郝 燕 蘭會霞

(山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院微免教研室 山西 汾陽 032200;①山西省汾陽醫(yī)院)

HBeAg是一種可溶性的蛋白抗原，多數(shù)學(xué)者認為它是HB-cAg肽鏈被蛋白酶裂解產(chǎn)生的片段，是HBV在體內(nèi)復(fù)制的一個指標(biāo)，臨床醫(yī)生常根據(jù)HBeAg的陰陽性來判斷患者是否具有傳染性，故其臨床意義顯著。因免疫學(xué)中酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)操作簡便快捷，因此在大多數(shù)基層醫(yī)院用其來檢測乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)。該法可以用目測法和酶標(biāo)儀來判斷結(jié)果，本文對這2種方法檢測HBeAg的結(jié)果進行比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清標(biāo)本。(1)標(biāo)本采集對象:樣本主要是在2010年6月之前山西醫(yī)科大學(xué)附屬汾陽醫(yī)院檢驗科采集的乙肝患者的血清，總共133例，均為漢族。(2)標(biāo)本采集方法:用真空采血管(不含抗凝劑)無菌采集患者清晨空腹肘靜脈血3～5mL，盡早分離新鮮血清，為避免反復(fù)凍融，以0.5mL每管分裝于1.5mL凍存管(Eppendorf管，以下簡稱EP管)中，做好標(biāo)記，于－70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 診斷試劑盒和主要儀器 試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司。檢測儀器為美國BIO－RAD 680酶標(biāo)儀。

1.2 操作方法 實驗操作嚴格按試劑盒說明書操作，實驗原理為雙抗體夾心法。

1.2.1 設(shè)置空白對照孔1個、HBeAg陰性對照孔2個、陽性對照2孔，空白孔不加樣品和酶結(jié)合物。陰性對照和陽性對照孔分別加入陰性對照和陽性對照液各50μL，在其它反應(yīng)孔中各加入待檢標(biāo)本50μL。

1.2.2 每孔加入酶結(jié)合物50μL，在反應(yīng)板上加蓋封板膜，振蕩混勻，置37℃溫箱反應(yīng)30分鐘。時間到后棄去反應(yīng)液，每孔加入稀釋后的洗液300μL，靜置10秒，甩棄洗液，重復(fù)5次后拍干。每孔加入底物A、B液各50μL，加蓋封板膜，振蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。每孔加入終止液各50μL，振蕩混勻終止反應(yīng)。

1.2.3 結(jié)果判斷。目測記錄陽性例數(shù)，當(dāng)顯色明顯高于HBeAg陰性對照的檢測孔判為陽性，低于HBeAg陰性參比對照的檢測孔判為陰性。然后上酶標(biāo)儀檢測(事先輸入檢測的程序，設(shè)置好臨界值)，用空白對照孔調(diào)零，450nm測定各孔OD值，打印出結(jié)果，以確定目測法的可靠程度。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 16.0版統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

目測法和酶標(biāo)儀判斷ELISA檢測結(jié)果見表1。經(jīng)χ2檢驗，目測法與常規(guī)ELISA檢測判定結(jié)果無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 酶標(biāo)儀法和目測法判定ELISA檢測結(jié)果的比較

3 討論

ELISA是根據(jù)抗原抗體的特異性反應(yīng)的原理加上酶聯(lián)擴大反應(yīng)信號而設(shè)計的，具有特異性強、靈敏度高、檢出率高等特點。但酶標(biāo)儀價格昂貴，要求操作者有一定的技能[1]，對目前很多偏遠的以及一些基層醫(yī)院是不適用的。因此完全可以用目測法來代替酶標(biāo)儀來判斷HBeAg的陰陽性。但是值得注意的是，ELISA測定中影響因素較多，操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測結(jié)果影響較大[2]，一定要盡量注意操作的規(guī)范，避免假陽性的出現(xiàn)，如:避免使用溶血的標(biāo)本;加樣以及加沖洗液時使用排槍可以避免反應(yīng)時間過長導(dǎo)致的假陽性;加洗滌液時應(yīng)注滿孔但不可外溢;洗板時注意垂直甩洗液;加顯色劑后，應(yīng)按說明書規(guī)定的時間內(nèi)判斷結(jié)果。觀測者應(yīng)注意顏色的對比，可置于白色背景下判斷顏色的深淺，可疑的患者標(biāo)本應(yīng)注意復(fù)查，這樣才能保證檢測結(jié)果的可靠性。

[1]劉 慧，李春富，李菊升，等.目測法與酶標(biāo)儀判斷ELISA檢測旋毛蟲病IgG的結(jié)果比較[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6(7):1177

[2]遲婉利，孔祥民.ELISA檢測乙肝病毒表面抗原假陽性原因分析[J].中國誤診學(xué)雜志，2011，11(9):2050