馬亮英，謝晶，林伊梅，馬莉（.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科，烏魯木齊市83008；.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，烏魯木齊市 830054）

痤瘡（Acne）是一種毛囊皮脂腺的慢性炎癥，主要發(fā)生于面、胸、背等處，形成黑頭、丘疹、膿包、結(jié)節(jié)等損害[1]。輕者影響容顏而煩惱[2]，嚴(yán)重者甚至?xí)a(chǎn)生自殺傾向[3]，影響患者的身心健康。痤瘡洗劑是新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院自制制劑，主要成分為甲硝唑、己烯雌酚，用于痤瘡及脂溢性皮炎的治療。為控制該制劑質(zhì)量，筆者采用系數(shù)倍率分光光度法測定痤瘡洗劑中2組分含量，結(jié)果表明建立的測定方法簡便，可用于該制劑的質(zhì)量控制，同時為該制劑申請新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文號提供了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)資料。

1 儀器與試藥

UV-2550PC型紫外分光光度儀（日本島津公司）；BS200S電子天平（德國Sartorius公司）。

甲硝唑（原料藥及對照品，武漢武藥制藥有限公司，批號：0611254，純度：≥98%）；己烯雌酚（原料藥及對照品，廣州市漢普醫(yī)藥有限公司，批號：20100301，純度：≥98%）；痤瘡洗劑（新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，批號：20100602、20100618、20100630，含甲硝唑（C6H9N3O3）為4.50%～5.50%、己烯雌酚（C18H20O2）為0.045%～0.055%，g·mL－1）；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吸收光譜的繪制

精密稱定干燥至恒重的甲硝唑500 mg、己烯雌酚50 mg，分別置于50 mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，即得濃度為10 mg·mL－1的甲硝唑醇溶液和1 mg·mL－1的己烯雌酚醇溶液。分別精密吸取甲硝唑醇溶液和己烯雌酚醇溶液各0.1 mL，分別置于100 mL容量瓶中，加水稀釋成含甲硝唑10 μg·mL－1的水溶液、己烯雌酚1 μg·mL－1的水溶液。以水為空白，在220～400 nm范圍內(nèi)自動掃描，得甲硝唑和己烯雌酚的吸收光譜；另取輔料制備成溶液后掃描。光譜詳見圖1。

圖1 紫外吸收光譜Fig 1 UV absorption spectra

由圖1可見，甲硝唑在319 nm波長處有最大吸收，而己烯雌酚此處無吸收，因此可在319 nm波長處直接測定甲硝唑的含量。己烯雌酚在239 nm波長處有最大吸收，而甲硝唑在此處也有吸收，此波長處2組分吸收光譜相互干擾。根據(jù)光譜行為，選取319 nm為甲硝唑的測定波長，選取239 nm為己烯雌酚的測定波長，并將319 nm定為轉(zhuǎn)換波長。輔料對二者無干擾。

2.2 系數(shù)倍率分光光度法的計算公式

式中，A為吸光度，c為濃度，K為倍率系數(shù)，E為百分吸收系數(shù)，“甲”表示甲硝唑，“己”表示己烯雌酚，“混”表示二者混合溶液（即樣品溶液）。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下甲硝唑水溶液和己烯雌酚水溶液分別于0、0.5、1、2、4、12 h考察其光譜行為和測定波長處的吸光度，結(jié)果表明，在12 h內(nèi)2組分吸收光譜及測定波長的吸光度未見顯著變化，RSD為0.28%，因此可選擇水作為測定溶劑。

2.4 K值的測定

稱取甲硝唑2.501 7 g至50 mL容量瓶中，用75%乙醇定容至刻度（置于水浴中加熱使其溶解），得濃度為5.003 4×104μg·mL－1溶液作為貯備液。從貯備液分別吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50 mL至100 mL容量瓶中，加水至刻度，得不同濃度溶液，每份溶液平行3份，以水為空白，在239、319 nm波長處測定吸光度。按A239nm/A319nm計算K值，結(jié)果為0.313 5，RSD為0.83%（n＝5）。

2.5 E值的測定

2.5.1E239nm己的測定。精密稱取己烯雌酚0.025 1 g至50 mL容量瓶中，以75%乙醇定容至刻度，得濃度為5.02×102μg·mL－1溶液作為貯備液，從中分別吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，以水定容至50 mL容量瓶中；另從貯備液中精密吸取0.3 mL，以水定容至100 mL（n＝3）。以水為空白，于239 nm波長處測定吸光度，結(jié)果E239nm己為566.7，RSD＝0.66%（n＝5）。

2.5.2E319nm甲的測定。取“2.4”項(xiàng)下不同濃度溶液，各精密吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。以水為空白在319 nm波長處測定吸光度，結(jié)果，E319nm甲為534.7，RSD＝0.58%（n＝5）。

2.6 線性范圍考察

2.6.1 己烯雌酚的線性范圍考察。精密吸取“2.5.1”項(xiàng)下各溶液，以水為空白，在239 nm波長處測定吸光度，以己烯雌酚檢測濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A239nm己＝0.052 9c己－0.031 1（r＝0.999 8），結(jié)果表明己烯雌酚檢測濃度的線性范圍為1～20 μg·mL－1。

2.6.2 甲硝唑的線性范圍考察。取“2.4”項(xiàng)下貯備液，從中分別吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度。從上述瓶中各吸取5.00 mL，置于不同的25 mL容量瓶中，加水至刻度。以水為空白，在239、319 nm波長處測定吸光度，以甲硝唑檢測濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A239nm甲＝0.018 3c甲－0.037 2（r＝0.998 8），A319nm甲＝0.053 8c甲－0.013 0（r＝0.999 9），結(jié)果表明甲硝唑檢測濃度的線性范圍為5～75 μg·mL－1。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取干燥至恒重的甲硝唑、己烯雌酚不同量，按處方比例制備，用水稀釋后以水為空白，在239、319 nm波長處分別測定吸光度，按公式：c己＝（A239nm混－10KA319nm甲）/E239nm己及式（4）計算濃度，回收率結(jié)果見表1。

由表1得出甲硝唑的平均回收率為98.8%，RSD＝0.40%；己烯雌酚的平均回收率為99.0%，RSD＝0.64%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 精密度試驗(yàn)

選取“2.6”項(xiàng)下甲硝唑及己烯雌酚的高、中、低濃度溶液，每個濃度做5份樣品，分別連續(xù)測定3次。結(jié)果RSD分別為0.55%、0.85%（n＝5），表明精密度符合要求。

2.9 樣品含量測定

取痤瘡洗劑3批，分別精密吸取0.1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度；取稀釋液5.00 mL，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，以水為空白，在319 nm波長處測定吸光度。另精密吸取0.1 mL，置于50 mL容量瓶，加水至刻度，以水為空白，于239 nm波長處測定吸光度。按標(biāo)示量計算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果Tab 2 Results of content determination of samples

3 討論

筆者在試驗(yàn)中觀察到甲硝唑在75%乙醇中溶解較慢，可用水浴加熱使溶解，放冷至室溫也不再析出，并在試驗(yàn)中得到證實(shí)。同時該制劑為混懸液，在制劑分裝過程中會出現(xiàn)裝量均勻性問題，需進(jìn)一步進(jìn)行處方優(yōu)化，因此本文為今后處方優(yōu)化的驗(yàn)證提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

由于處方中甲硝唑濃度為50 mg·mL－1，己烯雌酚濃度為0.5 mg·mL－1，甲硝唑濃度是己烯雌酚濃度的100倍；2組分濃度在差距過大的情況下，若稀釋相同倍數(shù)即可造成在239 nm波長處測定的A混（A混＝A239nm甲+A319nm己）超出測定范圍而無法測定，因此需選擇合適的稀釋倍數(shù)，且稀釋后濃度在線性范圍內(nèi)。經(jīng)過一系列濃度篩選，最終確定為甲硝唑稀釋5 000倍，己烯雌酚稀釋500倍。在K值使用時，代入方程（3）時的K值需要乘以擴(kuò)大倍數(shù)10。

系數(shù)倍率分光光度法原理簡單、計算簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，能不經(jīng)分離直接測定本品中的2種主要組分的含量，因而具有操作方便、快速的優(yōu)點(diǎn)，有利于控制本品的質(zhì)量，易于基層單位開展日常檢測工作。

[1] 王俠生，廖康煌，楊國亮.皮膚病學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2005：725.

[2] 郭麗紅.雄激素對痤瘡影響及治療的研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，11（1）：70.

[3] 蘭曉玲，林新瑜，付興瓊，等.痤瘡患者心理量化分析及護(hù)理[J].中國醫(yī)療前沿，2009，4（8）：100.