楊志華 陳毅華 洪美華

清肺飲顆粒是本醫(yī)院的自制中藥制劑，該處方由黃芩、銀花、連翹、紫花地丁、桔梗、枇杷葉等藥物組成，具有清熱瀉火、涼血解毒、消痰止咳的功效。主要用于實熱火毒型急性咽喉炎，多見口腔潰爛、口舌生瘡;也用于肺、胃熱盛型的痤瘡，脂溢性皮炎等皮膚病的治療。本制劑在保持中醫(yī)用藥理論的前提下，結(jié)合現(xiàn)代研究成果將其制成療效可靠、質(zhì)量穩(wěn)定、攜帶服用方便的口服液。該制劑中成分復(fù)雜，綠原酸為主要成分之一，為控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，根據(jù)其所含化學(xué)成分及性質(zhì)，查閱相關(guān)文獻(xiàn)［1～5］，本文采用薄層掃描法測定制劑中綠原酸的含量，為制劑的質(zhì)量保證奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CS-9301PC型雙波長薄層色譜掃描儀(帶FDU-3電腦顯示及DR-13數(shù)據(jù)處理機(jī)，日本島津);高效硅膠G薄層板(青島海洋化工廠，20101015);定量毛細(xì)管(美國Drummond Scientific Co.);薄層板自動涂布器(重慶貝爾徳);BP211 d電子分析天平(Sartorius-德國)。

1.2 材料 清肺飲顆粒及所用藥材均由本醫(yī)院制劑室提供，綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;所用試劑均為AR級。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層層析與掃描條件的選擇 硅膠G層析板，于105℃活化約1 h，放入干燥器中備用;展開劑：醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上層溶液;λs=325 nm，λR=370 nm。狹縫為1.2 mm×1.2 mm;SX=3，靈敏度2;雙波長反射鋸齒掃描。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品2.5 mg，加甲醇使溶解，定容至5 ml搖勻，制成對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 量取本口服溶液10 ml，加于D101大孔吸附樹脂柱上，用50 ml水洗脫，棄取水洗液，再用20%乙醇30 ml，收集洗脫液，將20%乙醇液蒸干，殘渣加甲醇適量溶解并過濾，濾液加甲醇定容至5 ml，制成供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例，取缺金銀花的其他各味藥材適量，按制備工藝和供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 干擾性試驗 吸取供試品溶液、陰性對照溶液各2 μl，對照品溶液0.5 μl，分別點于同一硅膠G層析板上，照上述色譜條件掃描。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同吸收峰，陰性無干擾(結(jié)果見圖1)。

圖1

2.6 線性關(guān)系 精密吸取對照品溶液0.5、1、2、3、4 μl，分別點于同一薄層板上，展開，定位，按擬定條件進(jìn)行測定。以點樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y=21073.65X-7401.95，r=0.9982。結(jié)果表明綠原酸點樣量在0.24 μg～2.06 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗 精密吸取同一樣品(批號20110309)溶液各0.5 μl，點于同一硅膠G薄層板上共5個點，同法展開后測定，RSD為3.19%(n=5)。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液按上述條件點樣，展開，定位，每隔30 min掃描測定1次。結(jié)果表明，綠原酸斑點在2 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.22%。

2.9 重復(fù)性試驗 取批號20110309的樣品6份，分別按含量測定方法測定，平均含量為1.691 mg/ml，RSD為2.52%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.10 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，精密吸取已知含量的清肺飲顆粒樣品5份，分別加入一定量的綠原酸對照品，按上述方法制備樣品溶液。吸取1 μl點樣，按上述色譜條件測定綠原酸的含量，結(jié)果表明，加樣回收率為101.09%，RSD=1.69%。

2.11 樣品含量測定 分別精密吸取不同批號的清肺飲顆粒各10 ml按供試品溶液制法制備，精密吸取供試品溶液1 μl、對照品溶液0.5 μl與4 μl分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，依法展開測定，共測定樣品3次，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定

3 討論

3.1 本文章采用薄層掃描法對金銀花中綠原酸的含量進(jìn)行測定，在選擇薄層層析條件時進(jìn)行比較，醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上層溶液，正丁醇∶冰醋酸∶水(4∶1∶2)和氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸(4∶4∶2)。經(jīng)實驗選用醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上層溶液為展開劑能達(dá)到較好分離效果，斑點集中。

3.2 綠原酸含量測定試驗中，采用通過大孔樹脂排除干擾時，還應(yīng)注意選用洗脫液乙醇的比例，當(dāng)分別用水、10%以下濃度的乙醇液洗脫時，除去雜質(zhì)，不會造成綠原酸損失。選用20%及以上乙醇液經(jīng)檢驗含有綠原酸，故選用水及10%乙醇洗脫雜質(zhì)，收集20%乙醇洗脫液備用。

3.3 本文為了保證制劑的質(zhì)量，對不同產(chǎn)地的金銀花藥材中綠原酸的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的金銀花綠原酸的含量有較大差別，其中河南金銀花綠原酸的含量最高，所以本方規(guī)定制劑所用金銀花應(yīng)為河南產(chǎn)“蜜銀花”。

3.4 金銀花為方劑中主藥，綠原酸為金銀花的主要活性成分，故選擇綠原酸作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。通過上述研究，建立清肺飲顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時用于清肺飲顆粒的工藝篩選，穩(wěn)定性試驗，以及對原藥材的質(zhì)量控制，為全面控制制劑質(zhì)量提供了理想的方法。

［1］中華人民共和國藥典(一部).中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.部頒標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2808-97《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑第十二冊)，1997：6．

［3］王天志.金銀花中3種有機(jī)酸的反相高效液相色譜法定量分析. 藥物分析雜志，2000，20(5)：293．

［4］劉祥蘭.金銀花中綠原酸提取工藝的比較和優(yōu)化研究.中成藥，2000，22(6)：402．

［5］鄭占虎.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用.學(xué)苑出版社，1997．