藥典規(guī)定。含量測(cè)定（本品每克骨碎補(bǔ)按柚皮苷含量計(jì)算），經(jīng)6 kGy60Co輻照后符合生骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

近年來，節(jié)省能源，安全可靠，效果好，成本低的60Co輻照技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域得到廣泛運(yùn)用。對(duì)中藥材來說，可在常溫下進(jìn)行，時(shí)間短，極大程度上避免了對(duì)某些不穩(wěn)定成分的破壞。但輻照劑量的選擇尤為重要，如何能達(dá)到滅菌效果，又保持成分和療效的輻照劑量，應(yīng)通過試驗(yàn)來決定。本試驗(yàn)表明：6 kGy60Co輻照可作為生骨膠囊滅菌方法，但輻照殘留對(duì)以后的含量是否有影響，有待于進(jìn)一步研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].2005年版（一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2]李奉勤，史冬霞，范文成，等.考察不同劑量60Co-γ射線輻照對(duì)冠心膠囊滅菌效果和含量的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(03)：4.