王建偉，王萬林，陶 鋒，葉永梅

湖北省棗陽市第一人民醫(yī)院檢驗科，湖北棗陽 441200

結(jié)腸癌是發(fā)生于結(jié)腸部位的常見的消化道惡性腫瘤，在消化道腫瘤中排第三位。隨著飲食習慣的改變，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢。目前已成為嚴重威脅人們健康和生命安全的疾病之一。臨床上常采取手術(shù)治療聯(lián)合化療等方法治療結(jié)腸癌并取得了一定的療效[1]。

大量研究表明，在惡性腫瘤患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)的功能存在不同程度的改變，機體免疫調(diào)節(jié)的異常與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[2]。臨床化療除了可有效減少患者的腫瘤負荷、殺傷腫瘤細胞外，也可對患者的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一定的作用。淋巴細胞亞群是反映機體免疫功能狀態(tài)的重要指標之一，檢測結(jié)腸癌患者化療前后外周血淋巴細胞亞群的變化并分析其規(guī)律對了解患者免疫功能狀態(tài)、指導(dǎo)臨床治療有重要的意義[3]。因此，筆者選取我院2007年10月～2010年10月收治的結(jié)腸結(jié)癌術(shù)后化療的85例患者，檢測其化療前后淋巴細胞亞群的變化并進行分析，現(xiàn)總結(jié)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2007年10月～2010年10月收治的結(jié)腸癌術(shù)后行化療的患者85例（結(jié)腸癌組）。其中，男49例，女36例；年齡32～69歲，平均（52.7±3.4）歲；所有患者均經(jīng)手術(shù)后病理證實為結(jié)腸癌；按Duke分期：Duke A期4例，Duke B期15例，Duke C期43例，Duke D期23例；按照組織分化程度分為高分化11例，中分化28例，低分化40例，未分化6例。選取同期我院體檢的無消化道疾病和其他腫瘤的健康者50例作為正常對照（正常對照組），其中，男28例，女22例，年齡31～68歲，平均（51.9±3.6）歲。所有實驗者均無免疫性疾病，兩組患者在性別、年齡等一般情況方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

表1 兩組外周血淋巴細胞亞群的比較（）

表1 兩組外周血淋巴細胞亞群的比較（）

注：與正常對照組比較，*P<0.05

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表2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系（）

表2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系（）

注：按臨床各分期，各組織類型分別進行單指標比較，*P<0.05

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表3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群的變化比較（）

表3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群的變化比較（）

注：與無效組比較，*P<0.05

分組 例數(shù) CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+ CD4+CD25+（%）有效組無效組562960.18±10.71*54.13±7.5437.52±6.19*32.25±5.8329.85±5.0630.19±4.321.22±0.31*1.06±0.184.83±1.15*8.91±2.24

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 PE標記或 FITC標記的鼠抗人 CD3、CD4、CD8、CD25熒光抗體及同型對照抗體均購自美國BD公司；紅細胞裂解液、淋巴細胞分離液、磷酸鹽緩沖液（PBS）、1%多聚甲醛等均購自晶美生物試劑有限公司。

1.2.2 儀器 低速離心機、37℃恒溫水浴箱、微量加樣器以及流式細胞儀等。

1.3 方法

所有結(jié)腸癌患者術(shù)后均根據(jù)病情需要采用不同的化療方案，化療6個周期以上。在化療前及化療6個周期后分別進行檢測。

檢測方法：所有試驗者采取清晨空腹外周靜脈血約3 ml，給予肝素抗凝。使用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞后送上級醫(yī)院進行流式細胞檢測。檢測 CD3+、CD4+、CD8+和 CD25+等指標，分析各淋巴細胞亞群比例情況。所有操作嚴格按照試劑及儀器說明書進行。

1.4 療效判定標準

化療6個周期后，監(jiān)測患者早期復(fù)發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的情況。治療有效為無局部復(fù)發(fā)、CEA持續(xù)陰性、內(nèi)窺鏡檢查未見病灶、CT或MR檢查未發(fā)現(xiàn)占位病變、臨床癥狀與體征無陽性表現(xiàn)、無遠處轉(zhuǎn)移。其他為無效。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，采用t檢驗，以 P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血淋巴細胞亞群的比較

在結(jié)腸癌患者外周血中，CD3+和CD4+細胞的比例分別為（55.36±11.19）%和（32.03±8.57）%，均較正常對照組顯著下降，CD4+/CD8+的比值（1.05±0.28）也顯著降低，而 CD4+CD25+細胞的比例（9.87±4.21）%較對照組顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。這些結(jié)果說明在結(jié)腸癌患者中淋巴細胞亞群發(fā)生改變，患者免疫調(diào)節(jié)功能異常，機體處于免疫抑制狀態(tài)。

2.2 結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群與臨床病理特征的關(guān)系

通過比較不同臨床分期與不同組織類型結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群的比例，筆者發(fā)現(xiàn)，患者臨床分期越晚、組織分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+細胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+細胞的比例越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。這一結(jié)果說明結(jié)腸癌患者外周血各淋巴細胞亞群的比例與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)。腫瘤惡性程度越高，患者免疫抑制狀態(tài)越強。

2.3 化療后結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群的變化

結(jié)腸癌患者治療后有效56例，無效29例。通過比較有效與無效組患者外周血淋巴細胞亞群，筆者發(fā)現(xiàn)，在有效組患者中外周血CD3+和CD4+細胞的比例、CD4+/CD8+的比值均顯著高于無效組，而CD4+CD25+細胞的比例顯著低于無效組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），見表3。說明治療有效的患者機體的免疫抑制狀態(tài)得到顯著改善。

3 討論

隨著腫瘤免疫學(xué)研究的不斷深入，人們的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者機體的免疫系統(tǒng)功能在腫瘤微環(huán)境的作用下產(chǎn)生了一定的改變，腫瘤細胞可通過釋放大量免疫抑制因子進而導(dǎo)致機體免疫細胞的數(shù)量和比例發(fā)生異常，最終導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能的抑制[4]。由于機體免疫功能受到抑制，機體無法識別并清除腫瘤細胞，從而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[5]。

大量研究表明，T淋巴細胞亞群在機體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮了重要作用。CD4+和CD8+T細胞在免疫調(diào)節(jié)過程中極為重要，其比例和比值的多少反應(yīng)了機體免疫功能的免疫狀態(tài)與水平。CD4+/CD8+的比值越低，則機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)能力越低。CD4+CD25+T細胞可通過分泌多種抑制性的細胞因子在機體免疫過程中起到抑制免疫的作用。這些淋巴細胞亞群維持一定的比例和功能是維持機體正常免疫調(diào)節(jié)能力的基礎(chǔ)，它們共同參與了機體免疫應(yīng)答的過程[6]。

已有報道顯示，在腫瘤患者體內(nèi)淋巴細胞亞群發(fā)生了改變，進而產(chǎn)生免疫抑制狀態(tài)，促進了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。筆者在本實驗中通過檢測結(jié)腸癌患者外周血淋巴細胞亞群發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌患者體內(nèi)，CD3+與CD4+細胞的比例較正常對照組均顯著下降，而CD4+/CD8+的比值也較對照組顯著降低，CD4+CD25+細胞的比例較對照組顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這些結(jié)果說明，在結(jié)腸癌患者體內(nèi)淋巴細胞亞群發(fā)生了改變，其比例失衡，機體免疫功能受到抑制，進而促進了腫瘤的發(fā)展。

進一步筆者分析了結(jié)腸癌患者淋巴細胞亞群與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，患者臨床分期越晚、組織分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+細胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+細胞的比例越高。這一結(jié)果說明，腫瘤惡性程度越高，患者免疫抑制狀態(tài)越強。通過比較治療有效與無效的結(jié)腸癌患者淋巴細胞亞群的變化發(fā)現(xiàn)，在治療有效的患者中外周血CD3+和CD4+細胞的比例、CD4+/CD8+的比值均顯著高于無效組，而CD4+CD25+細胞的比例顯著低于無效組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明治療有效的患者可能由于機體的免疫抑制得到改善進而提高了療效。

總之，檢測結(jié)腸癌患者淋巴細胞亞群有助于了解機體的免疫功能，通過比較治療前后患者淋巴細胞亞群的變化，可對患者的治療效果進行判斷，對臨床治療有一定的指導(dǎo)意義。

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