王賢英 謝香菊 李勝容

重慶市中藥研究院，重慶 400065

火把花學(xué)名昆明山海棠 (Tripterygium Hypoglaucum Hutch，THH)，又名粉背雷公藤、金剛藤等，是衛(wèi)茅科雷公藤屬落葉披散或蔓狀灌木植物?；鸢鸦ㄒ幻驾d于《本草綱目》，李時珍集解曰:“生滇南者花紅，呼為火把花?！薄吨参锩麑崍D考》稱昆明山海棠，《滇南本草》稱紫金皮，《中藥大辭典》、《全國中草藥匯編》、《中國有毒植物》等都有收載。我國昆明山海棠資源豐富，多集中于云南楚雄、紅河、玉溪、昆明、四川德昌等地。關(guān)于火把花的藥用部位還有許多爭議，但上海市藥品檢驗所1990年的調(diào)查表明，主要藥用部位為根、根皮及莖枝［1］。

火把花的化學(xué)成份非常復(fù)雜，長期研究發(fā)現(xiàn)火把花含有生物堿類［如:雷公藤堿(wilfordie)、雷公藤次堿 (wilfori)等］、二萜類［如:雷公藤甲素 (Triptonide)等］、甙類、糖類、有機酸類 (如:齊墩果酸)、多糖、β－谷甾醇、酚性物質(zhì)等多種化學(xué)成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗生育等藥理活性。火把花的功能主治為“祛風(fēng)除濕，舒筋活絡(luò)，清熱解毒”。臨床常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎、白血病、紅斑狼瘡、跌打勞傷、皮膚瘙癢等疾病，其療效顯著。

由于當(dāng)前中藥材資源越來越缺乏，為了控制藥材質(zhì)量，又要充分利用好藥材資源，本實驗采用HPLC法，不但對火把花的根、根皮、莖枝的主要化學(xué)成分雷公藤甲素含量進行了測定，而且對人們?nèi)菀缀鲆暤娜~的化學(xué)成分雷公藤甲素含量也進行了測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－2010A型高效液相色譜儀，Shimadzu CLASS－VP V6.12 SP4工作站 (日本島津公司)，色譜柱Diamonsil(鉆石)柱4.6mm×250mm，5μm(C18柱，迪馬公司)，SK250LH超聲儀 (上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，梅特勒－托利多AB265－S型電子分析天平。

1.2 試藥 乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為超純水，雷公藤甲素對照品 (中國藥品生物制品檢定所提供，批號:1518—200101)，火把花根 (去皮)、火把花根皮、火把花莖枝、火把花葉均采自四川德昌。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;雷公藤甲素:乙腈－水 (25:75)為流動相，流速1.0 ml/min，柱溫為30℃，檢測波長為220nm，進樣量10μL。理論塔板數(shù)按雷公藤甲素峰計算，應(yīng)不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重雷公藤甲素對照品適量，加甲醇:水 (60:40)制成每1ml含10μg的溶液，即得對照品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取雷公藤甲素對照品1.25mg于10ml容量瓶中，用甲醇:水 (60:40)溶解并稀釋至刻度，搖勻;再精密吸取此濃度對照品溶液1.0 ml于10ml容量瓶中，用甲醇:水 (60∶40)溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45?m濾膜濾過，即得濃度為0.0125mg/ml的雷公藤甲素對照品溶液，分別取該溶液 1、5、10、15、20、25、30μl于 HPLC儀，測定各色譜峰積分面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，雷公藤甲素進樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算得回歸方程?；貧w方程:A=1694825.6X+5865.6，r=0.9997。結(jié)果表明，雷公藤甲素在0.0125μg～0.3750μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見圖1。

2.4 精密度試驗

分別精密吸取雷公藤甲素對照品溶液各10μl按上述色譜條件，反復(fù)進樣6次，結(jié)果雷公藤甲素的RSD=1.0%，說明儀器精密度較好。

圖1 雷公藤甲素HPLC圖譜

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取新配制的雷公藤甲素對照品溶液各10μl，分別于1、2、4、5、6小時各進樣一次，共進樣5次，5次測定相對應(yīng)峰的峰面積，RSD為0.8%，表明對照品溶液在6小時以內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 供試品溶液制備方法

取藥材樣品適量，粉碎，過四號篩，取2g，精密稱定，加甲醇50ml，超聲1小時，濾過，殘渣用甲醇洗滌2次，每次10 ml，回收甲醇至約1～2ml，殘留物用甲醇約3ml溶解，上中性氧化鋁柱 (10g，μ1.5cm，L4～5cm)，用丙酮60ml洗脫，收集丙酮洗脫液并回收至干，殘留物加甲醇:水 (60:40)溶液適量使溶解并定容至5ml，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。見圖1。

2.8 供試品穩(wěn)定性試驗

精密吸取新配制的供試品溶液10μl［樣品批號:火把花根 (去皮)］，分別于0、1、2、3、4小時進樣一次進行測定，計算雷公藤甲素含量，RSD為1.7%，表明樣品供試品4小時以內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重現(xiàn)性試驗

取同一火把花根 (去皮)各5份，分別研成細粉，按照供試品制備方法各自制備供試品溶液，取各供試品溶液10μl，并按上述色譜條件進行測定，其五次測定結(jié)果的雷公藤甲素RSD為0.8%，表明其重現(xiàn)性較好。

2.10 回收率試驗

取火把花根 (去皮)粉 (含量為22.67μg/g)(過四號篩)適量，分別稱取約2g，精密稱定9份，分別精密加入雷公藤甲素對照品 (濃度為12.5μg/ml)2、4、6ml各3份，按照供試品制備方法“雷公藤甲素”制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1，平均回收率為97.83%，RSD為2.30%。本方法回收率較好，方法可行。

2.11 火把花的根皮、根、莖枝、葉中的雷公藤甲素含量測定

分別稱取不同部位的藥材樣品，粉碎，過四號篩，各取約2g，精密稱定，按照樣品供試品制備方法制備供試品溶液，采用HPLC外標(biāo)一點法，分別精密吸取對照品溶液10μl與各供試品溶液10μl，依正文色譜條件測定，計算本品中雷公藤甲素的含量。

表1 火把花根 (去皮)中雷公藤甲素回收率試驗測定結(jié)果

表2 火把花藥材中不同部位的雷公藤甲素含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 參照雷公藤總萜片國家標(biāo)準(zhǔn) (Z20026007)中“雷公藤甲素”HPLC測定和相關(guān)文獻報道［2］，選擇220nm作為測定雷公藤甲素的檢測波長，流動相為乙腈:水 (25∶75)。

3.2 火把花的化學(xué)成份非常復(fù)雜，其中有的成分與雷公藤相似，僅含量有差別，而有的僅見于火把花。從以上測定結(jié)果可以看出，同種火把花藥材中，雷公藤甲素的含量:皮＞根＞莖＞葉含量?；鸢鸦ㄖ参锸且吧模壳斑€沒有種植，為了保護火把花藥材資源，要充分利用火把花各不同藥用部位的成分含量，物盡其用。因此對該植物進行更深入的開發(fā)研究是很有必要的。

［1］楊小紅，張偉程，陳香．火把花根的研究概況［J］．中醫(yī)藥臨床雜志，2007，19(3):315－317．

［2］李勝容，王賢英．HPLC法測定昆明山海棠片中雷公藤甲素的含量［J］．藥物分析雜志，2008，28(7):1150－1152．