何 飛 徐儉樸 吳曉暉 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 杭州 310003蔡宛如 王 輝 劉 莎 浙江中醫(yī)藥大學(xué)洪輝華 浙江省中醫(yī)院

肺血管重構(gòu)表現(xiàn)為內(nèi)皮損傷、肺動(dòng)脈壁變厚、管腔狹窄甚至最終血管腔消失，這是肺動(dòng)脈高壓中最主要的一種病理改變，其在肺動(dòng)脈高壓發(fā)生及不可逆性肺動(dòng)脈高壓形成過程中起關(guān)鍵作用，而內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂是肺血管重構(gòu)的重要基礎(chǔ)[1-2]。本實(shí)驗(yàn)觀察血府逐瘀湯對(duì)野百合堿誘導(dǎo)肺血管重構(gòu)大鼠ET-1、NO的干預(yù)作用，探討該方劑干預(yù)肺血管重構(gòu)的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物及分組 雄性SD大鼠54只，體質(zhì)量200±20g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為：正常對(duì)照組、模型組、血府逐瘀湯預(yù)防組、血府逐瘀湯治療組、對(duì)照Ⅰ組和對(duì)照Ⅱ組，每組9只。

1.2 藥物及試劑 血府逐瘀湯，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑室制成流浸膏，生藥含量2.2g/mL；硝苯地平片，浙江萬馬藥業(yè)有限公司；野百合堿（MCT）：Sigma公司；ET-1放免測(cè)試盒，解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；NO試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 造模及給藥 將野百合堿充分溶解于2：8乙醇生理鹽水中，配制成1%濃度。模型組、血府逐瘀湯預(yù)防組、血府逐瘀湯治療組、對(duì)照Ⅰ組和對(duì)照Ⅱ組按60mg/kg的劑量腹腔注射野百合堿溶液，正常組腹腔注射等量2：8乙醇生理鹽水。給藥途徑均采用灌胃，1天1次。血府逐瘀湯預(yù)防組和對(duì)照Ⅰ組從造模第2天開始分別予血府逐瘀湯8.75g/（kg·d）和硝苯地平10mg/（kg·d），至第28天；血府逐瘀湯治療組和對(duì)照Ⅱ組從造模第15天開始分別予血府逐瘀湯8.75g/（kg·d）和硝苯地平10mg/（kg·d），至第28天。正常組及模型組予等量生理鹽水。末次給藥后1h采集標(biāo)本。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 血管內(nèi)皮功能測(cè)定 血漿內(nèi)皮素-1（ET-1）含量采用放免法測(cè)定，按照試劑盒說明書操作；血清NO含量采用酸還原酶法測(cè)定，按照試劑盒說明書操作。

1.4.2 肺小動(dòng)脈觀察 取右下葉肺組織，右肺門橫斷取材，常規(guī)石蠟制片，作HE染色觀察肺小動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變，采用圖象分析儀測(cè)量與終末細(xì)支氣管伴行的肺小動(dòng)脈管腔內(nèi)徑（ID）、外徑（ED）、管腔面積（VA）、血管總面積（TAA），然后分別計(jì)算管壁厚度（WT）=管腔外徑-內(nèi)徑，管壁面積（MA）=血管總面積-管腔面積，最后計(jì)算管壁厚度與血管外徑比值（WT%）和管腔面積與血管總面積比值（VA%），每張切片均選取3個(gè)小動(dòng)脈進(jìn)行定量分析，并取其平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組大鼠血ET-1、NO含量比較 模型組與正常組比較，大鼠血清NO水平下降，血漿ET-1含量上升（P均＜0.01）；與模型組比較，血府逐瘀湯預(yù)防組和對(duì)照Ⅰ組NO水平升高，ET-1含量降低（P均＜0.01），血府逐瘀湯預(yù)防組與對(duì)照Ⅰ組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血府逐瘀湯治療組和對(duì)照Ⅱ組ET-1含量均降低（P均＜0.01），血府逐瘀湯治療組NO含量無顯著升高（P均＞0.05），血府逐瘀湯治療組與對(duì)照Ⅱ組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。血府逐瘀湯預(yù)防組NO含量較血府逐瘀湯治療組升高（P＜0.05），兩組ET-1含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組大鼠血NO、ET-1水平比較（±s）

表1 各組大鼠血NO、ET-1水平比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別n/只NO/（μmol/L）ET-1/（ng/L）正常組 9 50.67±11.70 102.96±8.14模型組 8 17.69±5.03△△ 148.38±13.47△△血府通瘀湯預(yù)防組 9 28.87±7.70△△** 123.77±11.81△△**血府通瘀湯治療組 9 21.38±3.02△△ 130.88±8.81△△**對(duì)照Ⅰ組 9 34.33±9.19△△** 115.27±7.41△**對(duì)照Ⅱ組 9 26.37±6.76△△* 128.39±8.19△△**F值 19.79 20.85 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.2 各組大鼠肺小動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)比較（HE染色）

光鏡下見正常組大鼠肺小動(dòng)脈管壁薄，內(nèi)皮細(xì)胞扁平連續(xù)，厚薄較一致；模型組小動(dòng)脈管腔變小、不規(guī)則，內(nèi)皮細(xì)胞變性腫脹，平滑肌細(xì)胞增生肥厚明顯；各藥物組大鼠肺小動(dòng)脈血管壁稍增厚、管腔略有變窄，見圖1～6（封四）。

圖像分析結(jié)果顯示，模型組大鼠肺小動(dòng)脈管壁增厚、管腔狹窄明顯，WT%明顯增大，VA%則明顯減小，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各藥物組管壁增厚、管腔狹窄不明顯，肺小動(dòng)脈WT%均明顯降低，VA%均明顯增大，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01～0.05）；血府逐瘀湯預(yù)防組和對(duì)照Ⅰ組、血府逐瘀湯治療組和對(duì)照Ⅱ組及血府逐瘀湯預(yù)防組和血府逐瘀湯治療組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組大鼠肺小動(dòng)脈WT%、VA%比較（±s）

表2 各組大鼠肺小動(dòng)脈WT%、VA%比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05 ，**P＜0.01

組 別 n/只 WT% VA%正常組 9 22.59±4.43 29.44±5.74模型組 8 44.55±10.16△△ 10.28±3.03△△血府通瘀湯預(yù)防組 9 34.26±7.23△△** 22.86±7.09△**血府通瘀湯治療組 9 35.64±6.33△△* 18.77±4.66△△**對(duì)照Ⅰ組 9 30.36±6.59△** 23.68±6.84△**對(duì)照Ⅱ組 9 33.96±7.55△△** 21.28±4.26△△**F值 8.48 11.21 P值 9 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

肺血管重構(gòu)是肺動(dòng)脈高壓不可逆發(fā)展的基本因素，雖然目前已經(jīng)明確血小板、成纖維細(xì)胞和原位血栓的形成等參與了肺血管重構(gòu)，但內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂和肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖是導(dǎo)致血管重構(gòu)進(jìn)而出現(xiàn)肺動(dòng)脈高壓的主要原因。在正常生理?xiàng)l件下，內(nèi)皮細(xì)胞通過產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)調(diào)節(jié)血管的緊張度和正常血管結(jié)構(gòu)，而在特定條件下（如各種損傷和缺氧等）這種調(diào)節(jié)功能發(fā)生紊亂，一方面使血管擴(kuò)張物質(zhì)PGI2和內(nèi)皮衍生舒張因子（如NO）減少，另一方面肺血管內(nèi)皮釋放的內(nèi)皮衍生收縮因子（如ET-1）增加，而血管內(nèi)皮細(xì)胞受損后，許多有害物質(zhì)直接作用于平滑肌細(xì)胞，這些都導(dǎo)致肺血管反應(yīng)異常和重構(gòu)。NO能夠抑制平滑肌細(xì)胞增生、血小板凝集和下調(diào)ET-1，對(duì)肺血管有舒張作用[3]；ET-1在內(nèi)皮系統(tǒng)廣泛表達(dá)，具有血管收縮活性和血小板聚集能力[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，模型組大鼠血NO含量下降，ET-1含量上升，而血府逐瘀湯各組能逆轉(zhuǎn)兩者平衡的失調(diào)，其中血府逐瘀湯預(yù)防組較血府逐瘀湯治療組更能改善NO代謝，從而達(dá)到干預(yù)肺血管重構(gòu)的目的。

中醫(yī)認(rèn)為，肺臟久病，肺腎兩虛，病邪由氣入血而病絡(luò)，或邪氣直接擴(kuò)散入于肺絡(luò)，絡(luò)氣虧虛，氣虛無力推動(dòng)血及津液的正常運(yùn)行而致血停成瘀，津聚為痰，痰濁、瘀血有形之邪阻塞肺絡(luò)，病理因素主要仍是“痰”和“瘀”。血府逐瘀湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)》，是清代王清任用以治療“胸中血府血瘀”所致諸癥的經(jīng)驗(yàn)方。方中以桃紅四物湯活血化瘀而養(yǎng)血，防純化瘀之傷正；四逆散疏理肝氣，使氣行則血行；加桔梗引藥上行達(dá)于胸中（血府）并宣肺祛痰，牛膝引瘀血下行而通利血脈；諸藥相合，構(gòu)成理氣活血之劑。本方活血化瘀而不傷血，理氣而不耗氣，廣泛用于由瘀血阻滯所致的各種病證。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血府逐瘀湯能有效減輕肺血管重構(gòu)，病理上表現(xiàn)為減輕管壁增厚及管腔狹窄，其機(jī)制可能與通過調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)NO和ET-1水平有關(guān)。

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