王 霞，楊麗珠,2，陳 琛，鄭珊珊，李 玲，何品剛*，方禹之

（1.華東師范大學(xué)化學(xué)系，上海200062）

（2.溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，浙江溫州325035）

核酸適配體（aptamer）是一類通過SELEX技術(shù)從DNA或RNA庫中篩選出來的新型的單鏈寡核苷酸片段，利用其與目標(biāo)分子的特異性結(jié)合，廣泛應(yīng)用于分子識別領(lǐng)域[1～2]。近年來學(xué)者們都努力尋找與某些疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)能特異性結(jié)合的核酸適配體，以期加強相應(yīng)疾病的診斷和治療。凝血酶（thrombin）作為血液中的一種蛋白酶，在血液凝固、創(chuàng)傷和炎癥等生理和病變過程中都發(fā)揮著重要作用[3]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，有兩段核酸適配體可以與凝血酶的不同位點進行特異性結(jié)合，能形成穩(wěn)定的三明治結(jié)構(gòu)用于傳感器的構(gòu)建。而直立碳納米管作為碳納米管材料的一種，具有定向性好、排列緊密、機械性能穩(wěn)定、比表面積大以及導(dǎo)電性好等優(yōu)點，在電極修飾檢測研究中，相比常規(guī)電極和一般碳納米管電極具有獨特的優(yōu)勢[4～6]。

該實驗通過化學(xué)沉積法制備了直立碳納米管陣列，構(gòu)建了一種新型的核酸適配體傳感器用于凝血酶的檢測，實驗原理如圖1所示。利用重氮功能化法對直立碳納米管陣列電極進行羧基化修飾，將氨基標(biāo)記的核酸適配體Ⅰ（15堿基序列：5'-GGT TGG TGT GGT TGG-3'）通過酰胺縮合固定到直立碳納米管陣列電極表面；同時制備了CdS納米顆粒修飾的核酸適配體Ⅱ （29堿基序列：5'-AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT-3'），通過三明治結(jié)構(gòu)特異性檢測凝血酶；最后用酸溶解捕獲到直立碳納米管陣列電極表面的CdS納米顆粒，通過溶出伏安法檢測Cd2+的信號。

圖1 實驗原理圖

如圖2所示，凝血酶濃度在1.0×10-8mol/L～1.0×10-12mol/L的范圍內(nèi)，該核酸適配體生物傳感器的檢測信號與凝血酶濃度的對數(shù)值呈良好的線性關(guān)系（r=0.997）。同時，該核酸適配體傳感器通過aptamer-thrombin-aptamer三明治結(jié)構(gòu)的構(gòu)建，可對凝血酶進行特異性檢測，不受其它蛋白質(zhì)如BSA、lysozyme、PHb等的干擾。該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、特異性好，為疾病的診斷提供了一定的參考。

圖2 Cd2+氧化峰電流-凝血酶濃度關(guān)系圖

（略）