崔洪英， 柳文媛， 王 磊， 馮 鋒*

(1.中國藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室，江蘇 南京 210009;2.中國藥科大學(xué)藥物分析教研室，江蘇 南京 210009;3.藥物質(zhì)量與安全預(yù)警教育部重點實驗室，江蘇 南京 210009)

中藥藤黃系藤黃科植物藤黃(Garcinia hanburyi Hook.f.)所分泌的樹脂干燥物，市售藤黃呈圓柱狀或不規(guī)則塊狀，色黃，質(zhì)脆易碎。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，藤黃味苦澀、有毒，具有攻毒、蝕瘡和破血散節(jié)等功效，主治癰疽、腫毒、頑癬、惡瘡和跌打損傷等疾病［1］。藤黃中含有以藤黃酸(gambogic acid，1)為代表的籠狀噸酮類(caged xanthone)化合物，藥理研究表明，該類成分多具有廣譜強效的抗腫瘤活性［2］。因此，對藤黃中噸酮類化合物的分離和分析一直是藤黃研究的重點。近年來，研究人員從藤黃中分離得到數(shù)十種籠狀噸酮類成分，其中很多化合物還存在順反異構(gòu)體和旋光異構(gòu)體，因此亟待建立能全面反映藤黃化學(xué)成分，特別是噸酮類成分的分離分析方法，從而更好地對藤黃及相關(guān)產(chǎn)品進行質(zhì)量控制。同時，對各種異構(gòu)體單體的分離、鑒定及定量檢測對其抗腫瘤機制的深入研究也具有重要意義。本文對近年來從中藥藤黃中分離的噸酮類化合物進行了匯總，并介紹了相關(guān)分離分析方法，旨在為中藥藤黃的質(zhì)量控制和噸酮類化合物作用機制的深入研究提供參考。

1 藤黃中的呫噸酮類化合物

1.1 含A環(huán)的籠狀呫噸酮類化合物

1.2 無A環(huán)的籠狀呫噸酮類化合物

1.3 無籠狀橋環(huán)的呫噸酮類化合物

2 藤黃中呫噸酮類化合物的含量測定方法

2.1 高效液相色譜－蒸發(fā)光散射法

蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)為一種通用型檢測器，可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，樣品無需含有發(fā)色基團，該法現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類脂、脂肪酸、氨基酸及藥物等的檢測。楊虹等(中國藥科大學(xué)學(xué)報，1999年)建立了測定藤黃中藤黃酸和新藤黃酸含量的HPLC-蒸發(fā)光散射法，色譜條件為:以 Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)為固定相，甲醇－己腈－水－冰乙酸(體積比為6∶1∶2∶0.3)為流動相，流速為0.8 mL·min－1，等度洗脫，色譜柱柱溫為25℃，檢測器漂移管溫度為75℃，恒定氣體壓力為2.1 L·min－1。在此條件下，新藤黃酸和藤黃酸的保留時間分別為24.5和36.8 min，兩者分離度良好(R＞1.5)。該方法準(zhǔn)確度較高，對5種市售藤黃進行測定，藤黃酸含量為22.75%～34.58%，新藤黃酸含量為12.75% ～21.79%，回收率均在95%以上。

2.2 高效液相色譜－紫外分光光度法

長期以來，文獻報道的藤黃成分分析研究主要是針對其主成分藤黃酸和新藤黃酸進行的定性和定量分析［19-22］，而極少有對藤黃中多種籠狀噸酮類成分同時進行分析的報道，更無對其中順反異構(gòu)體進行分離和分析的方法。2006年，韓全斌等［23］首次建立了分析藤黃中籠狀噸酮類成分順反異構(gòu)體的HPLC-UV法，選用 Alltima C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為固定相，乙腈-0.1%三氟乙酸(體積比為9∶1)為流動相，流速1.0 mL·min－1，等度洗脫，檢測波長為360 nm，分析了來源于中國和印度的藤黃共7種。結(jié)果顯示，這7種藤黃的HPLC圖譜類似，且其共有的7種籠狀噸酮類化合物均為主成分，包括3對順反異構(gòu)體(藤黃酸和異藤黃酸、莫里林酸和異莫里林酸以及gambogenic acid和isogambogenic acid)與30-羥甲基藤黃酸。在上述色譜條件下，7種化合物色譜峰分離度良好(R＞1.5)，藥材中其他6個化合物與異藤黃酸相比，其色譜相對保留時間恒定(RSD均小于0.85%)，故該法可作為藤黃HPLC指紋圖譜的特征峰用于藥材的真?zhèn)舞b別。

2.3 高效液相色譜－質(zhì)譜法

HPLC-UV法和HPLC-蒸發(fā)光散射法主要用于定性和定量分析已獲得單體的籠狀噸酮類化合物。藤黃中籠狀噸酮類化合物分子間結(jié)構(gòu)相近，其主要區(qū)別在于取代基的種類和位置，異戊烯基雙鍵兩側(cè)取代基不同所形成的順反異構(gòu)，以及C2位手性碳原子形成的旋光異構(gòu)，故而分離和分析的難度較高。利用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)則無需分離出化合物單體，就能推測出藤黃中籠狀噸酮類化合物的結(jié)構(gòu)。由于噸酮類成分大多具有相同的噸酮母核，其質(zhì)譜裂解過程具有一定規(guī)律性［26］:籠狀噸酮在碰撞誘導(dǎo)解離(CID)過程中C9和C10位可發(fā)生逆Diels-Alder(RDA)裂解，橋環(huán)開裂失去質(zhì)荷比(m/z)為84或86的碎片，簡單噸酮類化合物無此裂解行為，據(jù)此可判斷待測化合物是否為籠狀噸酮;籠狀噸酮分子在裂解過程中會產(chǎn)生相繼丟失C4H8(m/z為56)或C9H16(m/z為124)的碎片離子，由此可判斷分子中異戊烯基的個數(shù)。此外，順反異構(gòu)體裂解方式不同，藤黃酸和異藤黃酸具有相同的分子離子峰(m/z為629.3114)和一級MS圖譜，但二級MS裂解過程有差異:異藤黃酸C13位異戊烯基側(cè)鏈裂解時，C27位氫原子可遷移至C12位羰基上發(fā)生McLafferty重排，丟失C13位異戊烯基側(cè)鏈后產(chǎn)生m/z為447.2166的碎片;藤黃酸分子中C27和C28位間雙鍵為Z式構(gòu)型，使得C27位氫原子不能遷移至C12位羰基上，故而無McLafferty重排。因此，通過觀察有無m/z為447.2166的離子峰可判斷化合物的順反異構(gòu)。

3 結(jié)語

文獻報道的藤黃中大多數(shù)成分的色譜圖均相似［23，25，27，29］，但對于藤黃中另一主成分(見圖 1，其色譜峰編號為5)的鑒定，目前尚存在一定爭議。韓全斌等［23］認(rèn)為該化合物為 gambogenic acid(42)，但周安等［27］認(rèn)為是新藤黃酸(26)。筆者按照呂歸寶等(藥學(xué)學(xué)報，1984年)報道的方法制備了該化合物，然后通過色譜峰比對及NMR數(shù)據(jù)測定，發(fā)現(xiàn)該化合物的NMR數(shù)據(jù)與gambogenic acid的NMR數(shù)據(jù)［2］基本一致，由此認(rèn)為部分文獻中所述的新藤黃酸應(yīng)更正為gambogenic acid。

圖1 藤黃中化學(xué)成分的HPLC圖譜Figure 1 HPLC chromatogram for the compounds in gamboge

目前臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物多為化學(xué)合成產(chǎn)物，普遍存在毒副作用較大、易產(chǎn)生耐藥性等缺點。因此，尋找高效低毒的新型化合物一直是抗腫瘤藥物的研究熱點。中藥藤黃可通過多種機制達(dá)到抗腫瘤效果，是一種多靶點的抗腫瘤天然藥物。值得注意的是，中藥藤黃與一般化療藥物的明顯區(qū)別在于其能選擇性殺死腫瘤細(xì)胞，而對正常造血系統(tǒng)無影響(陳葆仁，江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1980年)，故而具有較高安全性;其主要成分藤黃酸極具開發(fā)前景，目前該化合物的Ⅱ期臨床研究已在進行中。近來國內(nèi)外有關(guān)藤黃中噸酮類化合物的分離、分析及其活性研究的報道越來越多，筆者所在課題組也正在從事對藤黃中噸酮類化合物進行分離和分析的研究工作，現(xiàn)已分離得到10余種籠狀噸酮類成分，并計劃對其中多對異構(gòu)體進行抗腫瘤活性初篩，以考察這些異構(gòu)體尤其是C2位旋光異構(gòu)體間的活性差異，為噸酮類化合物的進一步研究及藤黃中其他有效成分的探索提供參考。

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