張少軍 鄭振山 陳勇達(dá) 王 莉 錢 訓(xùn)

（河北省農(nóng)林科學(xué)院遺傳生理研究所，河北石家莊 050051）

大白菜〔Brassica compestrisL. ssp.pekinensis（Lour）Olsson〕是我國冬春季主要的消費(fèi)蔬菜，也是出口創(chuàng)匯的主要蔬菜品種之一。我國大白菜播種面積居各類蔬菜之首，而由真菌引起的霜霉病等病害嚴(yán)重影響著大白菜的品質(zhì)和產(chǎn)量，流行年份減產(chǎn)可達(dá)50%左右（呂佩珂，1982）。新型殺菌劑吡唑醚菌酯（圖1）是以天然的Strobilurin A為先導(dǎo)化合物開發(fā)出的醚菌酯類殺菌劑（侯春青 等，2002；Karadimos et al.，2005；Forster et al.，2006；王佩圣 等，2007；張福遠(yuǎn) 等，2007；張鳳蘭，2008；Mercader et al.，2008），其抑菌機(jī)理是作用于真菌線粒體呼吸鏈中細(xì)胞色素bc1復(fù)合物，阻止電子轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，與常用的殺菌劑沒有交互抗藥性，藥效試驗(yàn)表明對蔬菜的真菌性病害如白粉病、霜霉病、炭疽病和葉斑病等有較好的防治效果（侯春青 等，2002）。

在我國，農(nóng)藥的不合理使用導(dǎo)致的農(nóng)產(chǎn)品及其加工制品中的農(nóng)藥殘留問題時(shí)有發(fā)生，對消費(fèi)者的健康構(gòu)成了威脅；此外，農(nóng)藥殘留問題也是影響農(nóng)產(chǎn)品出口貿(mào)易的一個(gè)重要因素。目前尚沒有吡唑醚菌酯在我國大白菜上的殘留研究數(shù)據(jù)，本試驗(yàn)圍繞吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留動(dòng)態(tài)開展研究，以探明吡唑醚菌酯在我國大白菜上的殘留規(guī)律，提出殺菌劑吡唑醚菌酯在我國大白菜上的合理使用建議。

圖1 吡唑醚菌酯

1 材料與方法

1.1 試劑

250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油，吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（99.7%），國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心提供；乙腈，色譜純；水，二次去離子水；丙酮、正己烷、甲苯、二氯甲烷、氯化鈉，分析純試劑；無水硫酸鈉，550 ℃烘烤2 h，于干燥器中冷卻后置于密閉容器中保存；硅膠柱：120 mm×10 mm玻璃柱，下塞脫脂棉，1 g硅膠，加8 mL正己烷調(diào)勻后濕法裝柱，上部以1 cm厚無水硫酸鈉封頂，用5 mL正己烷預(yù)淋。

1.2 儀器

Agilent 1100液相色譜儀，帶可變波長檢測器和色譜工作站（安捷倫科技有限公司生產(chǎn)）；高速組織搗碎機(jī)（江蘇江陰科研器械廠生產(chǎn)）；勻漿機(jī)（德國IKA生產(chǎn)）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)）；常規(guī)玻璃儀器（天津市天玻玻璃儀器有限公司生產(chǎn)）；QTH-16噴霧器（臺(tái)州市綠蜻蜓噴霧器有限公司生產(chǎn)）。

1.3 田間試驗(yàn)

試驗(yàn)于2010年在河北省石家莊市、湖南省長沙市進(jìn)行。河北試驗(yàn)點(diǎn)大白菜品種為天正夏白2號(hào)（河北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供），8月8日播種，起壟種植，定植密度2 800株·（667 m2）-1；湖南試驗(yàn)點(diǎn)大白菜品種為夏冬青（湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供），8月 20日播種，起壟種植，定植密度 3 000 株·（667 m2）-1。

1.3.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn) 在大白菜長至成熟個(gè)體 1/2大小時(shí)一次性施藥，用背負(fù)式噴霧器均勻噴霧，施藥劑量25 g·（667 m2）-1，藥液量40 L·（667 m2）-1，3次重復(fù)，小區(qū)面積30 m2。于施藥后1 h，1、3、7、14、21、28、35 d隨機(jī)采集大白菜樣品，每小區(qū)至少采集4株，不少于2 kg，切除根部，去掉明顯腐壞和萎蔫部分的莖葉，將剩余大白菜全株切碎混勻，采用四分法留取150 g樣品2份供測定。

1.3.2 最終殘留試驗(yàn) 設(shè)2個(gè)施藥劑量，分別為12.50 g·（667 m2）-1和18.75 g·（667 m2）-1，各設(shè)3次、4次施藥，3次重復(fù)，小區(qū)面積30 m2，小區(qū)之間用保護(hù)田埂隔開。于大白菜收獲前1個(gè)月開始施藥，施藥間隔期為7 d，3次施藥處理晚于4次施藥處理7 d開始施藥。于最后一次施藥后3、5、7 d采集大白菜樣品，采樣和處理方法同1.3.1。

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取 稱取上述經(jīng)切碎混勻的大白菜樣品25 g，加入100 mL丙酮，勻漿后抽濾，濾液于50 ℃水浴中減壓蒸除大部分丙酮，加入100 mL 10%氯化鈉溶液，用二氯甲烷萃取3次，每次50 mL，收集二氯甲烷萃取液，減壓蒸至近干，加入5 mL正己烷，蒸至約3 mL，待硅膠柱凈化。

1.4.2 凈化 硅膠柱用5 mL正己烷預(yù)淋，待液面降至硅膠頂部時(shí)，將殘留物上柱，再用1 mL正己烷洗滌容器后上柱，棄去淋出液，依次用淋洗劑A（甲苯/正己烷，65V∶35V）、B（甲苯）、C（甲苯/丙酮，95V∶5V）、D（甲苯/丙酮，8V∶2V）各3 mL洗滌容器后上柱，淋完后再各用6 mL淋洗劑分兩次洗滌容器后上柱，合并收集C、D兩組分淋出液于20 mL試管中，50 ℃水浴氮?dú)獯蹈桑靡译娑ㄈ葜? mL待測。

1.5 色譜檢測條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18，4.6 mm×250 mm，5 μm；流動(dòng)相：乙腈/水（70V∶30V）；流量：1 mL·min-1；檢測波長：275 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯殘留分析方法考察

在本試驗(yàn)色譜條件下測定吡唑醚菌酯的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以峰面積對進(jìn)樣量作圖，繪制吡唑醚菌酯的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，在0.1～10.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)其回歸方程為y=3.415 9x+2.941 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9；以3倍信噪比計(jì)算，該方法的最小檢出量為 1 ng，最低檢出濃度為 0.04 mg·kg-1。取對照大白菜樣品，做添加回收率試驗(yàn)，添加濃度分別為0.04、0.20、2.00 mg·kg-1，每個(gè)濃度做5個(gè)平行試驗(yàn)，吡唑醚菌酯的回收率在70%～106%之間，變異系數(shù)為6.6%～10.0%（表1），表明該方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留測定的要求。從樣品譜圖可以看出（圖2），吡唑醚菌酯峰型對稱，與樣品基質(zhì)中其他干擾組分能夠?qū)崿F(xiàn)基線分離，譜圖和添加回收率試驗(yàn)證明該方法能夠用于大白菜中吡唑醚菌酯殘留量的分析測定。

表1 吡唑醚菌酯在大白菜中的添加回收率

2.2 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動(dòng)態(tài)

對河北和湖南兩地的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)樣品進(jìn)行了分析測定，吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留消解動(dòng)態(tài)曲線見圖3。兩地消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)樣品殘留量檢測結(jié)果均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征，河北試驗(yàn)點(diǎn)施藥當(dāng)天吡唑醚菌酯在大白菜上的原始沉積量為40.4 mg·kg-1，殘留量按C=28.8e-0.234T降解，相關(guān)系數(shù)r=-0.943 4，半衰期為2.97 d；湖南試驗(yàn)點(diǎn)施藥當(dāng)天吡唑醚菌酯在大白菜上的原始沉積量為40.1 mg·kg-1，殘留量按C=22.4e-0.208T降解，相關(guān)系數(shù)r=-0.964 7，半衰期為3.34 d（表2）。兩組試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在河北和湖南兩地不同的氣候條件下，吡唑醚菌酯在大白菜上的消解速率相差不大，且半衰期均較短，說明吡唑醚菌酯在大白菜上比較易于降解。

圖2 大白菜樣品液相色譜圖

圖3 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動(dòng)態(tài)曲線

2.3 吡唑醚菌酯在大白菜中的最終殘留檢測結(jié)果

對河北和湖南兩地的最終殘留試驗(yàn)樣品進(jìn)行了分析測定，結(jié)果見表3。按推薦劑量 12.50 g·（667 m2）-1和 1.5 倍劑量 18.75 g·（667 m2）-1，施藥3次、4次，距末次施藥3、5 d，吡唑醚菌酯在大白菜中的殘留量為1.50～7.68 mg·kg-1；距末次施藥7 d，吡唑醚菌酯在大白菜中的殘留量為0.96～2.70 mg·kg-1。施藥次數(shù)和施藥劑量對大白菜的最終殘留結(jié)果有一定影響，在施藥次數(shù)相同的情況下施藥劑量大的處理最終殘留量高于劑量小的處理，在施藥劑量相同的情況下施藥次數(shù)多的處理最終殘留量高于施藥次數(shù)少的處理。

表2 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動(dòng)態(tài)

表3 吡唑醚菌酯在大白菜中的最終殘留測定結(jié)果

3 結(jié)論

目前，我國和聯(lián)合國食品法典委員會(huì)（CAC）尚未規(guī)定吡唑醚菌酯在大白菜上的最高殘留限量（MRL）值，日本規(guī)定吡唑醚菌酯在大白菜上的MRL為5 mg·kg-1，美國規(guī)定吡唑醚菌酯在蔬菜上MRL值也為5 mg·kg-1。以此為依據(jù)，根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油防治大白菜炭疽病，按推薦劑量和次數(shù)施藥，距最后一次施藥 7 d收獲的大白菜中吡唑醚菌酯殘留量滿足殘留限量要求，食用安全。

侯春青，李志念，劉長令.2002.新型Strobin類殺菌劑唑菌胺酯.農(nóng)藥，41（6）：34，41-43.

呂佩珂.1982.包頭市白菜霜霉病流行規(guī)律與防治.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，（4）：26-31.

王佩圣，程星，朱金鈺，趙清春，寇書蓮.2007.60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)水分散粒劑（百泰）防治黃瓜疫病田間藥效試驗(yàn).農(nóng)藥科學(xué)與管理，（9）：43-45.

張鳳蘭.2008.大力發(fā)展大白菜生產(chǎn)和消費(fèi)新模式.中國蔬菜，（1）：9.

張福遠(yuǎn)，王紹敏，劉秀玲，李霞，梁金云.2007.60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)（百泰）水分散粒劑對卵菌綱真菌引起的蔬菜病害控制作用研究.農(nóng)藥科學(xué)與管理，（7）：35-37.

Forster W A，Zabkiewicz J A，Liu Z Q.2006.Cuticular uptake of xenobiotics into living plants.part 2：influence of the xenobiotic dose on the uptake of bentazone，epoxiconazole and pyraclostrobin，applied in the presence of various surfactants，intoChenopodium album，Sinapis albaandTriticum aestivumleaves.Pest Management Science，62（7）：664-672.

Karadimos D A，Karoglanidis G S，Tzavella-Klonari K.2005.Biological activity and physical modes of action of the Qoinhibitor fungicides trifloxystrobin and pyraclostrobin againstCercospora beticola.Crop Protection，24（1）：23-29.

Mercader J V，Suarez-pantaleon C，Agullo C，Abad-somovilla A，Abad-fuentes A.2008.Production and characterization of monoclonal antibodies specific to the strobilurin pesticide pyraclostrobin.Journal of Agricultural and Food Chemistry，56（17）：7682-7690.