中國農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院 王娟娟 王順喜 ＊

中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心 陸文清

北京晟亞育達(dá)生物科技有限公司 胡起源

研究表明，飼料經(jīng)微生物發(fā)酵后，營養(yǎng)價(jià)值可得到明顯改善，pH明顯降低，富含有益微生物和有機(jī)酸。本試驗(yàn)旨在應(yīng)用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)微生物發(fā)酵飼料，進(jìn)行豬的無抗生素飼養(yǎng)，在前期試驗(yàn)基礎(chǔ)上（陸文清和王翔，2008），進(jìn)一步檢測發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬的免疫功能及抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧 試驗(yàn)動(dòng)物選用 “杜長大”三元雜交仔豬，試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧?；A(chǔ)日糧為對(duì)照組；基礎(chǔ)日糧+金霉素為抗生素組；基礎(chǔ)日糧+發(fā)酵飼料為發(fā)酵料組。參考NRC（1998）豬的營養(yǎng)需要，按照等能量等蛋白質(zhì)的原則配制基礎(chǔ)日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。發(fā)酵飼料為北京晟亞育達(dá)生物科技有限公司研制，含有發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum）、釀酒酵母 （Saccharomyces cerevisae）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），預(yù)混料由北京德寶群興科貿(mào)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 選取72頭平均體重為（14.17±0.24）kg 斷奶的健康“杜長大”三元雜交仔豬，按飼養(yǎng)試驗(yàn)要求隨機(jī)分為3個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)（圈），每圈8頭。按體重相近，公母各半，同一圈中每頭仔豬盡可能來自不同母豬的原則，隨機(jī)分成9圈。免疫消毒程序按豬場常規(guī)方法進(jìn)行。

1.3 測定指標(biāo) 試驗(yàn)開始后，在第7天和第21天時(shí)，清晨前腔靜脈采血10 mL。其中，2 mL注入EDTA-K2抗凝瓶中混勻，在日本產(chǎn)F-800型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行白細(xì)胞數(shù)量和分類的測定，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率試驗(yàn)根據(jù) 《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（1991）執(zhí)行。余下的血液靜置、離心（3000 r/min，10 min），分離血清，用于免疫球蛋白及抗氧化酶活性的測定。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平

血清免疫球蛋白（IgA、IgG和IgM）采用用免疫透射比濁法測定，用日本島津CL-7200型全自動(dòng)生化分析儀測定。

血清中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量，按照試劑盒說明書測定（南京建成生物工程研究所）。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0 for Windows（SPSS Inc.，USA）軟件進(jìn)行方差分析，用Tukey法進(jìn)行多重比較。P<0.05為差異顯著程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 斷奶仔豬血液免疫指標(biāo) 結(jié)果見表2。

表2 發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響

由表2可知，試驗(yàn)開始后的第21天與第7天相比，血液中白細(xì)胞數(shù)量和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率呈上升趨勢。試驗(yàn)第7天白細(xì)胞數(shù)量組間無顯著差異（P>0.05），但在試驗(yàn)期末白細(xì)胞數(shù)量組間差異顯著（P<0.05），發(fā)酵料組顯著高于對(duì)照組。單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞在試驗(yàn)第7天還未分化出來，試驗(yàn)期末二者在血液中的含量組間無顯著差異，此外，在試驗(yàn)開始后的第7天和21天，白細(xì)胞分類的其他成分在各處理組也無顯著差異（P>0.05）。在試驗(yàn)第7天，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以發(fā)酵料組最高，顯著高于其他兩組（P<0.01）。試驗(yàn)期末淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以發(fā)酵料組最高，抗生素組次之，對(duì)照組最低，顯著低于其他兩組（P<0.001）。

由表2可見，隨著試驗(yàn)期的增加，仔豬血清I-gA、IgG和IgM水平呈上升趨勢。在試驗(yàn)期末，發(fā)酵料組仔豬血清IgA濃度顯著高于其他兩組（P<0.01）。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，三組仔豬血清IgG和IgM的含量無顯著差異（P>0.05）。

2.2 斷奶仔豬血液抗氧化指標(biāo) 結(jié)果見表3。

表3 發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬抗氧化指標(biāo)的影響

從表3可以看出，隨著試驗(yàn)期的增加，發(fā)酵料組仔豬血液中 T-AOC、SOD、GSH-Px和 CAT水平均呈上升趨勢，MDA的濃度呈下降趨勢。在試驗(yàn)期第7天，發(fā)酵料組仔豬血液中SOD、GSH-Px和CAT的活性均顯著高于對(duì)照組 （P<0.01或P<0.001）。發(fā)酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他酶的活性均差異不顯著（P>0.05）。在試驗(yàn)第7天，仔豬血液的MDA值在各組間差異不顯著（P>0.05）。

在試驗(yàn)期末，發(fā)酵料組仔豬血液中T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT水平均顯著高于對(duì)照組（P<0.05或P<0.01或P<0.001），MDA值顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。發(fā)酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他抗氧化指標(biāo)均差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

3.1 發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬血液免疫指標(biāo)的影響從試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著試驗(yàn)期的增加，發(fā)酵飼料組豬血液中白細(xì)胞數(shù)量高于對(duì)照組，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率也高于抗生素組和對(duì)照組。研究表明，日糧添加益生素（含酪酸菌、糞鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳鏈球菌、酵母菌和芽孢桿菌）可以增加血液中白細(xì)胞數(shù)量（武晶等，2009）。T淋巴細(xì)胞是體內(nèi)主要的免疫活性細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟以后經(jīng)血液、淋巴循環(huán)運(yùn)行定居于外周免疫器官，發(fā)揮免疫細(xì)胞的功能，以植物凝集素作為促分裂因子來檢測淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能，其轉(zhuǎn)化率的高低常作為衡量機(jī)體免疫水平的指標(biāo)，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率越高，意味著淋巴細(xì)胞在外來因子的刺激下增殖反應(yīng)越強(qiáng)，機(jī)體的細(xì)胞免疫能力越強(qiáng)。有研究報(bào)道，斷奶仔豬飼料中添加益生菌 （酵母菌和乳酸菌），T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率提高（朱元招等，2008；胡發(fā)軍等，2003）。這表明，發(fā)酵飼料中益生菌有刺激免疫的作用，日糧添加發(fā)酵飼料能刺激仔豬的非特異性免疫反應(yīng)，使得豬在疫病應(yīng)激情況下生長性能良好。

本試驗(yàn)期第21天時(shí)，發(fā)酵料組仔豬血清IgA的濃度高于抗生素組和對(duì)照組。Erickson和Hubbard（2000）研究表明，乳酸桿菌能夠提高試驗(yàn)動(dòng)物模型IgA的產(chǎn)量。Perdigon等（1995）研究報(bào)道，小鼠口服嗜酸乳酸桿菌或干酪乳酸桿菌能夠顯著提高分泌IgA漿細(xì)胞的數(shù)量。由此看來，該發(fā)酵飼料可能因其富含發(fā)酵乳桿菌，從而促進(jìn)仔豬機(jī)體的體液免疫反應(yīng)，提高機(jī)體抵抗能力，抵抗各種病原微生物感染。

3.2 發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬血液抗氧化指標(biāo)的影響 大量研究表明，益生菌具有抗氧化活性（張江巍和蕾郁生，2005），本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與抗生素添加組相比，日糧添加發(fā)酵飼料可顯著提高仔豬血液SOD含量。由此可見，添加富含益生菌發(fā)酵飼料的日糧可增強(qiáng)仔豬機(jī)體清除自由基的能力，有助于提高仔豬的抗應(yīng)激能力。

4 結(jié)論

從血液中白細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和I-gA的含量看，采食添加發(fā)酵飼料的日糧后，能刺激仔豬機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)，從而提高豬的抗應(yīng)激和抗病能力，改善豬的生長性能。

從血液抗氧化指標(biāo)的測定結(jié)果看，采食添加發(fā)酵飼料的仔豬機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng)，利于緩解仔豬斷奶應(yīng)激。

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