周國忠 劉淑梅 邵曉麗 黃 蓉

肺炎是指不同病原體或其他因素等所引起的包括終末支氣管、肺泡腔及肺間質在內的肺實質炎癥。是兒童時期重要的常見病，是我國住院小兒死亡的第1位原因，嚴重威脅小兒健康，被衛(wèi)生部列為小兒四病防治之一［1］。常見的病原體有:細菌、病毒、真菌、原蟲、支原體和衣原體等。以發(fā)熱、咳嗽、氣促、呼吸困難和肺部固定性中細濕啰音為主要臨床表現。小兒肺炎病情的嚴重程度與CD14+/HLA－DR+相關的文章報道較少。本研究檢測了94例小兒肺炎患者外周血單核細胞膜表面HLA－DR的表達，并探討其在治療前后的變化。

資料與方法

1.一般資料:選擇2009年1月～2010年4月來筆者醫(yī)院小兒科就診的肺炎患者，根據診斷標準確診的94例［2］。按其嚴重程度分為重癥(24例)，中癥(36例)，輕癥(34例)。其中男性61例，女性33例，年齡1個月～14歲，平均年齡4.06歲。

2.標本采集:受試者分別于治療前即未經任何治療時及治療后7～10天采集外周血標本2ml(EDTA －K2抗凝)。

3.方法:(1)細胞表形標記:100μl抗凝全血加10μl CD14－FITC和10μl HLA－DR－PE，檢測單核細胞膜表面HLADR的表達;100μl抗凝全血加 10μl CD4－FITC/CD8－PE/CD3－PC5，檢測CD3+CD4+、CD3+CD8+的T細胞;100μl EDTA抗凝全血加10μl CD(16+56)－FITC/CD19 －PE/CD3－PC5，檢測NK細胞和B細胞。并做同型陰性對照。室溫孵育15min，上Q－PREP制備標本，待測。(2)流式細胞儀分析:首先用Flow－check進行光路－流路校準，所有熒光信號以亮異系數均＜2%，以“門技術”確定淋巴細胞群，再行陰性對照及顏色補償，每個樣本檢測5000個細胞。全部數據由流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司提供，型號為EPICS@XL)及軟件SYSTEM TMⅡEOFT－WAREV3.0獲得和分析。(3)單克隆抗體和試劑:本文所用單抗(包括CD14－FITC、HLADR－PE、IgG1－FITC/IgG1－PE、CD4－FITC/CD8－PE/CD3－PC5、CD16+56－FITC/CD19 －PE/CD3－PC5、IgG1－FITC/IgG1－PE/IgG1－PC5)均為法國Immunotech公司產品，全血溶血試劑購自美國Coulter公司。

4.統(tǒng)計學方法:采用SPSS 11.5軟件包對所得數據進行統(tǒng)計、分析處理。

結 果

1.小兒肺炎患者治療前與治療后外周血細胞膜表面抗原表達見表1，由表1可見，CD14+細胞百分率降低，有顯著性差異(P＜0.05)，CD14+HLADR+細胞百分率降低，有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 小兒肺炎患者治療前、后外周血細胞膜表面抗原表達(，%)

表1 小兒肺炎患者治療前、后外周血細胞膜表面抗原表達(，%)

與治療前比較，★P ＜0.05

2.肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細胞膜表面CD14和HLA－DR表達見表2。由表2可見，CD14+和CD14+/HLA－DR+細胞百分率都降低，有顯著性差異，P＜0.05;重癥組與中癥組相比，CD14+細胞百分率無顯著性差異，P＞0.05;CD14+/HLA－DR+細胞百分率降低有顯著性差異，P ＜0.05。

表2 肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細胞膜表面CD14和HLA－DR的表達(，%)

表2 肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細胞膜表面CD14和HLA－DR的表達(，%)

與輕癥組比較，★P ＜0.05;與中癥組比較，▲P ＜0.05

3.腫炎患者治療前、后外周血淋巴細胞亞群結果見表3。由表3可見，治療后與治療前相比，CD3+CD4+細胞百分率增高有顯著性差異，P＜0.05;CD3+CD8+細胞百分率降低有顯著性差異，P＜0.05;CD16+CD56+和CD19+細胞百分率無顯著性差異，P＞0.05。

表3 肺炎患者治療前、后外周血淋巴細胞亞群(，%)

表3 肺炎患者治療前、后外周血淋巴細胞亞群(，%)

與治療前比較，★P ＜0.05

討 論

小兒由于其氣管、支氣管管腔相對狹窄，黏液分泌少，纖毛運動差，肺彈力組織發(fā)育不全等呼吸系統(tǒng)解剖生理上的特點使小兒易受病原微生物的感染。而嬰幼兒階段本身免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，特異性免疫功能較差，也是其中的一個重要原因［3］。單核－吞噬細胞系統(tǒng)是溝通天然免疫和特異性免疫系統(tǒng)的橋梁。CD14是單核細胞的膜表面分型標志，也是發(fā)揮抗感染作用的主要成分之一。CD14是革蘭陰性菌內毒素脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)高親和受體，在單核－吞噬細胞特異性免疫中起到了關鍵的信號傳導作用。LPS等細菌產物通過CD14的介導激活M－φ釋放細胞因子，即使完整的G－菌也能通過CD14的途徑激活M－φ發(fā)揮抗感染的作用［4］。單核細胞發(fā)揮抗感染作用的另一主要成分是HLA－DR，是參與外來抗原加工、處理和遞呈的關鍵分子。在某些免疫性疾病、傳染性疾病或內分泌疾病均可發(fā)現患者抗原遞呈細胞表面HLA－Ⅱ類抗原表達的改變，從而通過影響抗原遞呈功能參與疾病的發(fā)生與發(fā)展［5］。而單核細胞的HLA－DR陽性表達是MHC－Ⅱ活性表達中最強烈的，因此臨床上可以通過檢測HLADR表達來判定單核細胞功能反應，繼而判斷機體的免疫狀態(tài)［6］。

CD14+細胞比率代表了外周血中單核－吞噬細胞的百分比，而CD14+/HLA－DR+細胞百分率則表示活化的單核－吞噬細胞的含量。本研究顯示，小兒肺炎患者的外周血CD14+細胞顯著降低，治療緩解后會上升。林洪遠等［7］認為CD14表達的降低是免疫抑制的表現。實驗中CD14+/HLA－DR+細胞也呈顯著性降低，說明單核－吞噬細胞的抗原遞呈功能受到抑制，故此可以得出小兒肺炎患者的免疫系統(tǒng)受到抑制。與輕癥組相比，重癥組、中癥組的CD14+和CD14+/HLA－DR+細胞含量都降低(P ＜0.05)，說明重癥組、中癥組免疫抑制程度更嚴重;重癥組與中癥組相比，CD14+/HLA－DR+細胞百分率降低有顯著性差異，而CD14+細胞無顯著性差異，外周血中的單核－吞噬細胞的含量沒有顯著差異，而活化的單核－吞噬細胞卻有顯著差異，可以在一定程度上說明外周血單核細胞數量在小兒患該病時會減少，但減少到一定值后就趨于穩(wěn)定。

從表1和表2可以看出，小兒肺炎患者的外周血CD14/HLA－DR的表達從一開始就下降，說明該病患兒免疫系統(tǒng)在早期就受到一定程度的抑制，這也許與小兒免疫功能不完善有關。隨著病情的加重，單核－吞噬細胞的活性受到抑制的程度也加重，提示CD14+/HLA－DR+的百分比可以用來反映小兒肺炎的嚴重程度，可以作為本病嚴重程度的輔助診斷。文強等［4］發(fā)現肝移植的患者 CD14+/HLA－DR+的變化，對判斷機體免疫功能十分重要。Lekkou等［8］研究認為CD14+單核細胞HLA－DR表達不僅是入院時早期預后指標，也是動態(tài)評價指標。實驗提示，CD14+/HLA－DR+的百分比對小兒肺炎的預后診斷也具有較大價值。

單核細胞表面的HLA－DR分子與外來抗原形成的復合物，由CD4+T輔助細胞識別并啟動免疫應答和增殖。其中CD4+Th1細胞的主要效應功能是增強吞噬細胞介導的抗感染免疫。實驗中，CD14+/HLA－DR+的表達下降表明單核－吞噬細胞的抗原遞呈能力下降，可能導致治療前CD 4+T輔助細胞減少。而CD4+T輔助細胞的減少，又反過來影響單核細胞 CD14+/HLA－DR+的表達。治療后 CD14+/HLA－DR+的表達上升，CD4+T輔助細胞也增多，可進一步說明它們間的相關性。在治療前CD8+T細胞數量明顯高于治療后，可能因為細胞毒T細胞的增殖活化，抑制了機體的免疫功能，導致CD14+/HLADR+表達、CD4+T細胞顯著減少。

綜上所述，小兒肺炎患者的免疫系統(tǒng)在早期就受到抑制，抑制程度與病情的嚴重程度呈一定的正相關性，且CD14+/HLA－DR+的表達可以用來反映小兒肺炎的嚴重程度，可作為本病嚴重程度的輔助診斷。

1 朱景明.小兒反復肺炎的臨床分析［J］.中國實用醫(yī)藥，2009，4(3):116－117

2 王慕逖.兒科學［M］.5版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:311－316

3 吳曉林，黃成姣，周小勤，等.80例小兒難治性肺炎臨床病因分析［J］.武漢大學學報(醫(yī)學版)，2010，31(1):125 －128

4 文強，蘇磊，劉志鋒，等.肝移植術后CD14+單核細胞人白細胞DR抗原表達率的變化及其意義［J］.實用醫(yī)學雜志，2009，25(14):2251－2253

5 周靜，周蘇明，程蘊琳.白細胞抗原－DR的表達和年齡及感染的關系［J］.中華老年醫(yī)學雜志，2005，24(8):634 －636

6 王曉東，李維勤，虞文魁，等.創(chuàng)傷患者單核細胞表面人白細胞抗原－DR表達變化及其臨床意義［J］.中華創(chuàng)傷雜志，2006，22(8):570－573

7 林洪遠，郭旭生，姚詠明，等.CD14(+)單核細胞人類白細胞抗原－DR預測膿毒癥預后及指導免疫調理治療的初步臨床研究［J］.中國危重病急救醫(yī)學，2003，15(3):135－138

8 Lekkou A，Karakantza M，Mouzaki A，et al.Cytokine Production and monocyte HLA－DR expression as predictors of outcome for patients with community－acquired severe infections［J］.Clin Diagn Lab Imumunol，2004，11(1):161 －167