卞春麗，熊華玉，張修華，王升富

（湖北大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，湖北武漢430062）

以水溶液為介質(zhì)，研究了Fenton試劑在水溶液中產(chǎn)生羥自由基對(duì)蛋白質(zhì)的損傷，并用紫外可見(jiàn)光譜法對(duì)自由基的產(chǎn)生進(jìn)行了驗(yàn)證。制備了牛血清白蛋白/聚鄰苯二胺/碳包鎳修飾玻碳電極(BSA/PoPD/C-Ni/GCE)，以該電極上電活性聚合物聚鄰苯二胺為電化學(xué)探針，采用方波伏安法測(cè)定羥自由基對(duì)BSA損傷前后探針的電流變化，探討了BSA損傷的機(jī)理。BSA的損傷也被水平全反射紅外光譜(ATR-FTIR)和蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定所證實(shí)。此外還探究了H2O2濃度、Fe2+與H2O2濃度之比、浸泡時(shí)間等因素對(duì)BSA損傷程度的影響。過(guò)氧化氫酶通過(guò)催化降解H2O2，對(duì)羥自由基引發(fā)的BSA損傷發(fā)揮抑制作用。對(duì)兒茶素、抗壞血酸、蘆薈大黃素和蘆丁等抗氧化劑對(duì)BSA損傷的抑制作用也進(jìn)行了研究。這些結(jié)論表明，該電化學(xué)方法方便用于蛋白質(zhì)損傷的研究。

自由基誘導(dǎo)的蛋白損傷獲得了科學(xué)家的關(guān)注，作為在細(xì)胞豐度最大的物質(zhì)，蛋白很可能成為自由基攻擊的主要目標(biāo)，尤其是蛋白質(zhì)的氧化是神經(jīng)退行性疾病的重要誘因。幾乎所有的蛋白質(zhì)中氨基酸都對(duì)自由基敏感，尤其是含有巰基的氨基酸群體。大量的研究報(bào)道了生物大分子由自由基引起的損傷以及抗氧化劑在減少損害的療效。在循環(huán)系統(tǒng)最豐富的蛋白質(zhì)是血清白蛋白，由于它在醫(yī)學(xué)上的重要意義，成本低，容易獲得，不尋常的配位結(jié)合性質(zhì)，BSA常被選定為研究對(duì)象。故該文中選用BSA作為蛋白質(zhì)的代表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

實(shí)驗(yàn)中，由于聚鄰苯二胺和BSA之間的靜電作用使得BSA能穩(wěn)定固定在電極表面。機(jī)理圖1展示了·OH導(dǎo)致的BSA損傷識(shí)別方法的構(gòu)建過(guò)程。在浸泡過(guò)程中，F(xiàn)e2+和H2O2反應(yīng)生成·OH。·OH攻擊膜內(nèi)蛋白質(zhì)，引發(fā)BSA損傷。損傷后與損傷前探針導(dǎo)電聚合物聚鄰苯二胺的方波伏安電流的比值被用作檢測(cè)BSA損傷的信號(hào)值。

Fig.1 Schematic diagram of BSA damage

（略）