周 欣 鐘兆健 宋粉云

（廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

窈窕茶為香港注冊的中藥成方制劑，由厚樸、陳皮、決明子等十味中藥制成，具有通便散熱結(jié)、利水消腫、理氣健脾的功效。臨床主要用于治療因腸胃積熱、水濕內(nèi)停導(dǎo)致肢體沉重浮腫，大便秘結(jié)、腹脹、腹痛，口干口燥，小便不利等癥狀。決明子為窈窕茶的藥味之一，其主要有效成分為大黃酚，為此建立了窈窕茶中大黃酚含量測定的反相高效液相色譜法，具有分離效果好、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可控制其質(zhì)量。

1 儀器與試藥

SHIMADU LC-10Avp（日本島津公司高效液相色譜儀）；SHIMADU SPD-10Avp（日本島津公司紫外檢測器）；SHIMADU SIL-20A（日本島津公司自動進(jìn)樣器）；SHIMADU LC-10ASvp（日本島津公司柱溫箱）；LC solution工作站（日本島津公司）。超聲波清洗器KQ5200，頻率（35±5）%KHz；功率250W（昆山市超聲儀器有限公司）。

窈窕茶（批號：I0509Y、H1201Y、I06620Y，香港北京制藥廠提供），規(guī)格為2g/包；大黃酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，0796-200205）；甲醇為色譜醇，水為雙蒸水，其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

對照品溶液：精密稱取大黃酚對照品22.0mg，置100mL量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）稀釋至刻度，搖勻。精密量取20mL，置100mL量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（大黃酚濃度為44.0μg/mL）。

供試品溶液：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約10g，精密稱定，置于150mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100mL，密塞，稱定重量；超聲40min；放冷后再稱定，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻后濾過。精密量取續(xù)濾液50mL，蒸干，加10%鹽酸溶液30mL，水浴中加熱水解1h。冷卻后用三氯甲烷振搖提取4次，每次30mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑。殘?jiān)脽o水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶解，移至10mL量瓶中，用無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

陰性對照溶液：取處方組成中除決明子外的其余成分制成陰性對照，按供試品溶液制備方法處理得陰性對照溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：DiamonsidTM-C18色譜柱柱（250mm×4.6mm，5μm，迪馬公司），流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液（90∶10）；流速：1.0mL/min；檢測波長：254nm；柱溫：40℃。分別吸取大黃酚對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL注入色譜儀；理論塔板數(shù)以大黃酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，大黃酚拖尾因子1.10，保留時間約為13min，且大黃酚與相鄰組分峰達(dá)到基線分離，陰性樣品對大黃酚測定無干擾；結(jié)果見圖1。

圖1 大黃酚對照品、樣品及陰性的高效液相色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密量取上述大黃酚對照品溶液分別用無水乙醇-乙酸乙酯（體積比2∶1）制成大黃酚濃度為17.6、22.0、26.4、30.8、35.2、39.6、44.0μg/mL的溶液。依次進(jìn)樣10μL，每個濃度測定3次以上；以峰面積（A）對對照品溶液系列濃度（C）進(jìn)行回歸分析，得大黃酚回歸方程：A=47005C-6667.6，相關(guān)系數(shù)r=0.9996；結(jié)果表明大黃酚在17.6～44.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為30.8μg/mL的大黃酚對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積的RSD為0.41%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號I0509Y）在0、2、4、6、8、12h分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果大黃酚峰面積的RSD=1.63%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號（批號I0509Y）樣品6份，按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備。依法測定大黃酚的平均含量為0.062mg/g，RSD值為0.91%（n=6），表明分析方法精密度良好。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取窈窕茶樣品（批號I0509Y）共6份，每份5g，分別加入相應(yīng)量的大黃酚對照品，按供試品溶液的制備方法處理并依法測定并計(jì)算回收率。測得大黃酚平均回收率為97.6%（n=6），RSD=2.10%；結(jié)果見表1。

表1 大黃酚回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.8 樣品的測定

分別稱取窈窕茶樣品3批（批號：I0509Y、I0602Y 、H1201Y），平均裝量依次為：2.29g、2.24g和2.24g，每批3份，按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算樣品中大黃酚的含量；結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討 論

3.1 樣品提取中常規(guī)采用加熱回流的方式[1]，實(shí)驗(yàn)中通過與超聲提取方法進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)超聲亦能達(dá)到提取的目的，并且簡化了實(shí)驗(yàn)操作也縮短了時間，經(jīng)過摸索，最終確定為本文方法，超聲40min[2,3]。

3.2 對流動相的選擇也進(jìn)行了選擇和比較，由于大黃酚為弱酸性物質(zhì)，容易解離，因此采用甲醇-磷酸溶液為流動相體系抑制其水解，但是按照藥典方法采用0.1%磷酸溶液時發(fā)現(xiàn)拖尾因子較大，峰形不對稱；在參考文獻(xiàn)后，最終確定選用本文中0.2%磷酸溶液為流動相[4-6]，拖尾因子均得到很好的改善，＜1.2，峰形對稱性良好；同時在比較流動相配比后，確定甲醇-0.2%磷酸溶液為90∶10時為最佳，大黃酚出峰時間為約13min，并且與樣品中其他成分達(dá)到了很好的分離。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010年版)一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:135-136.

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