盛小剛 潘光明 鄭朝陽 賴仁奎 吳 瑜 鄒 旭

廣東省中醫(yī)院（廣東廣州510120）

炎性反應(yīng)是冠狀動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定的主要原因之一，促使急性冠脈綜合征（ACS）發(fā)生和發(fā)展。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為虛滯、瘀阻、毒損絡(luò)脈乃冠心病的基本病理變化。清熱類中藥具有抗菌、抗病毒的作用，并能抑制炎性介質(zhì)的合成和釋放。本研究選擇清熱中藥中5種代表藥物：清熱解毒藥（穿心蓮）、清熱燥濕藥（黃芩）、清熱瀉火藥（知母）、清熱涼血藥（牡丹皮）、清虛熱藥（青蒿），觀察其對ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 動物模型制備6～8周齡ApoE基因缺陷小鼠（品系C57BL/6J）80只，雌雄各半，體質(zhì)量18～20g，飼養(yǎng)條件為2級，室溫保持在 22～24℃，相對濕度 50%，光照時(shí)間 7：00-19：00。 飼以含脂肪21%、膽固醇0.15%的“西方類型膳食”飼料（60Co滅菌照射處理）。13周后，死亡6只，隨機(jī)處死4只，取主動脈，HE染色觀察基礎(chǔ)動脈粥樣硬化程度。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組70只成模小鼠隨機(jī)分成7組，每組10只。對照組予蒸餾水灌胃；中藥治療組再分為5個(gè)亞組，分別予穿心蓮（1560mg/kg）、黃芩（1950mg/kg）、知母（1950mg/kg）、牡丹皮（1950mg/kg）、青蒿（1560mg/kg）灌胃；辛伐他汀組予辛伐他?。?.6mg/kg）灌胃給藥。每日1次，療程共13周。實(shí)驗(yàn)中小鼠共死亡17只。

1.3 觀察指標(biāo)藥物干預(yù)13周后，小鼠處死前禁食12h，2%戊巴比妥鈉經(jīng)腹腔麻醉小鼠。血清學(xué)指標(biāo)及炎性因子測定：眼球摘除法獲得血液標(biāo)本，取血清，用日立7150全自動生物化學(xué)分析儀測定血漿總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）。病理形態(tài)學(xué)觀察：無菌條件下取出心臟和主動脈，10%甲醛固定，脫水，常規(guī)石蠟包埋切片，切片厚5μm，每只鼠的主動脈根部切片均取4個(gè)相同的切面，分別為（1）升主動脈最近端橫截面，切面形態(tài)呈圓形；（2）主動脈瓣附著部位，并有冠狀動脈開口；（3）主動脈瓣起始橫截面；（4）主動脈瓣完全出現(xiàn)并匯合在一起。每間隔100μm取6張，每個(gè)切面取連續(xù)的2張切片分別進(jìn)行HE染色和Masson染色。利用計(jì)算機(jī)圖像分析儀對各個(gè)切面的動脈粥樣硬化斑塊面積進(jìn)行分析、測定斑塊面積、血管橫截面積、脂質(zhì)中心面積、最小纖維帽厚度，計(jì)算校正斑塊面積（斑塊面積/血管橫截面積）及脂質(zhì)中心面積占斑塊面積百分比，每個(gè)標(biāo)本取4張切片的平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以（±s）表示，用SPSS 11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 模型組動脈粥樣硬化斑塊的觀察造模13周小鼠標(biāo)本HE染色顯示主動脈根部已形成粥樣硬化斑塊，內(nèi)膜增厚，內(nèi)皮下見較多的泡沫細(xì)胞和纖維帽形成。實(shí)驗(yàn)26周后病變進(jìn)一步加重，見明顯的粥樣斑塊，泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)核心明顯，纖維帽薄，局部可見巨噬細(xì)胞聚集，血管中膜結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，脂質(zhì)侵蝕，鈣化。

2.2 各組小鼠血脂及hs-CRP測定結(jié)果比較見表1。實(shí)驗(yàn)26周后，對照組和各中藥組血清TC、LDL-C水平明顯升高，各中藥組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平與對照組無明顯差異，但hs-CRP 水平顯著低于對照組（P<0.05 或 0.01）。

表1 各組小鼠血脂水平比較（±s）

表1 各組小鼠血脂水平比較（±s）

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 下同。

hs-CRP（mg/L）對照組 8 9.35±1.54 1.16±0.30 1.01±0.21 6.77±0.44 2.129±0.224穿心蓮組 8 8.77±0.78 1.20±0.28 0.97±0.24 6.30±0.83 1.579±0.329**黃芩組 8 8.52±1.17 1.43±0.32 0.85±0.30 6.50±0.50 1.034±0.347**知母組 7 8.40±1.12 1.21±0.34 0.97±0.22 6.23±0.81 0.938±0.364**牡丹皮組 8 8.93±1.34 1.32±0.31 1.04±0.17 6.17±0.69 1.776±0.320**青蒿組 7 9.32±0.71 1.31±0.36 1.00±0.25 6.48±0.47 1.175±0.317*辛伐他汀組 7 4.36±0.65**0.89±0.20 1.11±0.16 4.98±0.76**0.825±0.150**組 別 n TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）

2.3 各組小鼠主動脈斑塊形態(tài)比較見表2。穿心蓮組、黃芩組的斑塊面積明顯低于對照組，黃芩組、知母組、青蒿組的校正斑塊面積明顯低于對照組，各中藥組脂質(zhì)中心面積明顯低于對照組，穿心蓮組、黃芩組、青蒿組的脂質(zhì)中心在主動脈斑塊中的百分比明顯于對照組；各中藥組的最小纖維帽厚度明顯高于對照組（P<0.05）。

表2 各組小鼠主動脈斑塊形態(tài)比較（±s）

表2 各組小鼠主動脈斑塊形態(tài)比較（±s）

最小纖維帽厚度（μm）對照組 8 87.51±14.88** 154.01±18.78 56.91±8.35** 24.75±4.98 28.37±3.60 15.76±3.26穿心蓮組 8 70.75±15.93** 150.50±16.54 47.43±11.51* 16.52±5.32** 23.16±3.84* 23.68±4.68**黃芩組 8 69.75±11.89** 157.75±19.05 44.27±5.26** 13.46±3.51** 19.34±4.27** 29.12±4.46**知母組 7 73.10±11.86** 155.28±11.90 47.26±8.16** 17.81±2.99** 24.83±5.48 22.61±3.77**牡丹皮組 8 74.88±12.92** 160.38±13.72 47.25±10.53 18.70±4.08* 25.73±5.84 20.75±2.63**青蒿組 7 76.43±10.15** 165.86±9.83 46.31±7.55* 17.41±1.67** 23.24±4.35* 20.39±2.13**辛伐他汀組 7 57.86±13.75** 160.71±19.44 36.77±10.77** 12.07±2.47** 21.74±5.74* 19.22±2.45*組 別 n 斑塊面積（×10-2mm2）原管腔面積（×10-2mm2）斑塊/原管腔面積比（%）脂質(zhì)面積（×10-2mm2）脂質(zhì)/斑塊面積比（%）

3 討 論

冠狀動脈粥樣斑塊的產(chǎn)生是一個(gè)長期漸進(jìn)的病理過程，但ACS的發(fā)病是突然的，“熱毒”是ACS發(fā)作的重要誘因。熱毒系臟腑功能和氣血運(yùn)行失常使機(jī)體內(nèi)的生理產(chǎn)物或病理產(chǎn)物不能及時(shí)排出，蘊(yùn)積體內(nèi)化生而成，痰瘀互結(jié)，久郁化熱，這種病理產(chǎn)物“熱毒”也正是在此過程中產(chǎn)生并積累起來，其作用于人體進(jìn)而加重病情［1］。虛滯、瘀阻、毒損絡(luò)脈乃冠心病的基本病理變化。外毒內(nèi)侵致病說早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就已提出，如《素問·痹論》有“脈痹不已，復(fù)感于邪，內(nèi)舍于心，發(fā)為心痹”和“邪在心，則病心痛”的記載。宋《圣濟(jì)總錄》指出，“其久心痛者，是心之別絡(luò)，為風(fēng)邪冷熱所乘痛也”，闡明風(fēng)寒風(fēng)熱等外邪皆可致病?？偨Y(jié)歷代醫(yī)家文獻(xiàn)，綜合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究成果，可認(rèn)為ACS的炎癥發(fā)應(yīng)，相當(dāng)于中醫(yī)外邪人心，稽留不去，擾心侵脈；或痰瘀膠結(jié)，壅阻脈絡(luò)成毒，毒邪擾心。不管是外毒還是內(nèi)毒，最終都會誘發(fā)心脈痹阻而致胸痛發(fā)作。

目前認(rèn)為炎性反應(yīng)是ACS發(fā)生和加重的重要原因，清熱類中藥在臨床實(shí)踐中大量應(yīng)用于抗感染性炎性并取得了良好的療效。研究表明清熱中藥具有抗菌、抗病毒的作用，而且對復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)可進(jìn)行精密協(xié)調(diào)，由此抑制炎性介質(zhì)的合成和釋放，調(diào)節(jié)炎性因子如腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素（IL）、血小板活化因子（PAF）、干擾素（IFN）及子一氧化氮等的分泌，改善炎性和組織損傷［2］。目前中醫(yī)藥界學(xué)者正就中醫(yī)藥對ACS的炎性反應(yīng)干預(yù)進(jìn)行探討［3］，研究發(fā)現(xiàn)多種清熱中藥如穿心蓮、黃芩、知母、牡丹皮、青蒿具有心血管系統(tǒng)藥理作用，起到調(diào)脂、抗心肌缺血、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、抗動脈粥樣硬化等作用［4-6］。在臨床實(shí)踐中，在常規(guī)益氣活血化痰法中加入清熱類中藥治療冠心病不穩(wěn)定型心絞痛取得良好療效，血清炎性指標(biāo)CRP、IL-6、TNF-α等降低，表明清熱化痰活血法治療不穩(wěn)定型心絞痛對炎性反應(yīng)有抑制作用，通過抗炎及抗氧自由基作用，防止炎性造成的血管內(nèi)皮功能失常，從而抑制患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)，下調(diào)各項(xiàng)炎癥因子以及改善心肌缺血缺氧并穩(wěn)定冠狀動脈粥樣斑塊；其能改善不穩(wěn)定型心絞痛患者的近期預(yù)后可能主要是通過控制急性炎性反應(yīng)而達(dá)到的［7-8］。

本研究中以ApoE基因缺陷小鼠建立動脈粥樣硬化模型成功，病理觀察見明顯不穩(wěn)定斑塊存在，且hs-CRP明顯升高，而所有中藥組治療后hs-CRP水平較對照組明顯降低。各中藥組斑塊結(jié)構(gòu)較對照組有明顯變化，與對照組比較，穿心蓮組、黃芩組的斑塊面積明顯減少，黃芩組、知母組、青蒿組的校正斑塊面積顯著降低，各中藥組脂質(zhì)中心面積也明顯減少，穿心蓮組、黃芩組、青蒿組的脂質(zhì)中心在斑塊中的百分比明顯降低，各中藥組的最小纖維帽厚度明顯增厚，表明上述清熱中藥能改善動脈粥樣硬化斑塊結(jié)構(gòu)，減少不穩(wěn)定的脂質(zhì)中心面積，增加纖維帽厚度，使斑塊更趨于穩(wěn)定。有研究認(rèn)為清熱解毒類中藥可以通過調(diào)節(jié)血脂、拮抗內(nèi)皮素、抑制平滑肌細(xì)胞增殖和抑制血小板聚集來對抗動脈粥樣硬化［9］。本研究中各中藥組的血脂水平與對照組并無差異，但hs-CRP水平明顯降低，考慮其改善斑塊的作用機(jī)制可能與減輕斑塊內(nèi)炎性反應(yīng)有關(guān)，尚待進(jìn)一步探討。

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