于 鴻 計(jì)忠宇 趙 輝 盧麗艷

河北醫(yī)科大學(xué)滄州中西醫(yī)結(jié)合臨床醫(yī)學(xué)院（河北滄州 061001）

定喘湯對(duì)支氣管哮喘大鼠氣道重塑及嗜酸粒細(xì)胞的影響*

于 鴻 計(jì)忠宇 趙 輝 盧麗艷

河北醫(yī)科大學(xué)滄州中西醫(yī)結(jié)合臨床醫(yī)學(xué)院（河北滄州 061001）

目的 觀察定喘湯抑制支氣管哮喘大鼠模型氣道重塑和嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)的作用。方法50只健康大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成正常對(duì)照組、哮喘模型組、定喘湯低、中、高劑量組，以卵白蛋白（OVA）致敏激發(fā)制備大鼠哮喘模型，觀察各組大鼠肺組織病理學(xué)改變，測(cè)定外周血中總IgE水平和肺泡灌洗液中嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果哮喘模型組肺組織病理學(xué)改變明顯；對(duì)外周血中總IgE水平，肺泡灌洗液中嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響，定喘湯各劑量組與哮喘模型組比較有顯著差異，定喘湯低、中、高劑量組比較無(wú)顯著差異。結(jié)論定喘湯治療支氣管哮喘的機(jī)制部分可能是通過(guò)抑制氣道重塑和減少嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)而實(shí)現(xiàn)的。

定喘湯 哮喘 氣道重塑 嗜酸粒細(xì)胞

定喘湯是以豁痰利肺，降逆平喘為法而組方的自擬中藥湯劑，經(jīng)臨床實(shí)踐治療支氣管哮喘療效滿意。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察定喘湯對(duì)大鼠哮喘模型外周血中總IgE水平，肺泡灌洗液中嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（EOS）及肺組織病理學(xué)改變等指標(biāo)，旨在探討定喘湯治療哮喘的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通雜種大鼠50只，雌雄兼用，體質(zhì)量150～200g，由滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物 定喘湯（射干、麻黃、紫菀、款冬花、半夏、陳皮、厚樸、桑白皮、茯苓、瓜蔞、杏仁等組成）按常法水煎2次混合后，按低、中、高劑量分別濃縮至每毫升含生藥1、2、4g的藥液備用，由滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室提供。

1.3 試劑與儀器 卵蛋白（OVA）為美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)；百日咳桿菌由北京生物研究所提供；IgE酶聯(lián)免疫試劑盒由上海銳谷生物科技有限公司提供。超聲霧化器為北京亞都YD-800型；Avant30低溫高速離心機(jī)為Beckman公司制造。

1.4 哮喘模型制備[1]以10%OVA 1mL，氫氧化鋁干粉100mg，滅活百日咳桿菌疫苗2mL（5×109個(gè)）腹腔注射致敏大鼠，2周后將大鼠置于密閉容器中，給予1%OVA溶液30mL霧化吸入激發(fā)哮喘，每次20min左右，連續(xù)3d后隔日再激發(fā)1次，以大鼠出現(xiàn)呼吸加快，口唇發(fā)紺，腹肌痙攣，點(diǎn)頭呼吸及站立不穩(wěn)等表現(xiàn)為激發(fā)成功。

1.5 分組與給藥 大鼠分成5組，每組10只。正常對(duì)照組用生理鹽水3mL灌胃；哮喘模型組于每次激發(fā)前用生理鹽水3mL灌胃；定喘湯低、中、高劑量組分別于每次激發(fā)前30min給3mL相應(yīng)劑量定喘湯灌胃。各組連續(xù)灌胃2周。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) （1）血清總IgE含量測(cè)定：以氯胺酮麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，從大鼠眼球取血0.5mL，經(jīng)3000r/min離心后分離血清，采用ELISA法測(cè)量IgE濃度，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。（2）支氣管肺泡灌洗液（BALF）檢測(cè)：大鼠眼球取血后，再行股動(dòng)脈放血，切開(kāi)氣管，插管，用一次性注射器取生理鹽水8mL作肺泡灌洗，重復(fù)3次，回收全部的BALF，要求回收率大于75%且無(wú)血液混入。每份樣本經(jīng)4℃，2000r/min離心10min，取上清液1～2mL，采用瑞氏姬姆沙染色，鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞中的嗜酸粒細(xì)胞，求出百分率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（3）病理學(xué)觀察：各組大鼠在肺泡灌洗完畢后處死，經(jīng)肺動(dòng)脈插管灌注4%多聚甲醛固定肺組織，取肺組織酒精脫水石蠟包埋切片，厚度為5μm，行蘇木精伊紅（HE）染色，鏡下觀察肺組織氣道炎癥性細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道平滑肌增厚等病理學(xué)改變。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS15.0軟件，數(shù)據(jù)以（±s）表示，兩兩比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清總IgE含量比較 見(jiàn)表1。定喘湯各劑量組與正常對(duì)照組比較有顯著差異（P＜0.05）；定喘湯各劑量組、正常對(duì)照組與哮喘模型組比較有顯著差異（P＜0.05）；定喘湯低、中、高劑量組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05），但隨著定喘湯劑量增加，血清總IgE水平呈下降趨勢(shì)。

表1 各組血清總IgE含量及EOS比較 （±s）

表1 各組血清總IgE含量及EOS比較 （±s）

與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與哮喘模型組比較，△P＜0.05。

EOS（%）3.96±0.98△29.16±2.81 5.73±1.99*△5.08±1.32*△4.79±1.11*△組 別 n 血清總IgE（IU/mL）正常對(duì)照組 10 10.82±1.33△哮喘模型組 10 32.51±1.93定喘湯低劑量組 10 14.48±1.07*△定喘湯中劑量組 10 13.07±1.65*△定喘湯高劑量組 10 12.19±1.41*△

2.2 各組肺泡灌洗液中EOS比較 見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，定喘湯各劑量組與正常對(duì)照組比較有顯著差異（P＜0.05）；定喘湯各劑量組、正常對(duì)照組與哮喘模型組比較有顯著差異（P＜0.05）；定喘湯低、中、高劑量組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05），但隨著定喘湯劑量增加，肺泡灌洗液中EOS逐漸減少。

2.3 HE染色 見(jiàn)圖1。光鏡下觀察，大鼠哮喘模型組氣管上皮細(xì)胞增多，基底膜、管壁平滑肌增厚，管腔狹窄，管壁內(nèi)有肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，氣管外層結(jié)締組織亦可見(jiàn)增生。定喘湯各劑量組大鼠小氣道壁黏膜及周?chē)M織僅見(jiàn)少量肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道上皮細(xì)胞增生不明顯。而正常對(duì)照組則無(wú)上述病理改變。

圖1 各組肺組織病理組織圖（HE，×200）

3 討 論

支氣管哮喘是由多種炎癥細(xì)胞和炎癥介質(zhì)參與的氣道慢性炎癥[2]。其炎癥細(xì)胞包括肥大細(xì)胞、EOS、T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，而其中EOS是關(guān)鍵的效應(yīng)細(xì)胞。氣道炎癥細(xì)胞釋放的各種活性物質(zhì)導(dǎo)致患者氣道損傷，隨之而來(lái)的是氣道的修復(fù)和重塑，氣道重塑是哮喘具特征性的病理改變。表現(xiàn)為氣道平滑肌的增厚、氣道基底膜增厚、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和腺體肥大，其結(jié)果導(dǎo)致相對(duì)不可逆的氣道狹窄。筆者自擬定喘湯有確定的臨床療效，但治療哮喘的病理機(jī)制尚不清楚，因此通過(guò)觀察定喘湯對(duì)大鼠哮喘模型氣道重塑和嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)的抑制作用，說(shuō)明定喘湯治療支氣管哮喘的機(jī)制部分是通過(guò)抑制氣道重塑和減少嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)而實(shí)現(xiàn)的。

[1]王文建，楊莉，王西華，等.川芎嗪對(duì)大鼠支氣管哮喘模型氣道重塑的影響及機(jī)制[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2004，27（12）：833-836.

[2]陳灝珠.實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M].11版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：1556.

Research of Dingchuan Decoction on Airway Remodelling and Eosinophil of Asthmatic Rats

YU Hong，JI Zhong-yu，ZHAO Hui，et al
Combination of Traditional Chinese and Western Hospital of Cangzhou City，Hebei Medical University（Cangzhou061001，Hebei）

Objective：To observe the effect ofDingchuan Decoctionon the airway remodelling and inhibition of inflammatory cells in rats with asthmatic.Methods：50 rats were randomly divided into 5 groups：the normal group，the model group，theDingchuan Decoctionlow-dose group，theDingchuan Decocitonmedium-dose group and theDingchuan Decocitonhigh-dose group.The chronic asthmatic model was established by repeated inhalation of ovalbumin.Rats were compared the morphological change of bronchial and lung tissues，the IgE of peripheral blood and the number of EOS in bronchoalveolar lavage fluid.Results：Comparing with the normal group and theseDingchuan Decoctiongroups，the bronchial and lung tissue morphology of the model group were significantly changed.Also，IgE of peripheral blood and the number of EOS in bronchoalveolar lavage fluid of the model group were significantly increased.There were some obvious differences among the the normal group and theDingchuan Decoctiongroups in the IgE and EOS.However，there were no remarkable differences among theseDingchuan Decoctiongroups in the IgE and the EOS.Conclusion：Dingchuan Decoctioncan treat asthma possibly by inhibition of the airway remodelling and decrease IgE and EOS

Dingchuan Decoction；Asthma；Airway remodelling；EOS

R285.5

A

1004-745X（2011）09-1437-02

河北省滄州市科技局科研課題（06ZD224）

2011-05-05）