符方淑，林方德，邢小麗

(文昌市人民醫(yī)院藥劑科1普外科2，海南 文昌 571300)

研究顯示，干擾素α2b對(duì)人體免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)具有比較重要的作用。干擾素α2b可增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，促使NK細(xì)胞活性增強(qiáng)，使白細(xì)胞介素2(IL-2)表達(dá)增強(qiáng)[1-2]。但尚未見有關(guān)干擾素α2b對(duì)肝癌術(shù)后患者Th1/Th2漂移影響的研究報(bào)告。本研究以IL-2代表Th1類細(xì)胞因子，白細(xì)胞介素4(IL-4)代表Th2類細(xì)胞因子，通過酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法(ELISA)方法技術(shù)檢測(cè)原發(fā)性肝癌術(shù)后短期應(yīng)用重組人干擾素α2b后外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)Th1/Th2細(xì)胞因子的表達(dá)，探討重組人干擾素α2b在肝癌切除后對(duì)患者機(jī)體Th1/Th2平衡狀態(tài)的變化，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年1月至2010年12月在我院住院的原發(fā)性肝癌患者48例，均為手術(shù)后病理確診患者，應(yīng)用重組人干擾素α2b 25例為研究組，男性19例，女性6例；年齡42～69歲，平均(51.4±9.8)歲；其中包括膽管細(xì)胞性肝癌6例，肝細(xì)胞性肝癌15例，混合細(xì)胞性肝癌4例；腫瘤平均直徑(5.4±1.9)cm；血清甲胎蛋白(AFP)＞400 ng/ml 8例，AFP 20～400 ng/ml 10例，AFP＜200 ng/ml 7例。單純手術(shù)切除23例為對(duì)照組，男16例，女7例；年齡39～61歲，平均(49.8±9.7)歲；肝細(xì)胞性肝癌18例，膽管細(xì)胞性肝癌2例，混合細(xì)胞性肝癌3例；腫瘤直徑(5.2±1.6)cm；AFP ＞400 ng/ml 8例，AFP 200～400 ng/ml 10例。AFP＜ 200 ng/ml 5例。

1.2 方法 研究組：常規(guī)治療基礎(chǔ)上加重組人干擾素α2b 100萬U肌注，每天1次，10 d為一個(gè)療程，連續(xù)治療兩個(gè)療程，對(duì)照組行常規(guī)治療。所有患者均于術(shù)前和術(shù)后10 d采集肘靜脈血4 ml，EDTA-K2抗凝。采用ELISA方法檢測(cè)IL-2、IL-4[3-4]。從已平衡至室溫的密封包裝袋中取出所需板條，除空白孔外，分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100 μl/孔)后用封板膠紙封住反應(yīng)孔，放到37℃孵箱孵育90 min，洗板4次。除空白孔外，加入生物素化抗體工作液(IL-2或IL-4)(100 μl/孔)。還是用封板膠紙封住反應(yīng)孔，再放入37℃孵箱持續(xù)孵育60 min，洗板4次。除空白孔外，加入酶結(jié)合工作液(100 μl/孔)。隨即用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育30 min，洗板4次。加入顯色劑5(100 μl/孔)，避光37℃孵箱持續(xù)孵育15 min。最后加入終止液6(100 μl/孔)，混勻后即刻測(cè)量OD450值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0，計(jì)量資料均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，各組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組術(shù)前Th1類細(xì)胞因子IL-2、Th2類細(xì)胞因子IL-4與對(duì)照組表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；術(shù)后20 d，研究組Th1類細(xì)胞因子IL-2顯著增高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。研究組Th2類細(xì)胞因子IL-4略增高，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，代表Th平衡的Th1/Th2(IL-2/IL-4)比值，研究組與對(duì)照組比較明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1、表2。

表1 兩組患者術(shù)前、術(shù)后Th1/Th2的變化(±s)

表1 兩組患者術(shù)前、術(shù)后Th1/Th2的變化(±s)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05，同組與治療前比較bP＜0.05。

組別 例數(shù)對(duì)照組研究組23 25治療后264.34±24.32 254.53±24.43 IL-2（pg/ml）治療前47.32±12.48 45.24±11.21治療后57.53±11.32 142.34±13.32ab IL-4（pg/ml）治療前253.32±22.53 246.76±24.34

表2 兩組患者Th1/Th2治療前后平衡的變化（%）

3 討 論

研究表明，與其他惡性腫瘤患者一樣，原發(fā)性肝癌患者也存在著明顯的細(xì)胞免疫功能低下的現(xiàn)象，干擾素α2b通過提高細(xì)胞免疫功能治療腫瘤，干擾素α 2b對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別和抑制，促使T淋巴細(xì)胞分化、分裂、成熟、繁殖、調(diào)整輔助性與抑制性T細(xì)胞的比例，分泌某些細(xì)胞因子[5]，但其提高免疫功能的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究闡明。

輔助性T細(xì)胞(Helper T cell)簡(jiǎn)稱Th細(xì)胞。其中，Th1細(xì)胞參與細(xì)胞免疫和遲發(fā)性超敏性炎癥反應(yīng)；Th1細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-2、腫瘤壞死因子等，主要介導(dǎo)局部炎癥和細(xì)胞毒性有關(guān)的免疫應(yīng)答，輔助抗體生成，參與遲發(fā)型超敏性炎癥及細(xì)胞免疫應(yīng)答的發(fā)生，故稱為炎癥性T細(xì)胞[6]。Th2細(xì)胞可輔助B細(xì)胞分化，主要功能為刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生免疫球蛋白G和免疫球蛋白E抗體，參與體液免疫應(yīng)答[7-8]。在機(jī)體內(nèi)微環(huán)境中，大部分細(xì)胞因子都可以上調(diào)Th2類因子，其中腹腔液局部的淋巴細(xì)胞和血液中的單核細(xì)胞產(chǎn)生的IL-4是介導(dǎo)Th2細(xì)胞發(fā)育和抑制Th1型細(xì)胞因子應(yīng)答的主要細(xì)胞因子[9-10]。因此，我們把IL-2作為Th1類因子、IL-4作為Th2類因子的表達(dá)水平為檢測(cè)患者免疫狀態(tài)的指標(biāo)。T細(xì)胞亞群的變化可以反映出細(xì)胞表型的變化，可以通過輔助性T細(xì)胞Th1/Th2亞群的平衡比率來體現(xiàn)[11]。所以研究人員對(duì)患者在機(jī)體免疫反應(yīng)發(fā)生時(shí)或者出現(xiàn)疾病時(shí)Th1/Th2的狀態(tài)進(jìn)行了大量的研究。正常機(jī)體狀態(tài)下的細(xì)胞因子Th1/Th2處于一種動(dòng)態(tài)平衡中，當(dāng)Th1/Th2平衡失調(diào)并出現(xiàn)Th1或Th2轉(zhuǎn)化時(shí)，稱為Th1/Th2的偏移[12]。研究表明病理狀態(tài)下，如手術(shù)、外傷、腫等，患者一般是向Th2偏移，Th2細(xì)胞因子在患者體內(nèi)處于優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，對(duì)于抗腫瘤免疫和創(chuàng)傷恢復(fù)是非常不利的。

本研究顯示，研究組術(shù)前Th1類細(xì)胞因子IL-2、Th2類細(xì)胞因子IL-4與對(duì)照組Th1類細(xì)胞因子IL-2、Th2類細(xì)胞因子IL-4表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；說明在手術(shù)前，兩組患者指標(biāo)相似，具有可比性。而經(jīng)過兩個(gè)療程的干擾素α2b治療后，研究組Th1類細(xì)胞因子IL-2顯著增高，與對(duì)照組Th1類細(xì)胞因子IL-2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。研究組Th2類細(xì)胞因子IL-4略增高，與對(duì)照組Th2類細(xì)胞因子IL-4比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，代表Th平衡的Th1/Th2(IL-2/IL-4)比值，研究組與對(duì)照組比較明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說明通過干擾素α2b的治療后，患者Th1增高，從而導(dǎo)致Th1/Th2的比值上升，說明整個(gè)機(jī)體Th1/Th2的平衡狀態(tài)是轉(zhuǎn)向Th1，提高機(jī)體的免疫力，保證機(jī)體能夠處于一種良好的抗腫瘤狀態(tài)。

總之，肝癌患者腫瘤切除后，通過干擾素α2b的短期治療，干擾素α2b可以促使Th1類細(xì)胞因子表達(dá)，使Th1/Th2偏向Th1狀態(tài)，有利于腫瘤的治療，也是其提高患者免疫力的作用機(jī)理之一，為今后肝癌手術(shù)后患者的免疫治療提供了一個(gè)新的思路。

[1]邱法波,姜希宏,吳力群.原發(fā)性肝癌病人Th1/Th2的漂移研究[J].中華肝膽外科雜志,2005,11(1)：11-13.

[2]de Bellis A,Bizzarro A,Pivonello R,et al.Prolactin and autoimmunity[J].Pituitary,2005,8(1)：25-30.

[3]張小平,胡 欣,李光明.生長(zhǎng)激素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療肝癌的臨床觀察[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,33(8)：1330-1332.

[4]Lau J,Borjesson A,Holstad M,et al.Prolactin regulation of the expression oTNF-alpha,IFN-gamma and IL-10 by splenocytes in murine multiple low dos streptozotocin diabetes[J].Immunol Lett,2006,102(1)：25-30.

[5]Bashyam H.Th1/Th2cross-regulation and the discovery of IL-10[J].J Exp Med,2007,204(2)：237-243.

[6]Dimitrov S,Lange T,Fehm HL,et al.A regulatory role of prolactin，growth hormone，and corticosteroids for human T-cell production of cytokines[J].Brain Behav Immun,2004,18(4)：368-374.

[7]Plain KM,Boyd R,Verma ND,et al.Transplant tolerance associated with a Th1 response and not broken by IL-4,IL-5,and TGF-beta blockade or Th1 cytokine administration.Transplantation[J].2007,83(6)：764-773.

[8]Nakano T,Araki K,Nakatani H,et al.Effects of geldanamycin and thalidomide on the Th1/Th2cytokine balance in mice subjected to operative trauma.Surgery[J].2007,141(4)：490-500.

[9]Casanueva E,Ripoll C,Meza-Camacho C,et al.Possible interplay between vitamin C deficiency and prolactin in pregnant women with premature rupture o membranes：facts and hypothesis[J].Med Hypotheses,2005,64(2)：241-247.

[10]Jordan WJ,Eskdale J,Srinivas S,et al.Human interferon lambda-(IFN-lambda1/IL-29)modulates the Th1/Th2 response[J].Genes Immun,2007,8(3)：254-261.

[11]Stephensen CB,Borowsky AD,Lloyd KC.Disruption of Rxra gene in thymocytes and T lymphocytes modestly alters lymphocyte frequencies,proliferation,survival and T helper type 1/type 2 balance[J].Immunology,2007,13(4)：112-119.

[12]Fischer R,Tome D,McGhee JR,et al.Th1 and Th2 cells are required for both eosinophil-and neutrophil-associated airway inflammatory responses inmice[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,357(1)：44-49.