天津南開醫(yī)院 (天津 300100)房 杰 孫蘭菊 陳明慧

腸源性內(nèi)毒素血癥[1]在臨床疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著非常重要的作用,目前被越來越多的人重視,已成為臨床及科研熱點(diǎn)問題。腸缺血再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury,I/R)不僅可導(dǎo)致腸道粘膜局部組織壞死,產(chǎn)生腸源性內(nèi)毒素血癥,還可導(dǎo)致腸道菌群移位和腸吸收功能的改變,以及遠(yuǎn)處器官的損害,甚至發(fā)生多系統(tǒng)器官功能不全綜合征。本研究擬通過腸缺血再灌注建立大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥模型,觀察鮮生地治療對腸源性內(nèi)毒素血癥的影響,探討其作用機(jī)制,為腸源性內(nèi)毒素血癥的治療提供思路。

材料與方法

1 材 料 鮮生地來源于河南武陟縣,經(jīng)鑒定為玄參科植物地黃的根狀莖,采購后真空凍存保鮮[2],去皮后榨汁使用。乳果糖口服液由蘇威制藥生產(chǎn)。內(nèi)毒素測定試劑盒由上海醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)所提供。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組:健康成年 SD大鼠 180只,體質(zhì)量 200～ 220g,由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院四所動物中心提供,實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng) 3d。隨機(jī)分為 5組,即正常組、腸缺血再灌注(I/R)組、I/R+鮮生地大劑量組(15ml/kg體質(zhì)量)、I/R+鮮生地小劑量組(7.5ml/kg體質(zhì)量)和 I/R+乳果糖組(7.5ml/kg體質(zhì)量),每組36只,雌雄各半。正常組、I/R模型組按 7.5ml/kg體質(zhì)量生理鹽水灌胃,用藥組給予相應(yīng)劑量藥物灌胃。提前給藥 3d后造模,術(shù)前禁食 12h,自由飲水。

2.2 大鼠模型的建立:參照 Koike等方法復(fù)制腸I/R模型。大鼠腹腔注射 10%水合氯醛(30ml/kg體質(zhì)量)麻醉,經(jīng)腹正中切口,分離腸系膜上動脈,微動脈夾夾閉其根部,30min后取出動脈夾,恢復(fù)血供,進(jìn)行腹部切口縫合,再灌注 24h、48h、72h時(shí)麻醉下腹腔切開,留取門靜脈血液,腸組織標(biāo)本。

2.3 顯微鏡觀察:距十二指腸球部 10cm處相同部位取約 1cm腸管,4℃生理鹽水洗去腸內(nèi)容物,除去外膜脂肪組織,固定于 4%多聚甲醛 12h。常規(guī)石蠟切片,HE染色,在光鏡下觀察。腸粘膜病理損傷程度分 5級。光鏡下閱片由兩人分別獨(dú)立進(jìn)行,取均值,按照分級進(jìn)行評分。

2.4 內(nèi)毒素測定:血液肝素抗凝后,在 4℃低溫離心機(jī),500r/min離心 10min后,分離血漿,采用合成基質(zhì)偶氮顯色法鱟試驗(yàn)測定血漿內(nèi)毒素。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:數(shù)據(jù)處理采用 SPSS11.5軟件,結(jié)果以(±s)表示。組內(nèi)治療前后比較用方差分析,組間比較采用 t檢驗(yàn)。

結(jié) 果

1 各組大鼠血漿內(nèi)毒素含量變化:I/R組血漿各時(shí)點(diǎn) ET含量明顯高于正常組,鮮生地大、小劑量組及乳果糖組與 I/R組相比,各時(shí)點(diǎn)血漿 ET含量均明顯降低。而鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組各時(shí)點(diǎn)血漿ET水平無顯著差異,見表 1。

表1 各組大鼠門靜脈血內(nèi)毒素含量比較(±s,Eu/ml)

表1 各組大鼠門靜脈血內(nèi)毒素含量比較(±s,Eu/ml)

注:I/R組與正常組比較,各時(shí)點(diǎn) P＜0.01;I/R組與鮮生地大、小劑量組,乳果糖組相比,各時(shí)點(diǎn) P＜0.05;鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組相比,各時(shí)點(diǎn) P＞ 0.05。組內(nèi)比較,鮮生地大、小劑量組,乳果糖組不同時(shí)點(diǎn) P＜0.01

組 別 n 24h 48h 72h正常組 12 0.046± 0.004 0.047± 0.002 0.045± 0.006 I/R組 12 0.303± 0.108 0.257± 0.034 0.146± 0.028生地小劑量組 12 0.178± 0.030 0.096±0.007 0.060±0.008生地大劑量組 12 0.173± 0.011 0.093±0.007 0.058±0.010乳果糖對照組 12 0.169± 0.006 0.094±0.008 0.056±0.007

2 各組腸粘膜病理損傷情況及評分:正常組小腸粘膜結(jié)構(gòu)完整,無毛細(xì)血管淤血和炎癥細(xì)胞浸潤(圖A)。 I/R組小腸粘膜明顯損傷,隨 I/R時(shí)間的延長,腸粘膜損傷加重,腸絨毛排列紊亂,至粘膜脫落和出血(圖 B)。炎癥細(xì)胞浸潤增多且逐漸擴(kuò)散,由充血進(jìn)而出血且范圍擴(kuò)大,以至造成為中重度損傷,甚至累及漿膜層。鮮生地大、小劑量組及乳果糖組各時(shí)點(diǎn)腸粘膜損傷程度較 I/R組有明顯改善,見表 2。

表2 各組大鼠腸粘膜損傷評分表

圖 A 正常組(HE× 100)

圖 B I/R組 (HE×100)

討 論

腸道作為人體的消化器官,在維持機(jī)體正常營養(yǎng)中起著極其重要的作用[3]。腸道依靠其屏障功能及正常的微生態(tài)環(huán)境等,有效阻止腸道細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥的發(fā)生。但腸粘膜的缺血缺氧及再灌注損傷、應(yīng)激性損傷、營養(yǎng)障礙等因素[4,5]均可直接或間接造成腸道屏障的破壞,從而使腸粘膜通透性升高。腸屏障功能減弱,就可使大量的細(xì)菌和內(nèi)毒素經(jīng)由門靜脈和腸系膜淋巴系統(tǒng)侵入體循環(huán),造成腸源性內(nèi)毒素血癥和細(xì)菌移位,并在一定條件下激發(fā)細(xì)胞因子和其它炎癥介質(zhì)反應(yīng),產(chǎn)生持續(xù)性全身炎癥反應(yīng),導(dǎo)致多器官功能衰竭(MODS)。

我們的研究結(jié)果觀察到 I/R組血漿各時(shí)點(diǎn) ET含量明顯高于正常組,鮮生地大、小劑量組及乳果糖組與I/R組相比,各時(shí)點(diǎn)血漿 ET含量均明顯降低。而鮮生地汁大、小劑量組與乳果糖組各時(shí)點(diǎn)血漿 ET水平無顯著差異,證實(shí)了鮮生地對腸源性內(nèi)毒素血癥具有治療作用。同時(shí)鮮生地大、小劑量組及乳果糖組各時(shí)點(diǎn)腸粘膜損傷程度較 I/R組有明顯改善。I/R組大鼠腸粘膜損傷評分明顯高于正常組,鮮生地汁大、小劑量組及乳果糖組與 I/R組相比,腸粘膜損傷評分明顯降低,提示鮮生地汁、乳果糖可使腸粘膜損傷降低,對腸粘膜有保護(hù)作用。

鮮生地偏于寒,具有清熱生津之功效,味甘苦,性大寒,苦寒泄熱,甘寒質(zhì)潤,以養(yǎng)陰潤燥,入心肝血分,具有緩瀉作用。腸源性內(nèi)毒素血癥可納入中醫(yī)熱證范疇,應(yīng)用鮮生地甘、苦、寒的特性治療藥對其證。趙潤生等[6]研究表明生地黃能明顯改善血瘀證大鼠血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo),具有改善微循環(huán)的作用。 Prieto JM等[7]研究了 15種中國抗炎的藥用植物對白血球和血小板功能的影響,發(fā)現(xiàn)地黃能有選擇的抑制完整白血球和血小板 12-(S)-HHT1E(一個(gè)有效的環(huán)加氧酶活性標(biāo)志)產(chǎn)生,表明其具有一定的抗炎癥作用。綜上考慮鮮生地治療對腸粘膜的保護(hù)作用可能與其改善微循環(huán)、抗炎作用以及富含多種氨基酸物質(zhì)等有關(guān)?？傊?應(yīng)用鮮生地汁治療對腸源性內(nèi)毒素血癥具有治療作用,其機(jī)理可能與鮮生地緩瀉及對腸粘膜的保護(hù)作用有關(guān)。

[1]陳煒萍.腸毒清顆粒治療脾虛兼濕熱內(nèi)蘊(yùn)型肝硬化腸源性內(nèi)毒素血癥 60例[J].陜西中醫(yī),2010,31(1):22-24.

[2]賈建偉,李俊萍,馬 瑩,等.鮮生地保鮮技術(shù)的研究 [J].中草藥,2005,36(10):1569-1570.

[3]李秋偉,劉旭強(qiáng),房 杰,等.鮮生地汁對大鼠腸缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2008,29(2):241-242.

[4]劉春峰,袁 壯.內(nèi)臟缺血缺氧代謝障礙在 SIRS和MODS中的作用 [J].小兒急救醫(yī)學(xué),2000,7(4):180-182.

[5]Secchi A,Ortanderl JM,Schmidt W,et al.Effect of endotoxemia on hepatic portal and sinusoidal blood flow in rats[J].J Surg Res,2000,89(1):26-30.

[6]趙潤生,張一昕,苗冬雪,等.生地黃對血瘀模型大鼠血液流變性的影響[J].中藥藥理與臨床,2006,22(3、4):123.

[7]Prieto JM,Recio M C,Giner RiM,et al.Influence of traditional Chinese anti inflammatory medicinal plants on leukocyte and platelet functions[J].J Pharm Pharmacol,2003,55:1275-1282.