王 強， 施洪飛， 趙光輝， 聞劍飛

(1.合肥師范學院體育科學系，安徽合肥230601;2.揚州大學體育學院，江蘇 揚州225009;3.陜西職業(yè)技術學院，陜西西安710100)

現(xiàn)代中醫(yī)理論研究認為［1］，缺血性心臟病是本虛標實、虛實夾雜之患，以氣虛為主，同時以血瘀為著，氣虛血瘀是其主要病機，因此益氣活血成為其主要的治療方法。據此本實驗選用益氣藥-黃芪總皂苷和活血藥-紅花黃色素組方配伍，采用結扎冠狀動脈前降支，制備犬急性心肌缺血模型［2］。從整體水平觀察紅芪復方對心肌缺血犬心肌梗死的影響，探討兩者配伍對心肌缺血的保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 黃芪總皂苷，從豆科植物膜莢黃芪Astragalosides membranaceus Burge.的干燥根中提取，為淡黃色粉末，純度超過65%，提取方法:膜莢黃芪原藥，以95%乙醇加熱回流提取3次，每次10倍量，提取1.5 h/次，上大孔樹脂柱，依次用蒸餾水、40%、70%、98%乙醇洗脫、蒸干，再熱回流提取3次，蒸干［3］。紅花黃色素從菊科植物紅花 Carthamus tinctorius L.的干燥花中提取，為橙黃色粉末，純度為96.4%，提取方法:紅花原藥浸泡30 min，70℃水溶液10倍、12倍量2次提取，提取20 min/次，蒸干［4］。鹽酸利多卡因注射液，山東華魯制藥有限公司，批號B0710241;合心爽(鹽酸地爾硫卓片)30 mg/片，天津田邊制藥有限公司，批號0010107;戊巴比妥鈉，德國進口分裝，批號060919;硝基藍四唑(N-BT)，上?；瘜W試劑廠，批號20070102;血管緊張素(ET)、6酮前列環(huán)素(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)測定試劑盒由解放軍總醫(yī)院東亞放免技術研究所提供。

1.2 動物 健康成年雜種犬，雌雄兼用，30只，平均體質量(14.5±2)kg，由北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠提供［京動許字(2000)第010號］。

1.3 儀器 電動呼吸機(SD-5)，上海醫(yī)療器械股份有限公司;DGD-300-2A醫(yī)用高頻電刀，北京貝村電子科技有限公司;MP-150型多道生理記錄儀，美國BIOPAC公司;低溫離心機，上海安亭科學儀器廠;FT-630G型自動γ計數(shù)儀，北京;HPIAS-1000型醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)，北京科海公司。

1.4 方法 將30只犬隨機分為5組，每組6只，分別為模型組、對照組(Diltiazem，5 mg/kg)、紅花組(紅花黃色素60 mg/kg)、黃芪組(黃芪總皂苷180 mg/kg)、紅芪復方組(紅花黃色素60 mg+黃芪總皂苷180 mg);采用左冠狀動脈前降支(LDA)，于犬的左冠狀動脈前降支的第二、三分支之間結扎，復制急性心肌梗死模型，冠狀動脈結扎穩(wěn)定15 min，經十二指腸插管給藥(地爾硫卓片、紅花組、黃芪組及紅芪均用氯化鈉注射液或CMC鈉溶解)，給藥體積為1 mL/kg，模型組給予相同體積的0.09%氯化鈉注射液。分別于結扎前、結扎 15 min 后、藥后30、60、90、120、180 min 股靜脈取血離心，血樣凍存待測。

1.4.1 心肌梗死面積測定 藥后180 min處死動物迅速取出心臟，用生理鹽水洗凈稱質量，將左心室均勻橫切成5片，置于0.5%的 N-BT(用 pH7.4 ～7.7 的0.2%Tris液配置)溶液中染色37℃水浴10 min，洗去多余的染料，梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)呈藍紫色，用掃描儀對心臟切片進行掃描，后各片稱質量。

1.4.2 ET、TXB2和 6-keto-PGF1α測定 按試劑盒說明要求用放免法測定血漿ET、TXB2和6-keto-PGF1α。

1.4.3 CK測定 采用速率法測定血清CK。

1.5 統(tǒng)計學方法 實 驗數(shù)據以實測值和給藥前后差值變化百分率兩種形式的均數(shù)±標準差(±s)表示，以不同時間的實測值進行給藥前后自身比較，其變化百分率進行組間比較，t檢驗判斷其顯著性。

2 結果

2.1 對犬心肌梗死面積的影響 與模型組相比，各組均能明顯降低心肌梗死面積，差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)。與黃芪組、紅花組比，紅芪組能明顯降低心肌梗死面積，差異顯著(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義。結果見表1。

表1 各給藥組對心肌缺血犬心肌梗死面積的影響(n=6)

2.2 對犬血清CK影響 與模型組相比，除黃芪組藥后60 min，各組在藥后30～180 min均能明顯降低血清CK增幅(P＜0.05或P＜0.01)。紅芪組較黃芪組、紅花組更能降低血清CK增幅，但差異不明顯。對照組、紅花組、黃芪組和紅芪組組間無顯著性差異。結果見圖1。

圖1 各給藥組對心肌缺血犬血清肌酸激酶(CK)的影響

2.3 對犬血漿ET的影響 與模型組相比，紅花組各時段無顯著差異性;黃芪組各時段無顯著性差異;紅芪組在藥后120 min能明顯降低血漿ET增幅(P＜0.05)。紅芪組較黃芪組、紅花組更能降低血漿ET增幅，但差異不明顯。各藥物組間無顯著性差異。結果見圖2。

圖2 各給藥組對心肌缺血犬血漿內皮素(ET)的影響

2.4 對犬血漿TXB2的影響 與模型組相比，紅芪組在藥后180 min能明顯降低血漿TXB2增幅，差異顯著(P＜0.05);紅花組和黃芪組對血漿TXB2增幅無顯著性影響。紅芪組較黃芪組、紅花組更能降低血漿TXB2增幅，但差異不明顯。各藥物組間無顯著性差異。結果見圖3。

圖3 各給藥組對心肌缺血犬血漿血栓素B2(TXB2)的影響

2.5 對犬血漿6-keto-PGF1α的影響 與模型組相比，紅芪組較黃芪組、紅花組更能升高血漿6-keto-PGF1α，但差異不明顯。各藥物組間無顯著性差異。結果見圖4。

圖4 各給藥組對心肌缺血犬血漿6-酮前列環(huán)素(6-keto-PGF1а)的影響

2.6 對犬血漿6-keto-PGF1α/TXB2的影響 與模型組相比，紅花組在藥后90、120、180 min均能明顯增加 K/T(P＜0.05或 P ＜0.01);黃芪組在藥后 90、120、180 min 均能明顯增加K/T(P ＜0.05 或 P ＜ 0.01);紅芪組在藥后 30、60、90、120、180 min均能明顯增加K/T(P＜0.05或P＜0.01)。與黃芪組相比，紅芪組在藥后60 min能明顯增加K/T(P＜0.05)，其余各給藥組間無顯著性差異。結果見圖5。

圖5 各給藥組對心肌缺血犬血漿6-酮前列環(huán)素/血栓素 B2(6-keto-PGF1а/TXB2)的影響

3 討論

心肌缺血、缺氧進而發(fā)生心肌變性壞死是心肌梗死導致心功能衰竭的根本原因，而心肌梗死面積則是影響心功能的關鍵因素，也是衡量心肌梗死嚴重程度的重要指標［5］。一般來說，左心室MIS越大，左心室舒縮功能下降越明顯，恢復越差，后果越嚴重?，F(xiàn)在已經把縮小心肌梗死面積作為抗心肌缺血藥物的主要療效指標。本實驗研究結果表明，紅花組、黃芪組、紅芪組均能明顯縮小心肌梗死面積，而且復方組較單味藥有更為明顯的效果，這為其用于臨床提供了有力依據。

CK廣泛存在于全身組織中，心肌缺血時，ATP合成障礙，心肌能量不足，自由基生成增加，損傷細胞膜結構導致通透性增加，CK從胞漿中漏出，血清中CK活性明顯升高，通過測定血清中CK活性可一定程度上反映心肌損傷程度［6］。本課題研究表明，紅芪組、紅花組和黃芪組均能明顯降低血清中CK的活性，其減輕心肌損傷程度與其縮小心肌梗死面積的結論相一致。

內皮素是從內皮細胞分離并純化的一種迄今為止所知最強的縮血管物質［7］。急性心肌缺血發(fā)病時，血漿和心肌ET含量明顯升高，而且與病情和預后呈明顯的正相關，是急性心肌缺血的一個早期敏感的判斷療效指標［8］。

血栓素A2(TXA2)是體內很強的血小板誘聚劑和血管收縮劑，而前列環(huán)素(PGI2)則是血小板聚集抑制劑和血管擴張劑。在正常生理狀態(tài)下，TXA2與PGI2在體內處于動態(tài)平衡，參與心臟血流動力學和硬化機制的調節(jié)［9］。由于兩者在體內不穩(wěn)定，半衰期較短，所以國內外均以測定TXB2和6-keto-PGI1α作為評判其濃度的標準［10］。本實驗研究證實急性心肌缺血時，血漿中ET、TXB2升高和6-keto-PGI1α含量下降，三者具有相關性，三者共同加劇了心肌缺血時心肌損傷。而紅芪復方降低了血漿中ET-1和TXB2的增加幅度，紅芪、黃芪和紅花均能增加血漿6-keto-PGF1α和升高6-keto-PGF1α/TXB2的作用，但復方組效果優(yōu)于單味藥，證明紅芪復方具有維持心肌缺血時血漿中K/T平衡，降低心肌缺血時內皮素的釋放，改善內皮細胞功能的作用。因此，可以認為紅芪復方是通過降低心肌缺血時ET的過量釋放和調控K/T嚴重失衡所導致的微血管強烈收縮和微血管內血栓的形成與堵塞，遏制無復流現(xiàn)象，從而減輕心肌缺血時心肌損傷程度。

綜上所述，紅芪復方能明顯縮小心肌梗死面積、減少心肌酶的釋放。紅芪復方能明顯減輕心肌缺血犬血漿中ET的增加幅度，增加血漿中PGF1α，使K/T比值升高，促進血漿中K/T恢復平衡，改善血管內皮細胞的內分泌功能。黃芪總皂苷與紅花黃色素配伍具有明顯的協(xié)同保護缺血心肌作用。

［1］陳伯鈞，張敏州，趙學軍.中藥減輕心肌缺血縮小心肌梗死范圍的實驗研究概述［J］.中醫(yī)研究，1999，12(2):54-57.

［2］雷 燕，劉建勛，尚曉泓，等.愈心痛膠囊對急性心肌缺血犬血漿內皮素和血液流變性的影響［J］.中國中醫(yī)藥科技，1996，3(4):23-25.

［3］孟 丹.黃芪總皂苷保護心肌損傷的機制研究［D］.江蘇:南京醫(yī)科大學，2004.

［4］初 陽，宋洪濤，陳大為，等.紅花黃色素提取工藝的研究［J］.中草藥，2006，37(8):1161-1164.

［5］Rackley C E，Russell R O，Russell J R，et al.Mordern approach to the patient with acute myocardial infarction［J］.Curr Probl Cardiol，1997，22(1):49-57.

［6］Hori M，Inoue M，F(xiàn)ukui S，et al.Correlation of ejection fraction and infarct size estimated from the total CK released in patients with acute myocardial infarction［J］.Br Heart J，1979，41(4):433-440.

［7］關 瑜，張夢璽，袁 紅，等.內皮素及細胞因子在冠心病發(fā)病中的意義［J］.湖南醫(yī)科大學學報，1998，23(6):569-571.

［8］Omland T，Lie R T，Aakvaag A，et al.Plasma endothelin determination as a prognostic indicator of 1-year mortality after acute myocardial infarction［J］.Circulation，1994，89:1573-1579.

［9］楊水祥，洪秀芳.冠心病不同臨床類型患者血漿、血小板脂質過氧化損傷與TXA_2/PGI_2平衡的研究［J］.新疆醫(yī)學院學報，1992，15(1):21-26.

［10］曾祖蔭，郭渝成，張志高.冠心病微血栓與血栓素B2，6-酮前列腺素 F1α的臨床關系［J］.微循環(huán)學雜志，1994，4(1):17-18.