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        HPLC法測(cè)定阿膠養(yǎng)顏軟膠囊中維生素E的含量

        2011-09-05 06:33:08田守生郭尚偉段小波李士棟郝向慧尤金花
        藥學(xué)研究 2011年7期
        關(guān)鍵詞:養(yǎng)顏阿膠軟膠囊

        田守生,郭尚偉,段小波,李士棟,郝向慧,尤金花

        (山東東阿阿膠股份有限公司,山東省膠類中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 聊城 252201)

        阿膠養(yǎng)顏軟膠囊由阿膠、白芷、川芎、維生素E等原料制成,具有明顯的養(yǎng)顏美容、祛除黃褐斑的保健功效;其中維生素E不但對(duì)延緩衰老有一定作用,而且可穩(wěn)定藥效組分、防止氧化。而維生素E含量的檢測(cè)常采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中的方法,檢測(cè)過(guò)程中樣品的制備經(jīng)皂化、提取、洗滌、濃縮等步驟,存有操作過(guò)程復(fù)雜、檢測(cè)周期長(zhǎng)、誤差大等缺點(diǎn),也不利于批量檢測(cè)。據(jù)報(bào)道,對(duì)于植物油類的樣品,可直接用流動(dòng)相或己烷溶解分析[1]。鑒于此,我們嘗試甲醇直接超聲提取制備供試品,最終建立了阿膠養(yǎng)顏軟膠囊中維生素E的含量測(cè)定方法。

        1 儀器與試藥

        Waters 2695高效液相色譜儀,Agilent Zorbax-C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),Waters 2996 二極管陣列檢測(cè)器,KQ-800KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

        維生素 E(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):062-9405),DL-α-生育酚(美國(guó)Supelco公司,批號(hào):LB57065),阿膠養(yǎng)顏軟膠囊(山東東阿阿膠股份有限公司,批號(hào)0020310、0070810、0080910),甲醇為色譜純,水為注射用水,其他試劑為分析純。

        2 方法及結(jié)果

        2.1 測(cè)定方法

        2.1.1 色譜條件 流動(dòng)相為甲醇;流速為1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)284.6 nm;柱溫35℃;進(jìn)樣體積10 μL。

        2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取維生素E對(duì)照品約26 mg,精密稱定,置50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,備用。

        2.1.3 供試品溶液的制備 避光操作,取本品8粒,小心破囊,內(nèi)容物于100 mL量瓶中,精密稱定,加適量甲醇輕微震蕩使其分散,用甲醇稀釋至刻度,置于超聲波中超聲處理(120 W,40 kHz)15 min,取1 mL 濾過(guò),備用。

        2.2 線性關(guān)系考察 取維生素E對(duì)照品約26 mg,精密稱定,置50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻;分別精密量取1、2、4、6、8 mL 置10 mL 容量瓶中,甲醇稀釋至刻度,最終配制成濃度分別為 0.0530、0.1061、0.2122、0.3183、0.4244 mg·mL-1的溶液。在上述色譜條件下分別進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖,以維生素E濃度(C)為橫坐標(biāo),色譜峰面積(A)為縱坐標(biāo),得回歸方程:

        A=2.2408 × 103C - 32.7616 r=0.9999

        結(jié)果表明在0.0531 ~0.4244 mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。

        2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批阿膠養(yǎng)顏軟膠囊樣品(批號(hào):0020310)6份,按制備方法分別制成供試品溶液,照測(cè)定方法測(cè)定,峰面積的RSD值為2.35%。

        2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品在0~24 h內(nèi)進(jìn)樣5次(0、2、4、6、24 h),測(cè)得峰面積分別為:229.687、233.906、235.046、235.076、225.984,RSD 值為 1.72%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.5 回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的樣品(批號(hào):0020310)約2.0 g,置100 mL量瓶中,共取9份,分別精密加入濃度為1.0610 mg·mL-1的對(duì)照品溶液 1、2、3 mL,甲醇定容至刻度,制成高、中、低3種濃度各3份的供試品溶液,按測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定,RSD值為2.06%,結(jié)果見(jiàn)表1。

        表1 回收率測(cè)定結(jié)果

        2.6 含量測(cè)定 分別按照上述方法、國(guó)標(biāo)方法,對(duì)三批阿膠養(yǎng)顏軟膠囊中維生素E含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明本文的方法比國(guó)標(biāo)中的方法檢測(cè)結(jié)果略高,詳見(jiàn)表2。

        表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

        圖1 維生素E標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

        圖2 阿膠養(yǎng)顏軟膠囊HPLC色譜圖

        圖3 阿膠養(yǎng)顏軟膠囊3D液相色譜圖

        3 討論

        制備的維生素E對(duì)照品與供試品在210~400 nm波長(zhǎng)下掃描其光譜圖,結(jié)果在284.6 nm處有一最大吸收峰,故測(cè)定波長(zhǎng)選擇284.6 nm。

        阿膠養(yǎng)顏軟膠囊成分較復(fù)雜,但維生素E含量相對(duì)較少,故采用超聲的方法進(jìn)行提?。?]。超聲時(shí)內(nèi)容物均勻分散于甲醇中形成濁液,充分與甲醇接觸,這可能是能用甲醇直接提取含油脂類樣品中維生素E的原因。提取的樣品經(jīng)液相色譜分析無(wú)其他成分干擾,短時(shí)間內(nèi)即可把所含的雜質(zhì)成分從柱中洗出。分別設(shè)超聲(120 W,40 kHz)時(shí)間為5 min、15 min、30 min,考察了超聲時(shí)間對(duì)樣品提取的影響;超聲時(shí)間為5 min時(shí)檢測(cè)含量偏低,而15 min和30 min含量基本一致,故超聲處理(120 W,40 kHz)時(shí)間選擇15 min。

        總之,我們建立了阿膠養(yǎng)顏軟膠囊中的維生素E含量測(cè)定方法:甲醇超聲提取進(jìn)行供試品的制備,樣品處理簡(jiǎn)單、快捷,便于批量處理;采用HPLC法檢測(cè),甲醇為流動(dòng)相,檢測(cè)時(shí)間短,無(wú)其他成分干擾。本方法重現(xiàn)性好、回收率高,還可應(yīng)用于維生素E軟膠囊等其他產(chǎn)品中維生素E的含量測(cè)定。

        [1]李東,顧鵬,蔣淑梅.高效液相色譜法測(cè)定食品中維生素 E 的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2000,21(6):57-59.

        [2]Xu Z.Comparison of extraction methods for quantifying vitamin E from animal tissues[J].Bioresour Technol,2008,99(18):8705-8709.

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