黎映靜,劉星海

(深圳市龍崗區(qū)橫崗人民醫(yī)院,廣東深圳 518115）

腎小管的間質(zhì)纖維化為腎臟慢性疾病的發(fā)展終歸,也是終末期腎功能出現(xiàn)衰竭的原因,其纖維化的病變程度嚴重的影響了腎功能的情況,所以尋求改善和干預(yù)其纖維化的方法有著重要的臨床意義[1]。近年來轉(zhuǎn)化生長因子在纖維化的病變中作用已被肯定,被稱為纖維化的發(fā)展的重要決定因子[2],而綠茶中的兒茶素沒食子酸酯(EGCG）抗氧化的作用最為有效,是重要的非酶抗氧化劑。本文通過動物實驗的方法分析了EGCG對大鼠的神纖維化的保護作用和機制,現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 對象和材料選取30只雄性SD大鼠為研究對象,隨機分為3組,假手術(shù)組、梗阻組、ECGC組各10只,3組大鼠術(shù)前體重差異無統(tǒng)計學(xué)差異,均證實為健康大鼠。TGF-β免疫化試劑盒購自上海豐翔生物科技有限公司,EGCG試劑為本實驗室自行提供。

1.2 模型制作梗阻組及EGCG組行單側(cè)的輸尿管結(jié)扎術(shù),乙醚對大鼠麻醉之后,75%的乙醇消毒,腹正中偏左切口,切開皮膚及腹腔,對腎臟及輸尿管游離,組織鉗托起左側(cè)輸尿管的中段,以止血鉗夾住后,4-0絲線自兩端行結(jié)扎,結(jié)扎部位在腎盂的近端及遠端。兩結(jié)扎點中點行剪斷,之后縫合皮膚。假手術(shù)組采用相同入路分離輸尿管,但不行結(jié)扎。假手術(shù)組及梗阻組在術(shù)前1 d生理鹽水灌胃,EGCG組給予EGCG灌胃,劑量均為20 mg/(kg?d）,連續(xù) 3 d。EGCG組術(shù)后第7 d同劑量EGCG注射液靜脈注射。

1.3 檢測方法術(shù)前,術(shù)后2 d、4 d、6 d、8 d測量大鼠體重、血肌酐值、24 h尿蛋白量、尿糖定性。術(shù)后8 d處死大鼠后左腎組織HE染色分析腎組織纖維化情況,免疫組化法測定隨即10高倍鏡的視野內(nèi)免疫組化(+）的計數(shù),半定量分析以(+）細胞數(shù)在視野中的平均百分比計算[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)均用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件包進行處理。計量數(shù)據(jù)以x-±s表示,采用t檢驗,計數(shù)數(shù)據(jù)采用 χ2檢驗。且P＜0.05為對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 體重改變3組大鼠術(shù)前及術(shù)后8 d內(nèi)體重變化情況見表1,組內(nèi)比較,術(shù)前及術(shù)后8 d各組間體重變化均用統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05）,組間比較,3組大鼠術(shù)前體重?zé)o明顯差異(P＞0.05）,術(shù)后8 d,假手術(shù)組體重＞ECGC組＞梗阻組,但差異無統(tǒng)計學(xué)差異。

表1 3組大鼠術(shù)前及術(shù)后8 d內(nèi)體重變化情況(x-±s,g）

2.2 TGF-β 比較3 組大鼠腎間質(zhì) TGF-β(+）細胞計數(shù)比較見表2,由此可見3組大鼠中EGCG組TGF-β表達明顯低于梗阻組,而EGCG組低于假手術(shù)組,差異均用統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05）。

2.3 病理學(xué)差異術(shù)后第8天HE染色顯示可見假手術(shù)組的結(jié)構(gòu)維持正常,其腎間質(zhì)未見明顯改變,腎小管的上皮細胞整齊排列,保持完整的細胞結(jié)構(gòu),小管間的間隙緊密,其小管的間質(zhì)未見炎性細胞的浸潤,基底膜顯示光滑連續(xù);梗阻組的間質(zhì)存在大量的炎性細胞的浸潤,纖維組織明顯增生,腎小管部分萎縮,管腔出現(xiàn)閉塞或者擴張及壞死,小管的基底膜出現(xiàn)不同程度的斷裂及增厚,且小管壁明顯變薄,小管的上皮細胞的結(jié)構(gòu)嚴重破壞;EGCG組的間質(zhì)有少量炎性細胞的浸潤,纖維組織輕微增生,其腎小管的擴張較輕,腎小球萎縮輕,且腎小囊有所擴張,保留了部分正常小管及小球結(jié)構(gòu)。

表2 3組大鼠腎間質(zhì)TGF-β(+）細胞計數(shù)比較(x-±s,%）

3 討論

慢性的腎病的在進展中的病理變化主要表現(xiàn)在腎小球的硬化、腎小管的萎縮以及腎間質(zhì)的纖維化,其中腎功能損害的程度和腎臟的纖維化的病變程度有著重要的關(guān)系[4]。在慢性腎病所引發(fā)的腎小管的上皮細胞凋亡及腎間質(zhì)的炎性細胞浸潤、纖維細胞聚集的過程中,均有著較多的促纖維化因子參與,細胞外的基質(zhì)生成逐步增多、而降解度則明顯減少,從而產(chǎn)生了腎間質(zhì)的纖維化,腎功能也就出現(xiàn)了嚴重的受損。TGF-β各器官的組織纖維化過程之中發(fā)揮著重要作用,目前大多數(shù)的學(xué)者認為其是纖維化的形成和發(fā)展啟動樞紐[5],為關(guān)鍵性的細胞因子,特別是腎間質(zhì)的纖維化的程之中TGF-β起著重要的作用,其可以促進腎小球的系膜細胞出現(xiàn)大量增殖,系膜的基質(zhì)出現(xiàn)沉積,并誘導(dǎo)了腎小管的上皮細胞-間質(zhì)細胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)分,從而在參與到腎間質(zhì)的纖維化的進程之中。

茶多酚是從為茶葉內(nèi)提取的天然的多酚類的復(fù)合物,主要的生理活性包括抗腫瘤、抗氧化、清除自由基、調(diào)節(jié)心血管的作用,有著較強的抗菌、抗病毒、抗輻射的作用。茶多酚內(nèi)的主要成分是兒茶素類,其中EGCG是含量最高的有效成分,也是最強的抗氧化作用成分,在體內(nèi)外均能夠有效的清除一氧化氮、自由基等,以此提高了大鼠體內(nèi)的超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽類過氧化物酶的活性,從而降低了脂質(zhì)過氧化及脂褐質(zhì)的含量,并通過和金屬離子的絡(luò)合發(fā)揮了其較強的抗氧化的活性。有動物實驗表明[6],EGCG能夠通過對腎損害的大鼠體內(nèi)的氧自由基的清除作用來起到對脂質(zhì)的過氧化作用的抑制,同時也起到了促纖溶、抗凝的作用,改善了腎局部的血流動力,從而使尿素氮降低,延緩了腎臟的病理進行性的損害。

綜上所述,本文通過動物實驗的方法分析了EGCG對大鼠的神纖維化的保護作用和機制可以看出,EGCG在大鼠動物試驗中可見EGCG對大鼠腎臟纖維化形成抑制作用明顯,能夠有效的降低TGF-β的表達。

[1]徐志泉,易著文,何小解.沒食子兒茶素沒食子酸酯對大鼠腎衰的治療研究進展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(16）:247l.

[2]Forino M,Toregrossa R,CeolM,et al.TGF-betal induces epithelia-mesenchymal transition,but not myofibr oblast transdifftrntiation of human kidney tubularep ithelial cells in primary culture[J].Int J Exp Pathol,2006,87(3）:197.

[3]何小解,易著文,盧向陽,等.兒茶素對腎病綜合征大鼠療效研究[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2002,11(4）:342.

[4]馮江超,邵志成,龔雨順,等,沒食子兒茶素沒食子酸酯對大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及機制探討[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,24(6）:523.

[5]廖 明,李 彥,舒 偉,等.雞尾酒療法對大鼠肝星狀細胞的增殖及Ⅰ型膠原、TI MP-1mRNA表達的影響[J].世界華人消化雜志,2010,18(9）:932.

[6]Inagaki Y,Higashi K,Kushida M,et al.Hepatocyte growth factor suppresses profibrogenicsignal transduction via nuclearexport of Smad3with galectin-7[J].Gastroenterology,2008,134:1180.