李建英 孫云松 胡維華 劉先英

山東省青島市海慈醫(yī)療集團（山東青島 266033）

宣痹湯治療IgA腎病大鼠的實驗研究*

李建英 孫云松 胡維華 劉先英

山東省青島市海慈醫(yī)療集團（山東青島 266033）

目的 探討宣痹湯對實驗性IgA腎病大鼠的作用機理。方法采用口服牛血清白蛋白及靜注葡萄糖球菌腸毒素制成的大鼠IgA腎病模型，分析宣痹湯的作用機理。結(jié)果宣痹湯各治療組對降低C反應(yīng)蛋白、血尿素氮、血肌酐及大鼠尿紅細胞較雷公藤多苷治療組明顯；各治療組腎組織IgA熒光強度較模型組均弱；各治療組腎小球輕度增大，系膜細胞和系膜基質(zhì)增生的程度較模型組均輕，系膜細胞數(shù)較模型組少。結(jié)論宣痹湯能降低IgA腎病大鼠尿紅細胞和尿蛋白，減輕炎癥狀態(tài)，減少腎組織中IgA的沉積，改善腎功能。

宣痹湯 IgA腎病

IgA腎病是以出現(xiàn)鏡下血尿或肉眼血尿或蛋白尿，血清IgA可升高，腎小球系膜區(qū)IgA免疫復(fù)合物沉積為特征的一類腎小球腎炎，是導(dǎo)致終末期腎臟病的最常見的原發(fā)性腎小球疾病之一[1]。筆者認為IgA腎病的中醫(yī)病機可概括為風(fēng)濕郁熱、痹阻腎絡(luò)的“腎痹證”。本實驗采用牛血清白蛋白和葡萄球菌腸毒素復(fù)合感染的IgA腎病大鼠模型，運用宣痹湯進行治療，探討其防治IgA腎病的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級wistar大鼠60只，6～8周齡，體質(zhì)量（200±20）g，雌雄各半，由青島市實驗動物和動物實驗中心提供，動物許可證號SCXK（魯）20030010。

1.2 實驗藥物 宣痹湯：由木防己、杏仁、滑石、連翹、山梔、薏苡仁、半夏、晚蠶沙、赤小豆、姜黃組成；藥材水煎、抽濾、水浴蒸發(fā)濃縮制成水煎劑（含生藥1.5g/mL）；雷公藤多苷片（10mg/片，浙江得恩德制藥有限公司，生產(chǎn)批號：081101），加蒸餾水制成混懸液。

1.3 主要試劑 牛血清白蛋白（BSA），購自RocHE生物工程有限公司；葡萄球菌腸毒素（SEB），購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流

行病學(xué)研究所；熒光抗體為FITC標記的羊抗小鼠IgA抗體，購自美國Sigma公司。

1.4 分組及造模 將大鼠隨機分為正常對照組、模型組、雷公藤多苷組、宣痹湯低劑量組、宣痹湯中劑量組、宣痹湯高劑量組，每組各10只。參照文獻[2]方法造模。隔日口服含牛血清白蛋白（BSA）200mg/kg的酸化水（用1%鹽酸酸化水稀釋），同時于第6周開始尾靜脈注射BSA20mg/kg，每日1次，連續(xù)3次，8周時附加尾靜脈注射葡萄糖球菌腸毒素（SEB）0.6mg/kg，每周1次，連續(xù)3周，然后觀察至第12周末。

1.5 給藥方法 正常對照組、模型組灌胃蒸餾水2mL；雷公藤多苷組予雷公藤多苷稀釋液2mL（6.3mg/kg）灌胃；宣痹湯低劑量組灌服宣痹湯1mL（7.5g/kg）；宣痹湯中劑量組灌服宣痹湯2mL（15g/kg）；宣痹湯高劑量組灌服宣痹湯4mL（30g/kg）。 所有動物均自由飲水和進食。自實驗的第6周起灌服，均每日1次，共進行12周。

1.6 標本采集與檢測 24h尿蛋白測定采用比濁法，C反應(yīng)蛋白（CRP）測定采用乳膠增強免疫投射比濁法，血清肌酐（SCr）測定采用苦味酸法；血尿素氮（BUN）采用尿酶法。取1/2腎臟一塊，用10%中性甲醛溶液固定，24h后逐級酒精脫水，二甲苯透明，60℃石蠟包埋，用于HE染色，觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化，腎組織形態(tài)學(xué)檢測按照腎臟病理Lee氏分級標準[3]。取1/2腎臟一塊入液氮速凍，-70℃保存用于免疫熒光冰凍切片，腎小球IgA熒光染色采用直接法。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 建立IgA腎病模型過程中，造模大鼠于第7周開始均出現(xiàn)不同程度的精神不振、皮毛不光澤，于第12周末部分大鼠出現(xiàn)水腫，治療2～3周后緩解。模型組、雷公藤多苷組、宣痹湯高劑量組大鼠各死亡2只，宣痹湯低、中劑量組大鼠各死亡1只，從實驗中剔除。正常對照組小鼠精神狀態(tài)一直良好。

2.2 各組大鼠尿紅細胞及尿蛋白比較 見表1。各組大鼠于造模第6周末均出現(xiàn)血尿及蛋白尿，各組間比較無顯著差異。第12周末，模型組的尿紅細胞及尿蛋白定量明顯高于其他治療組（P＜0.05）；各治療組的尿蛋白定量明顯低于模型組，但相互間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；宣痹湯各治療組尿紅細胞數(shù)改善優(yōu)于雷公藤多苷組（P＜0.05）。

表1 各組大鼠尿紅細胞計數(shù)、尿蛋白定量比較 （±s）

表1 各組大鼠尿紅細胞計數(shù)、尿蛋白定量比較 （±s）

與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05；與雷公藤多苷組比較，△P＜0.05。 下同。

組 別 n 尿紅細胞數(shù)（個/HP）正常對照組 10 0.62±1.15尿蛋白（mg/24h）63.52±30.48模型組 8 7.65±3.51* 155.71±54.46*雷公藤多苷組 8 5.50±2.24*▲ 117.92±37.75*▲宣痹湯低劑量組 9 4.14±2.12*▲△ 120.22±43.91*▲宣痹湯中劑量組 9 4.17±2.16*▲△ 118.27±39.79*▲宣痹湯高劑量組 8 4.21±2.19*▲△ 120.50±40.12*▲

2.2 各組大鼠生化指標比較 見表2。模型組血BUN、SCr和CRP明顯高于正常對照組（P＜0.05）。各治療組的血BUN和SCr明顯低于模型組，但相互間無顯著差異（P＞0.05）。中藥治療各組對CRP改善要優(yōu)于雷公藤多苷組（P＜0.05）。

表2 各組大鼠生化指標比較 （±s）

表2 各組大鼠生化指標比較 （±s）

組 別 n BUN（mmol/L）正常對照組 10 0.62±1.45模型組 8 7.65±3.51*雷公藤多苷組 8 5.50±2.24*▲宣痹湯低劑量組 9 5.64±2.37*▲宣痹湯中劑量組 9 5.57±2.19*▲宣痹湯高劑量組 8 5.61±2.32*▲SCr（μmol/L）63.52±30.48 155.71±54.46*107.92±37.75*▲113.22±43.95*▲108.27±39.79*▲110.50±40.12*▲CRP（mg/L）0.26±0.12 0.84±0.26*0.50±0.16*▲0.58±0.20*▲△0.60±0.26*▲△0.54±0.18*▲△

2.3 腎組織光鏡檢測結(jié)果 光鏡下模型組多數(shù)腎小球系膜細胞重度增生，基質(zhì)增多，球囊粘連，局灶節(jié)段硬化，腎小管多灶狀萎縮和代償性肥大，相當于Lee氏Ⅲ級病變。各治療組系膜細胞增殖及系膜基質(zhì)增殖均減輕，偶見球囊粘連和節(jié)段硬化。見圖1。

2.4 腎組織免疫熒光檢測結(jié)果 對照組腎小球系膜區(qū)無IgA沉積，模型組腎小球系膜區(qū)有較強的呈線狀及塊狀結(jié)構(gòu)的IgA沉積，各治療組腎小球系膜區(qū)的IgA沉積熒光強度較弱。正常組和模型組大鼠腎組織IgA熒光強度比較有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），表明模型組大鼠腎組織IgA熒光強度明顯增強，實驗?zāi)Ｐ蛷?fù)制成功。各治療組與模型組IgA熒光強度比較有明顯減弱（P＜0.05）。

圖1 各組大鼠腎臟病理組織切片（HE染色，×200）

3 討 論

循環(huán)免疫復(fù)合物沉積所致的體液免疫機制參與IgA腎病的發(fā)病已經(jīng)得到公認。本實驗結(jié)果表明：造模6周起即出現(xiàn)不同程度的血尿和蛋白尿，腎臟免疫熒光顯示了IgA在腎小球系膜區(qū)呈團塊樣沉積，提示造模成功。此種沉積的免疫球蛋白從微觀辨證的角度可以認為是黏滯的濕濁之邪。

IgA腎病目前尚無有效的治療方法，根據(jù)其發(fā)病機理，一般采用免疫抑制劑、抗血小板聚集、控制誘發(fā)因素等治療。中醫(yī)學(xué)把IgA腎病歸屬于“尿血”、“腰痛”、“虛勞”等范疇。其病機為風(fēng)濕郁熱、痹阻腎絡(luò)之“腎痹證”，在治療上以清熱祛濕、宣痹通絡(luò)立法，予吳鞠通《溫病條辨》中的宣痹湯以治之。本實驗研究表明，宣痹湯能顯著減少IgA免疫復(fù)合物在腎臟中的沉積，同時改善血尿、蛋白尿，減輕腎臟病理學(xué)改變，降低SCr、BUN。其可能機制是該方具有免疫調(diào)節(jié)功能，影響IgA免疫復(fù)合物的生成、代謝、轉(zhuǎn)歸、排泄，從而減少免疫復(fù)合物在腎臟中的沉積。宣痹湯中杏仁、滑石、連翹、山梔、薏苡仁、半夏、赤小豆長于清熱除濕；防己、晚蠶沙、姜黃祛濕活絡(luò)；諸藥合用，使?jié)耢顭崆?、?jīng)絡(luò)宣通、腎痹自愈。本實驗結(jié)果表明：宣痹湯與雷公藤多苷片在減輕實驗性IgA腎病大鼠尿蛋白、保護腎功能及減少IgA在系膜區(qū)沉積的作用無明顯差異。宣痹湯在減輕炎癥反應(yīng)狀態(tài)、改善血尿方面明顯優(yōu)于雷公藤多苷片，而且無明顯副作用，其作用機理可能與復(fù)方的清熱祛濕、通絡(luò)止血的綜合作用較單味藥更為全面和緩有關(guān)。

綜上所述，可以認為宣痹湯能治療IgA腎病的作用機制可能與具有多層次綜合的抗炎及抗免疫作用，顯著抑制腎小球系膜區(qū)IgA的沉積、改善免疫功能有關(guān)。證明了該方藥對IgA腎病有較好的治療作用，值得進一步開發(fā)與研究。

[1]王海燕.腎臟病學(xué)[M].3 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：993.

[2]劉宏偉，盧景芬，李彩熙，等.滋腎止血片對實驗性IgA腎病小鼠腎組織氧自由基的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1996，22（6）：24-26.

[3]Lee S M K，Rao V M，F(xiàn)ranklin W A，et al.IgA nephropathy：Morphologie predietors of progressive renal disease[J].Hum Pathol，1982，13（6）：314-322.

Experimental Study of Xuanbi Decoction on IgA Nephropathy Rats

LI Jian-ying，SUN Yun-song，HU Wei-hua，et al
Qindao Haiser Hosipital，Qindao City，Shandong Province（Qingdao266033，Shandong）

Objective：To evaluate the mechanism ofXuanbi Decoctionon IgA nephropathy rat models.Methods：The IgA nephropathy rat model was copied by the methods of oral taking BSA and vein injection of SEB.Results：Reduction degrees including CRP，BUN and SCr in theXuanbi Decoctiongroups were more obvious than those of the tripterygium glycosides group.The fluorescence intensities of theseXuanbi Decoctiongroups were weaker than those of the model group.Meanwhile，in theseXuanbi Decoctiongroup，the glomerular were increased.However，the degrees of the mesangial cell and the mesangial matrix proliferations were weaker than those of the model group.Also，the number of the mesangial cell was lower than that of the model group.Conclusion：Xuanbi Decoctioncan reduce the microscopic heamaturia and deposits of the protein immunoglobulin A inside the glomeruli within the kidney.

Xuanbi Decoction；IgA nephoropathy

R285.5

A

1004-745X（2011）09-1435-02

山東省青島市科技發(fā)展計劃項目（08-2-1-7-nsh-4）

2011-04-04）