任永福,劉紅斌

(1.云南省藥物研究所制藥廠,云南 昆明 650111;2.云南省藥物研究所,云南 昆明 650111)

玉葡萄根[1]為云南地區(qū)民間使用的草藥,具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、消腫鎮(zhèn)痛之功效,用于跌打損傷等的治療,是“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等系列藥品使用的藥材之一。曾收載于《中國藥典》(1977年版)、《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》(1996年版)。目前標(biāo)準(zhǔn)中僅有鞣質(zhì)的定性鑒別,對其含量測定未見報道,本文參照中國藥典[2],采用紫外分光光度法[3]對玉葡萄根鞣質(zhì)的含量測定進行方法學(xué)研究,以期能對該藥材的質(zhì)量控制提供技術(shù)參考。

1 實驗材料與儀器

1.1 試劑試藥 玉葡萄根采自安寧市、楚雄市和大姚縣。沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110831-200302);磷鉬鎢酸試液(按《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄ⅩⅤB配制);干酪素(化學(xué)純);水為重蒸水;提取用的乙醇為化學(xué)純,其他試劑試藥為分析純。

1.2 儀器 UV2501分光光度計(日本 Shimadzu);天平(Metler Toledo)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鞣質(zhì)的測定方法

2.1.1 總酚 精密量取供試品溶液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下方法,自“加入磷鉬鎢酸試液1 mL”起,加重蒸水10 mL,依法測定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg),計算,即得。

2.1.2 不被吸附的多酚 精密量取供試品溶液25 mL,加至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞錐形瓶中,密塞,置30℃水浴中保溫1 h,時時振搖,取出,放冷,搖勻,濾過。棄取初濾液,精密量取續(xù)濾液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法,自“加入磷鉬鎢酸試液1 mL”起,加水10 mL,依法測定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg),計算,即得。

糅質(zhì)的含量計算式:糅質(zhì)含量=總酚-不被吸附的多酚

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取沒食子酸對照品適量,加水溶解后制成含沒食子酸50.40μg/mL的溶液。

2.3 樣品溶液的配制 取安寧藥材粉末適量(按品種項下的規(guī)定),精密稱定,置 250 mL棕色量瓶中,加 45%乙醇150 mL,放置過夜,超聲處理10 min,放冷,用重蒸水稀釋至刻度,搖勻,靜置(使固體物沉淀),濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液20 mL,置100 mL棕色量瓶中,用重蒸水稀釋至刻度,搖勻,即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分別置 25 mL 棕色量瓶中,各加水 11.5、11、10、9、8、7mL,用 29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,放置30 min以相應(yīng)的試劑(重蒸水+29%碳酸的溶液)為空白,在760 nm的波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程為:Y=0.1292X+0.0008(r=0.9997),Y-對照品吸收度,X-對照品濃度,以上結(jié)果表明該方法在1.01μg/mL～10.08μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取上述對照品儲備液2.0 mL,按上法操作,顯色后連續(xù)測定6次,測定結(jié)果的 RSD=0.43%,表明本法精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗 取同批樣品,按鞣質(zhì)測定方法分別進行供試品溶液的制備并測定,重復(fù) 6次。測定結(jié)果的 RSD=1.18%,表明本法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取樣品溶液在30 min反應(yīng)穩(wěn)定后的0、10、20、30、60 min時間點進行考察,測定結(jié)果的 RSD為0.91%,結(jié)果顯示樣品溶液在30 min反應(yīng)穩(wěn)定后的1 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 取玉葡萄根9份樣品精密稱定,分置已編號為1～9的250 mL棕色容量瓶中,在1、2、3號棕色容量瓶中分別加入濃度為3.45 mg/mL的沒食子酸對照品溶液各8 mL,在4、5、6號棕色容量瓶中分別加入濃度為3.45 mg/mL的沒食子酸對照品溶液各10 mL,在7、8、9號棕色容量瓶中分別加入濃度為3.45 mg/mL的沒食子酸對照品溶液各12 mL,然后按確定好的樣品處理方法同法處理,將處理好的樣品溶液按含量測定方法同法測定,計算回收率,結(jié)果平均回收率為97.76%,RSD為2.09%,表明本法回收率良好。

2.9 3個產(chǎn)地玉葡萄根藥材鞣質(zhì)含量測定 按含量測定方法測定3個產(chǎn)地樣品的鞣質(zhì)含量,含量按干燥品計,測定結(jié)果見表1。

表1 3個產(chǎn)地樣品鞣質(zhì)測定結(jié)果

3 小結(jié)

考慮到玉葡萄根中的鞣質(zhì)成分與結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和儀器使用的可行性,因此用紫外可見分光光度法測玉葡萄根中的鞣質(zhì)含量。在測定波長為 760 nm,對照品濃度為 1.01～10.08μg/mL的范圍內(nèi),濃度與吸光度線性關(guān)系良好,r=0.9997;平均加樣回收率為97.76%,RSD=2.09%。此方法測定玉葡萄根中的鞣質(zhì)含量方法簡便易行,結(jié)果相對準(zhǔn)確可靠,重現(xiàn)性好。故此研究結(jié)果可為研究玉葡萄根藥材的質(zhì)量控制方法提供技術(shù)參考。

藥典要求的碳酸鈉濃度為29%,有文獻報道可以選用20%碳酸鈉。試驗比較了35%、29%、20%3種濃度下同一對照品溶液同一操作條件下的的吸收度,發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用20%碳酸鈉來測定時,吸收值偏低。35%碳酸鈉下的吸收和29%碳酸鈉下的吸收接近,故仍采用藥典規(guī)定濃度的碳酸鈉。值得注意的是,在配制碳酸鈉溶液時,選用的是含有結(jié)晶水的碳酸鈉,如果要用無水碳酸鈉,需要進行換算。否則在測定時會造成溶液極易析出晶體的情況。

試驗比較了 10、20、30、40和 50 min時間段,同一對照品溶液同一操作條件下的吸收度。結(jié)果顯示30 min后反應(yīng)趨于穩(wěn)定,故顯色時間確定為30 min。

[1]云南省藥材公司.云南中藥資源名錄[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1993:311.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄XB,62.

[3]沙美.紫外分光光度法測定次水楊酸鉍中水楊酸的含量[J].中國藥師,2010,13(5):751～752.