西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系 陳鵬飛 何張萍西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系 伍 莉＊

蛋白質(zhì)是水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)的重要營(yíng)養(yǎng)元素，又是影響飼料成本的重要因子，而作為水產(chǎn)動(dòng)物飼料中重要的動(dòng)物蛋白源，由于其資源量下降，價(jià)格昂貴，成為影響飼料成本的主要因素之一。因此，尋找適宜的魚(yú)粉比例可以充分利用緊缺的動(dòng)物蛋白，最大限度地滿足養(yǎng)殖對(duì)象的生長(zhǎng)需求 （陸陽(yáng)等，2010；江仁黨等，2004）。丁鱥（Tinca tinca）屬鯉形目鯉科雅羅魚(yú)亞科丁鱥屬，是廣泛分布于歐洲大陸、亞洲高加索山脈和西伯利亞地區(qū)的一種重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，其含肉率高達(dá)73.59%，魚(yú)肉蛋白質(zhì)含量19.73%，脂肪含量1.29%，氨基酸總量18.13%，其中必需氨基酸量為7.04%（黃峰等，2004）。丁鱥肌肉所含人體必需氨基酸占氨基酸總量的百分比高于WHO/FAO提出標(biāo)準(zhǔn)，必需氨基酸指數(shù)為74.38，尤其富含多聚不飽和脂肪酸，二十碳五烯酸含量及二十二碳六烯酸含量在總脂中分別達(dá)到了5.14%和6.0%，而被歐洲人視為保健食品（Vacha 和 Eva，1995）。近年來(lái)，丁鱥在我國(guó)部分地區(qū)已有養(yǎng)殖，關(guān)于幼魚(yú)生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)及飼料的研究已有少量報(bào)道（馮新忠等，2008），但有關(guān)丁鱥配飼中適宜的蛋白水平還很少報(bào)道。本試驗(yàn)以魚(yú)粉作為動(dòng)物蛋白源，豆柏、菜餅為植物蛋白源來(lái)配制試驗(yàn)飼料，旨在探討丁鱥配飼中適宜的魚(yú)粉比例，為丁鱥應(yīng)用配合飼料的研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú) 丁鱥幼魚(yú)購(gòu)于四川隆昌縣古宇湖漁場(chǎng)，均重（6.5±0.22）g，共計(jì) 900 尾。

1.2 試驗(yàn)飼料 根據(jù)丁鱥屬肉食性兼雜食性魚(yú)類(lèi)的特點(diǎn)，飼料以魚(yú)粉作動(dòng)物蛋白源，豆粕、菜餅為植物蛋白源，并按魚(yú)粉比例占飼料蛋白0%、20%、40%、60%、80%、100%配成 6種飼料，分別投喂試驗(yàn)組丁鱥。為提高飼料的適口性，在飼料中加入少量腥味誘食劑，同時(shí)加入適量水產(chǎn)黏合劑，基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾，用3%食鹽水消毒后養(yǎng)殖于水族箱 （100 cm×48 cm×50 cm）中，暫養(yǎng)1周，待其適應(yīng)環(huán)境、正常攝食后開(kāi)始試驗(yàn)。24 h充氧，每日投喂2次（09∶00和16∶00），投飼率為3%～5%。試驗(yàn)期間根據(jù)養(yǎng)殖水體混濁度采用虹吸法每2～3 d換水一次，每次換水量約占總水量的30%。試驗(yàn)期間水溫控制在22～25℃，pH為8.10～8.50，溶氧＞7.0 mg/L，氨 ＜0.30 mg/L，試驗(yàn)時(shí)間56 d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)禁食（自由飲水）24 h后稱重，統(tǒng)計(jì)每組魚(yú)的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)，再與試驗(yàn)前的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，即可得出不同比例的魚(yú)粉對(duì)試驗(yàn)魚(yú)生長(zhǎng)的影響。

表1 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（理論值）

1.4 生長(zhǎng)性能測(cè)定 參考李?lèi)?ài)杰（1996）和劉永堅(jiān)等（2002）的方法測(cè)定。計(jì)算公式如下：

增重率（WGR）/%=100×（終末尾均重－初始尾均重）/初始尾均重；

特定生長(zhǎng)率（SGR）/（%/d）=（1n 終末尾均重-ln 初始尾均重）/天數(shù)×l00；

飼料系數(shù)（FCR）= 攝食量/增重×l00；

蛋白質(zhì)效率（PER）/%=（終末尾均重-初始尾均重）/蛋白質(zhì)攝入量×100。

1.5 消化酶活性測(cè)定

1.5.1 酶液制備 參照王愛(ài)民等（2010）方法制備粗酶提取液，并于24 h內(nèi)分析完畢。

1.5.2 蛋白酶測(cè)定 參照 《生化技術(shù)導(dǎo)論》（中山大學(xué)生物系，1979）進(jìn)行。在 pH 7.6，（30±1）℃下保溫15 min，以1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸為一個(gè)活性單位。

1.5.3 淀粉酶 參照 《臨床生化檢驗(yàn)》（上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所，1979）進(jìn)行。 在 pH 7.6，（30±1）℃下，100 mL酶液在30 min內(nèi)完全水解10 mg淀粉為一個(gè)活性單位。

1.5.4 脂肪酶 參照 《生化技術(shù)導(dǎo)論》（中山大學(xué)生物系，1979）進(jìn)行。 在 pH 7.6，（30±1）℃下，脂肪酶水解脂肪1 min產(chǎn)生1 μg分子脂肪酸的酶量定義為一個(gè)活性單位。

1.6 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 17.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），差異顯著時(shí)進(jìn)行Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥幼魚(yú)生長(zhǎng)及飼料利用的影響 由表2可見(jiàn)，隨著魚(yú)粉比例的提高，丁鱥的增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白效率也隨之增高，且在魚(yú)粉為60%時(shí)達(dá)到最大，此時(shí)飼料系數(shù)為最低。但魚(yú)粉超過(guò)60%后，增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白效率呈下降趨勢(shì)，飼料系數(shù)開(kāi)始升高。增重率和特定生長(zhǎng)率各試驗(yàn)組之間除第Ⅴ組與第Ⅵ組差異不顯著（P＞0.05）外，其余各組間差異極顯著（P＜0.01）；飼料系數(shù)以第Ⅳ組最低，但與Ⅲ、Ⅴ組比較差異不顯著（P＞0.05），與Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ組比較差異顯著（P＜0.05）；蛋白質(zhì)效率以第Ⅳ組最高，但與Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ組比較差異不顯著（P＞0.05），與Ⅰ、Ⅱ組比較則差異顯著（P＜0.05）。

表2 飼料中不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響

2.2 不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥幼魚(yú)消化酶活性的影響 由表3可見(jiàn)，隨著魚(yú)粉比例的增加，丁鱥蛋白酶顯著升高，并在飼料魚(yú)粉比例為60%時(shí)（第Ⅳ組）達(dá)到最大，其中腸蛋白酶活性與Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ組比較差異顯著（P＜0.05），肝胰臟蛋白酶活性差異極顯著（P＜0.01）。之后，隨著魚(yú)粉比例繼續(xù)增加，蛋白酶活性、淀粉酶活性開(kāi)始下降。結(jié)果顯示，飼料中動(dòng)植物蛋白水平的一定配比可以使腸和肝胰臟蛋白酶活性增加。同時(shí)，隨著魚(yú)粉比例的增加，丁鱥腸淀粉酶與肝胰臟淀粉酶活性亦呈上升趨勢(shì)，飼料魚(yú)粉比例在60%時(shí)（第Ⅳ組）達(dá)到最大（分別為 348.63 U/mg和 443.76 U/mg），但腸淀粉酶活性第Ⅳ組與Ⅲ、Ⅴ組比較差異不顯著（P＞0.05），與Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ組比較差異顯著（P ＜ 0.05），第Ⅳ組肝胰臟淀粉酶活性與試驗(yàn)各組比較差異極顯著（P＜0.01）；在相同魚(yú)粉比例條件下，肝胰臟淀粉酶活性高于腸淀粉酶活性，表明適宜的魚(yú)粉比例對(duì)激活肝胰臟淀粉酶活性具有促進(jìn)分泌的作用。魚(yú)粉比例的變化對(duì)腸和肝胰臟的脂肪酶活性均無(wú)顯著影響，各試驗(yàn)組之間差異不顯著 （P＞0.05）。

表3 飼料中不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥腸道及肝胰臟消化酶活性的影響U/mg

3 討論

3.1 不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥幼魚(yú)生長(zhǎng)及飼料利用的影響 韓慶等（2002）研究發(fā)現(xiàn)，隨著動(dòng)物蛋白含量的增高，黃顙魚(yú)增重、蛋白質(zhì)效率也增高，飼料系數(shù)下降，但當(dāng)動(dòng)物蛋白含量高于67%時(shí)，其增重、蛋白質(zhì)效率變化不明顯，飼料系數(shù)反而會(huì)略升。中華鱘飼料中動(dòng)植物蛋白比為1∶1時(shí)，幼鱘的生長(zhǎng)就能達(dá)到較好的效果，當(dāng)動(dòng)植物蛋白比達(dá)3∶1時(shí)，既能發(fā)揮中華鱘生長(zhǎng)迅速的潛力，又可獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益（莊平等，2002）。但并非動(dòng)物蛋白含量越高，魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)效果越好 （宋學(xué)宏等，2004）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著魚(yú)粉含量從0%上升到60%，試驗(yàn)魚(yú)體增重率、特定生長(zhǎng)率也隨之增加，達(dá)60%時(shí)效果最佳，且與其他試驗(yàn)組差異極顯著（P＜0.01），此時(shí)飼料系數(shù)最低，蛋白質(zhì)效率最高，這與動(dòng)物蛋白具有比植物蛋白更豐富的必需氨基酸等因素密切相關(guān) （周凡和邵慶均，2007）。但當(dāng)魚(yú)粉含量超過(guò)60%后，增重率、特定生長(zhǎng)率隨之降低，其原因可能有兩種：一是由于飼料中魚(yú)粉比例過(guò)高，而作為主要植物蛋白源的豆粕比例較少時(shí)，雖然能保證飼料總蛋白含量一致，但因飼料中必需氨基酸比例失調(diào)而降低了魚(yú)類(lèi)對(duì)飼料的轉(zhuǎn)換率，使其生長(zhǎng)速度減緩；二是由于飼料蛋白全由魚(yú)粉提供，或者魚(yú)粉含量過(guò)高，在加工和貯存過(guò)程中致使魚(yú)粉中的油脂氧化產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)對(duì)飼料的利用率降低所致（向梟等，2008）。

3.2 不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥幼魚(yú)消化酶活性的影響 大量研究表明，飼料蛋白水平在一定范圍內(nèi)，蛋白酶活性隨蛋白水平的增加而升高 （石英等，2009；錢(qián)曦等，2007；黃峰等，2003）。同時(shí)，不同的飼料品質(zhì)也將影響魚(yú)類(lèi)的消化酶活性，如鱖魚(yú)胃、腸、肝胰臟蛋白酶活性以飼喂動(dòng)物性餌料增加幅度最大（孫翰昌，2009）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著飼料中魚(yú)粉含量的提高，能顯著提高丁鱥的蛋白酶活性，并在含量為60%時(shí)，其蛋白酶活性最高。但隨著飼料中魚(yú)粉比例的進(jìn)一步提高，丁鱥腸和肝胰臟的蛋白酶活性反而呈下降趨勢(shì)，這與魚(yú)粉含量過(guò)高，飼料在加工和貯存過(guò)程中致使魚(yú)粉中的油脂氧化，對(duì)魚(yú)類(lèi)產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致對(duì)消化酶的分泌產(chǎn)生負(fù)反饋調(diào)節(jié)有關(guān)（向梟等，2008）。丁鱥腸的蛋白酶活性比肝胰臟的蛋白酶活性高，這與肝胰臟分泌的無(wú)活性胰蛋白酶原，在進(jìn)入腸道后被腸激酶或已有活性的胰蛋白酶所激活有關(guān) （楊蕙萍和童圣英，1998）。

試驗(yàn)結(jié)果還顯示，隨著魚(yú)粉含量從0%～60%增加，腸和肝胰臟的淀粉酶活性逐漸提高。但隨著魚(yú)粉比例的進(jìn)一步增加（超過(guò)60%），腸和肝胰臟的淀粉酶活性均有所下降，該結(jié)果與其他學(xué)者（李芹和刁曉明，2009；王海英等，2008）的研究具有相似性。分析原因，可能是過(guò)高的魚(yú)粉用量導(dǎo)致粗纖維含量降低，對(duì)腸刺激減弱，從而抑制丁鱥腸和肝胰臟淀粉酶活性。同時(shí)，丁鱥肝胰臟的淀粉酶活性比腸高，但兩者相差不大，說(shuō)明丁鱥腸和肝胰臟的淀粉酶對(duì)淀粉的消化能力差別不大，在一定程度上證明了魚(yú)類(lèi)對(duì)淀粉的消化是由腸和肝胰臟的淀粉酶共同來(lái)完成的（尾崎久雄，1985）。

宋理平等（2010）發(fā)現(xiàn)，魚(yú)類(lèi)的脂肪酶活性與食物組成之間沒(méi)有明顯的相關(guān)性。王重剛等（1998）發(fā)現(xiàn)，真鯛幼魚(yú)脂肪酶活性與食物中脂肪含量呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì)。本試驗(yàn)顯示，不同比例的魚(yú)粉對(duì)丁鱥脂肪酶活性影響并不顯著（P＞0.05），這與高攀等（2009）和錢(qián)曦等（2007）的研究結(jié)果一致。究其原因，與飼料中適宜脂肪水平已能滿足魚(yú)類(lèi)對(duì)能量的需要所致。

4 結(jié)論

綜上所述，飼喂不同比例魚(yú)粉的飼料可以影響丁鱥的消化酶活性和生長(zhǎng)，當(dāng)魚(yú)粉含量為60%時(shí)，丁鱥腸和肝胰臟蛋白酶和淀粉酶活性最高，增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料蛋白效率達(dá)到最大，飼料系數(shù)最低。

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