韓文明

（中國(guó)航天科技集團(tuán)公司七三八療養(yǎng)院醫(yī)療部檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214081）

光激化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是一種利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)進(jìn)行免疫測(cè)定的方法，其基礎(chǔ)原理是一種均相免疫反應(yīng)。它是基于兩種微粒表面包被的抗原或抗體，在液相中形成免疫復(fù)合物而將兩種微粒拉近，在激光的激發(fā)下，發(fā)生微粒之間的離子氧的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而產(chǎn)生高能級(jí)的紅光，通過(guò)單光子計(jì)數(shù)器和數(shù)學(xué)擬合將光子數(shù)換算為靶分子濃度。而當(dāng)樣本不含靶分子時(shí)，兩種微粒間無(wú)法形成免疫復(fù)合物，兩種微粒的間距超出離子氧傳播范圍，離子氧在液相中迅速淬滅，檢測(cè)時(shí)則無(wú)高能級(jí)紅光產(chǎn)生。LiCA與傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光分析儀在方法和原理等方面存在一定差異，為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在使用中與i2000SR的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集標(biāo)本來(lái)自到中國(guó)航天科技集團(tuán)公司七三八療養(yǎng)院健康體檢的中國(guó)航天科技集團(tuán)公司上海第八研究院職工，共100例。

1.2 儀器與試劑

博陽(yáng)生物科技（上海）有限公司的LiCA光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀及原裝配套試劑，美國(guó)雅培公司的i2000SR化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀及原裝配套試劑，定值血清由博陽(yáng)生物提供。檢驗(yàn)過(guò)程均按照試劑和儀器操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 方法

所有標(biāo)本均抽取清晨空腹靜脈血4mL，離心分離血清待測(cè)。兩種儀器同時(shí)檢測(cè)100份血清中AFP和CEA，且用LiCA分別檢測(cè)AFP和CEA兩項(xiàng)指標(biāo)的低、高值定值血清。由于兩種儀器檢測(cè)方法不同，其檢測(cè)項(xiàng)目的正常范圍也不同。參考值：LiCA AFP 0～7ng/mL、CEA 0～8.2ng/mL；i2000SR AFP 0～13.4ng/mL、CEA 0～5ng/mL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組間采用配對(duì)t檢驗(yàn)和直線回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1 相關(guān)性試驗(yàn)

用LiCA和i2000SR同時(shí)對(duì)100份血清標(biāo)本檢測(cè)AFP和CEA兩項(xiàng)指標(biāo)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，LiCA和i2000SR兩種儀器檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性，且無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 LiCA與i2000SR檢測(cè)AFP和CEA結(jié)果比較（n=100）

2.2 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

用LiCA檢測(cè)AFP和CEA的低、高值定值血清（批號(hào)AFP：C1004；CEA：C1012）各測(cè)定20次，得低值和高值批內(nèi)精密度，CV在1.95%～4.65%之間，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)LiCA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度好。

表2 LiCA檢測(cè)AFP和CEA的低、高值定值血清的測(cè)定結(jié)果

3 討 論

LiCA檢測(cè)原理源于LOCI（luminescent oxygen channeling immunoassay，LOCI）技術(shù)，最初由Ullman等[1]在1994年報(bào)道，后由PerkinElmer公司生產(chǎn)相關(guān)試劑。該技術(shù)采用了納米級(jí)顆粒，增加了反應(yīng)表面積，極大地提高了檢測(cè)靈敏度，這種納米顆粒在液相中保持穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，并借助于“結(jié)合則發(fā)光”原理，實(shí)現(xiàn)了均相、一步、免清洗和高通量檢測(cè)[2]。檢測(cè)過(guò)程不易受到熒光淬滅現(xiàn)象、樣本常見(jiàn)干擾物質(zhì)、pH值、離子強(qiáng)度及溫度等因素的影響，保證了檢測(cè)穩(wěn)定性[3-5]。

本實(shí)驗(yàn)100例血清標(biāo)本分別用LiCA和i2000SR同時(shí)檢測(cè)AFP和CEA，各項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)均＞0.96；兩種儀器對(duì)各項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)，P＞0.05，表明LiCA和i2000SR具有較高的相關(guān)性。

對(duì)定值血清檢測(cè)結(jié)果表明，LiCA具有較好的準(zhǔn)確性和精密度，本法的批內(nèi)CV＜5%與其他文獻(xiàn)的報(bào)道基本一致[6,7]。LiCA是均相免疫測(cè)定法，避免了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、放射免疫法（RIA）等檢測(cè)方法中繁瑣的分離和洗滌步驟，且由于微粒表面積的增加，提高了檢測(cè)的靈敏度。

LiCA以其獨(dú)特的檢測(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了均相、免清洗檢測(cè)且具有標(biāo)本用量少、檢測(cè)速度快、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床和大批量健康體檢人群腫瘤篩查的檢測(cè)。

[1]Ullman EF,Kirakossian H,Singh S,et al.Luminescent oxygen channeling immunoassay: measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence[J].Proc Natl Acad Sci,1994,91(12):5426-5430.

[2]Ullman EF,Kirakossian H,Switchenko AC,et al.Luminescent oxygen channeling assay(LOCITM):sensitive,broadly applicable homogeneous immunoassay method[J].Clin Chem,1996,42(9):1518-1526.

[3]Poulsen F,Jensen KB.A luminescent oxygen channeling immunoassay for the determination of insulin in human plasma[J].Biomol Screen,2007,12(2):240-247.

[4]Li Y,Choi M,Cavey G,et al.Crystallographic identification and functional characterization of phospholipids as ligands for the orphan nuclear receptor steroidogenic factor-1[J].Mol Cell,2005,17(4):491-502.

[5]Motola DL,Cummins CL,Rottiers V,et al.Identif i cation of ligands for DAF-12 that govern dauer formation and reproduction in C.elegans[J].Cell,2006,124(6):1209-1223.

[6]高云朝,趙衛(wèi)國(guó).光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)甲胎蛋白實(shí)驗(yàn)性能評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,24(8):578-581.

[7]Le Moigne F,Beauvieux MC,Derache P,et al.Determination of myoglobin: comparative evaluation of the new automated VIDAS assay with two other immunoassays[J].Clin Biochem,2002,35(4):255-262.