王建偉，王萬林，陶 鋒，葉永梅

湖北省棗陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北棗陽 441200

結(jié)腸癌是發(fā)生于結(jié)腸部位的常見的消化道惡性腫瘤，在消化道腫瘤中排第三位。隨著飲食習(xí)慣的改變，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢。目前已成為嚴(yán)重威脅人們健康和生命安全的疾病之一。臨床上常采取手術(shù)治療聯(lián)合化療等方法治療結(jié)腸癌并取得了一定的療效[1]。

大量研究表明，在惡性腫瘤患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)的功能存在不同程度的改變，機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的異常與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[2]。臨床化療除了可有效減少患者的腫瘤負(fù)荷、殺傷腫瘤細(xì)胞外，也可對患者的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一定的作用。淋巴細(xì)胞亞群是反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一，檢測結(jié)腸癌患者化療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化并分析其規(guī)律對了解患者免疫功能狀態(tài)、指導(dǎo)臨床治療有重要的意義[3]。因此，筆者選取我院2007年10月～2010年10月收治的結(jié)腸結(jié)癌術(shù)后化療的85例患者，檢測其化療前后淋巴細(xì)胞亞群的變化并進(jìn)行分析，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2007年10月～2010年10月收治的結(jié)腸癌術(shù)后行化療的患者85例（結(jié)腸癌組）。其中，男49例，女36例；年齡32～69歲，平均（52.7±3.4）歲；所有患者均經(jīng)手術(shù)后病理證實(shí)為結(jié)腸癌；按Duke分期：Duke A期4例，Duke B期15例，Duke C期43例，Duke D期23例；按照組織分化程度分為高分化11例，中分化28例，低分化40例，未分化6例。選取同期我院體檢的無消化道疾病和其他腫瘤的健康者50例作為正常對照（正常對照組），其中，男28例，女22例，年齡31～68歲，平均（51.9±3.6）歲。所有實(shí)驗(yàn)者均無免疫性疾病，兩組患者在性別、年齡等一般情況方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

表1 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群的比較（）

表1 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群的比較（）

注：與正常對照組比較，*P<0.05

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表2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系（）

表2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系（）

注：按臨床各分期，各組織類型分別進(jìn)行單指標(biāo)比較，*P<0.05

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表3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化比較（）

表3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化比較（）

注：與無效組比較，*P<0.05

分組 例數(shù) CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+ CD4+CD25+（%）有效組無效組562960.18±10.71*54.13±7.5437.52±6.19*32.25±5.8329.85±5.0630.19±4.321.22±0.31*1.06±0.184.83±1.15*8.91±2.24

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 PE標(biāo)記或 FITC標(biāo)記的鼠抗人 CD3、CD4、CD8、CD25熒光抗體及同型對照抗體均購自美國BD公司；紅細(xì)胞裂解液、淋巴細(xì)胞分離液、磷酸鹽緩沖液（PBS）、1%多聚甲醛等均購自晶美生物試劑有限公司。

1.2.2 儀器 低速離心機(jī)、37℃恒溫水浴箱、微量加樣器以及流式細(xì)胞儀等。

1.3 方法

所有結(jié)腸癌患者術(shù)后均根據(jù)病情需要采用不同的化療方案，化療6個(gè)周期以上。在化療前及化療6個(gè)周期后分別進(jìn)行檢測。

檢測方法：所有試驗(yàn)者采取清晨空腹外周靜脈血約3 ml，給予肝素抗凝。使用淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞后送上級醫(yī)院進(jìn)行流式細(xì)胞檢測。檢測 CD3+、CD4+、CD8+和 CD25+等指標(biāo)，分析各淋巴細(xì)胞亞群比例情況。所有操作嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書進(jìn)行。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

化療6個(gè)周期后，監(jiān)測患者早期復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況。治療有效為無局部復(fù)發(fā)、CEA持續(xù)陰性、內(nèi)窺鏡檢查未見病灶、CT或MR檢查未發(fā)現(xiàn)占位病變、臨床癥狀與體征無陽性表現(xiàn)、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。其他為無效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)，以 P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群的比較

在結(jié)腸癌患者外周血中，CD3+和CD4+細(xì)胞的比例分別為（55.36±11.19）%和（32.03±8.57）%，均較正常對照組顯著下降，CD4+/CD8+的比值（1.05±0.28）也顯著降低，而 CD4+CD25+細(xì)胞的比例（9.87±4.21）%較對照組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。這些結(jié)果說明在結(jié)腸癌患者中淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生改變，患者免疫調(diào)節(jié)功能異常，機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)。

2.2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系

通過比較不同臨床分期與不同組織類型結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的比例，筆者發(fā)現(xiàn)，患者臨床分期越晚、組織分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+細(xì)胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+細(xì)胞的比例越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。這一結(jié)果說明結(jié)腸癌患者外周血各淋巴細(xì)胞亞群的比例與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)。腫瘤惡性程度越高，患者免疫抑制狀態(tài)越強(qiáng)。

2.3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化

結(jié)腸癌患者治療后有效56例，無效29例。通過比較有效與無效組患者外周血淋巴細(xì)胞亞群，筆者發(fā)現(xiàn)，在有效組患者中外周血CD3+和CD4+細(xì)胞的比例、CD4+/CD8+的比值均顯著高于無效組，而CD4+CD25+細(xì)胞的比例顯著低于無效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見表3。說明治療有效的患者機(jī)體的免疫抑制狀態(tài)得到顯著改善。

3 討論

隨著腫瘤免疫學(xué)研究的不斷深入，人們的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能在腫瘤微環(huán)境的作用下產(chǎn)生了一定的改變，腫瘤細(xì)胞可通過釋放大量免疫抑制因子進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體免疫細(xì)胞的數(shù)量和比例發(fā)生異常，最終導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能的抑制[4]。由于機(jī)體免疫功能受到抑制，機(jī)體無法識別并清除腫瘤細(xì)胞，從而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[5]。

大量研究表明，T淋巴細(xì)胞亞群在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮了重要作用。CD4+和CD8+T細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)過程中極為重要，其比例和比值的多少反應(yīng)了機(jī)體免疫功能的免疫狀態(tài)與水平。CD4+/CD8+的比值越低，則機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)能力越低。CD4+CD25+T細(xì)胞可通過分泌多種抑制性的細(xì)胞因子在機(jī)體免疫過程中起到抑制免疫的作用。這些淋巴細(xì)胞亞群維持一定的比例和功能是維持機(jī)體正常免疫調(diào)節(jié)能力的基礎(chǔ)，它們共同參與了機(jī)體免疫應(yīng)答的過程[6]。

已有報(bào)道顯示，在腫瘤患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生了改變，進(jìn)而產(chǎn)生免疫抑制狀態(tài)，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。筆者在本實(shí)驗(yàn)中通過檢測結(jié)腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌患者體內(nèi)，CD3+與CD4+細(xì)胞的比例較正常對照組均顯著下降，而CD4+/CD8+的比值也較對照組顯著降低，CD4+CD25+細(xì)胞的比例較對照組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這些結(jié)果說明，在結(jié)腸癌患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生了改變，其比例失衡，機(jī)體免疫功能受到抑制，進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤的發(fā)展。

進(jìn)一步筆者分析了結(jié)腸癌患者淋巴細(xì)胞亞群與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，患者臨床分期越晚、組織分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+細(xì)胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+細(xì)胞的比例越高。這一結(jié)果說明，腫瘤惡性程度越高，患者免疫抑制狀態(tài)越強(qiáng)。通過比較治療有效與無效的結(jié)腸癌患者淋巴細(xì)胞亞群的變化發(fā)現(xiàn)，在治療有效的患者中外周血CD3+和CD4+細(xì)胞的比例、CD4+/CD8+的比值均顯著高于無效組，而CD4+CD25+細(xì)胞的比例顯著低于無效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明治療有效的患者可能由于機(jī)體的免疫抑制得到改善進(jìn)而提高了療效。

總之，檢測結(jié)腸癌患者淋巴細(xì)胞亞群有助于了解機(jī)體的免疫功能，通過比較治療前后患者淋巴細(xì)胞亞群的變化，可對患者的治療效果進(jìn)行判斷，對臨床治療有一定的指導(dǎo)意義。

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