王麗娟

（湖南省邵陽市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 湖南邵陽 422000）

腸桿菌科細(xì)菌包括一大群生物性狀相似的革蘭陰性無芽胞桿菌,其中部分為致病菌,如:沙門菌屬、志賀菌屬等。腸桿菌科的分類主要根據(jù)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造,按照Bergery分類法,分為5個族、12個屬。臨床上常采用抗生素濃度梯度法(E-test法)結(jié)合K-B法藥敏試驗,根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)文件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行抗生素敏感性判斷[1]。我院以伯杰細(xì)菌鑒定手冊[2]為參考,以腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)陽性概率為依據(jù)并結(jié)合編碼技術(shù)[3],準(zhǔn)確、快速、方便地鑒定腸桿菌科細(xì)菌,下面就此系統(tǒng)分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

菌種以臨床標(biāo)本中分離的腸桿菌科細(xì)菌120株,以聚苯乙烯塑料板孔容量0.4mL)、胰蛋白胨、蛋白月示、酵母粉為材料及原料。

1.2 方法

1.2.1 生化反應(yīng)項目組合 大部分由生物堿、苷和糖組成,為苯丙氨酸(PD)、V—P、吲哚(IND)、精氨酸(ADH)、賴氨酸(IDC)、鳥氨酸(ODC)、尿素(uRE)、丙二酸鹽(MAI)、七葉苷(ESC)、甘露醇(MAN)、山梨醇(SOR)、肌醇(IN0)、側(cè)金盞花醇(AD0)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)等20項組成。

1.2.2 生化基質(zhì)配方 結(jié)合經(jīng)典配方及原料來源、反應(yīng)速度、穩(wěn)定性、顏色對比度等因素,采用正交試驗的矩陣方法研制,部分生化基質(zhì)配方如下:V－P:酵母粉1g、丙酮酸鈉0.5g、葡萄糖10g、肌酸0.5g、氯化錳25mg、pH6.0、PD酵母粉0.5g,I－苯丙氨酸1g,pH8.4。

1.2.3 制備鑒定條 上述20種生化基質(zhì)配制后進(jìn)行115℃15min滅菌,分別加入聚苯乙烯板中,葡萄糖和硝酸鹽為復(fù)合配方合用一孔,置于50℃干燥箱中脫水制干,封口4℃貯存。

1.3 性能檢測

采用雙盲法,用本系統(tǒng)和API同時鑒定120株臨床菌株,以檢測本系統(tǒng)鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。用已知典型生化反應(yīng)的腸桿菌、肺炎克雷伯菌、宋內(nèi)志賀菌,每株重復(fù)鑒定30次,驗證其重復(fù)性及標(biāo)本間差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用卡方進(jìn)行檢驗,且以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果(表1）

由表1得出:本系統(tǒng)與API兩種方法鑒定至屬水平的符合率為95%,經(jīng)檢驗兩者間無顯著性差異(P>0.05)（表2）。

表1 2種方法鑒定120株臨床菌株結(jié)果

表2 11株標(biāo)準(zhǔn)菌株在不同時間檢測結(jié)果的符合率

由表2得出:將11株標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于本系統(tǒng),8～24h的觀察結(jié)果符合率為92.4%～98.6%。

3 討論

腸桿菌科細(xì)菌為革蘭陰性桿菌,兩端鈍圓,無芽胞。為需氧和兼性厭氧菌,營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好。不同菌屬的生化反應(yīng)甚不一致,可作為腸桿菌科細(xì)菌鑒定的依據(jù)之一。

細(xì)菌鑒定的準(zhǔn)確是臨床治療的依據(jù)。以往的方法多操作復(fù)雜、時間長。我院自制的本生化鑒定系統(tǒng),充分考慮到材料來源、鑒定價值、基質(zhì)穩(wěn)定性這幾項因素,并結(jié)合反應(yīng)速度、穩(wěn)定性、顏色對比度等內(nèi)容。本組數(shù)據(jù)中,11株標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于本系統(tǒng),8～24h的觀察結(jié)果符合率為92.4%～98.6%。本系統(tǒng)鑒定至屬水平符合率為95%。

實踐得出,該方法操作簡便、反應(yīng)速度快、容易判定。本技術(shù)關(guān)鍵在于鑒定條制備,將生化基質(zhì)置聚苯乙烯條中低溫脫水制干,使用時只需加入菌液,操作方便。為了生化反應(yīng)的穩(wěn)定性,在精氨酸、賴氨酸、尿液基質(zhì)配方中加入了少量葡萄糖防止其它原因使基質(zhì)分解而產(chǎn)生假陽性。

綜上,新研制系統(tǒng)鑒定腸桿菌科細(xì)菌快速、簡單,能很好的為臨床提供準(zhǔn)確實驗依據(jù)。

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testin[S].Wayne PA:National Committee for Clinical Laboratory Standards,2001,M100～S11.

[2]趙貴明,陳彥長,李瑾.腸桿菌科細(xì)菌微量快速生化鑒定系統(tǒng)的研制[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004,14(2):142～144.

[3]王禮文,張莉,張立.革蘭陰性細(xì)菌編碼系統(tǒng)(GN-27)對腸桿菌科細(xì)菌的鑒定評價[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(6):679～681.