張恩戶 張琪 胡銳

中醫(yī)認(rèn)為，元氣、宗氣、腎氣等是維持機體生命活動的主要物質(zhì)，氣虛可導(dǎo)致機體的臟腑功能減退。補氣藥具有補五臟，安精神，長肌肉，耐寒暑，久服輕身延年之功效?，F(xiàn)代研究表明，抗氧化劑能清除自由基而延緩衰老。為此，筆者以補氣藥為對象，通過文獻(xiàn)查閱、歸納、整理，參考衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》，擬定了中藥抗氧化作用的評定標(biāo)準(zhǔn)，對其延緩衰老之抗氧化機制進(jìn)行文獻(xiàn)再評價，以明確其作用的可靠性。

1 延緩衰老之抗氧化機制及其評價方法

衰老即生命周期中隨時間進(jìn)展而表現(xiàn)出功能不斷惡化，直到死亡的過程。目前有很多關(guān)于衰老機制的學(xué)說[1]。其中，受到人們普遍關(guān)注的自由基學(xué)說認(rèn)為，引起人類衰老的主要原因是：細(xì)胞在代謝過程中不斷產(chǎn)生自由基(free radical，F(xiàn)R)。自由基是單獨存在的、具有不配對電子的離子、原子、分子基團[2]。該物質(zhì)具有兩面性，適量自由基能介導(dǎo)正常細(xì)胞分化增殖，但當(dāng)氧和體內(nèi)某些物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成過多的氧自由基，則會引起生物膜的脂類過氧化，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)損傷和功能失活，出現(xiàn)衰老癥狀。自由基反應(yīng)誘發(fā)脂質(zhì)過氧化，生成過氧化脂質(zhì)(LPO)，繼而分解產(chǎn)生丙二醛(MDA)與脂褐素(LF)，存在于腦、心、肝、表皮組織中[3]。體內(nèi)自由基生成量與年齡呈正相關(guān)，即脂質(zhì)過氧化隨年齡增加而增高，而清除自由基系統(tǒng)的功能則逐漸減弱。

為避免自由基產(chǎn)生過多，人體內(nèi)存在著清除酶系，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)等。SOD廣泛存在于血液和組織中，能促使超氧陰離子自由基(O2·)變?yōu)檫^氧化氫(H2O2)和氧分子，進(jìn)而被清除，使機體和細(xì)胞免受損害。GSH-Px主要分布在肝臟、胃腸、睪丸等組織，以肝中含量最高，是一種含硒的清除自由基并抑制自由基反應(yīng)的酶系，可清除O2·，H2O2和羥自由基(·OH)。自由基清除酶隨著機體衰老而減少，是衰老和生命活力降低的定量指標(biāo)。

因此，以藥物清除自由基、抗氧化是延緩衰老的重要途徑之一，評價的實驗方法是觀察藥物對老齡鼠、快速老化小鼠或D-半乳糖、臭氧(O3)、去胸腺等衰老動物模型的組織或血中的抗氧化酶如SOD、GSH-Px、CAT等和過氧化代謝產(chǎn)物如LPO、MDA、LF等的影響，評價其延緩衰老之抗氧化機制。

2 再評價方法

2.1 文獻(xiàn)收集與整理

以新世紀(jì)全國高等中醫(yī)院校規(guī)劃教材《中藥學(xué)》[4]記載的補氣藥(人參、黃芪、絞股藍(lán)、紅景天、沙棘、刺五加、白術(shù)、甘草、山藥、太子參、大棗、黨參)為對象，查閱1979～2009年間有關(guān)實驗性研究文獻(xiàn)，以中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫(www.cnki.net)數(shù)據(jù)庫為主，其他數(shù)據(jù)庫為輔進(jìn)行檢索、查閱。研讀文獻(xiàn)，摘錄相關(guān)信息并歸納入《文獻(xiàn)再評價信息表》，信息表內(nèi)容包括供試藥制備、給藥途徑與劑量、動物品系、實驗方法、陽性藥結(jié)果、實驗結(jié)果與結(jié)論、作者及工作單位，刊物與發(fā)表年代等信息。

2.2 中藥抗氧化機制的評定標(biāo)準(zhǔn)

參考《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的抗氧化功能檢驗方法，以及中藥藥理作用研究應(yīng)符合綜合評價和重復(fù)性等原則，制訂中藥抗氧化機制的評定標(biāo)準(zhǔn)為：應(yīng)選用老齡鼠、D-半乳糖模型、輻照模型等，測定血、腦、肝、心等組織(不少于2種)的上述抗自由基相關(guān)酶和老化代謝產(chǎn)物如SOD、GSH-Px、MDA、LF等指標(biāo)中的3項以上(包括3項)；每種衰老模型及觀察指標(biāo)應(yīng)由不同實驗人員進(jìn)行2次以上(包括2次)重復(fù)性實驗，結(jié)果均有效。凡符合上述標(biāo)準(zhǔn)者，即可判定為具有抗氧化作用。

3 結(jié)果

驗證補氣藥抗氧化作用，使用老齡鼠、D-半乳糖模型以及輻照、氫化可的松、氟哌啶醇、去卵巢等模型。相關(guān)文獻(xiàn)統(tǒng)計結(jié)果見表1。文獻(xiàn)以測定學(xué)和組織中SOD、GSH-Px等自由基相關(guān)酶及MDA、LF、LPO等過氧化代謝產(chǎn)物等手段來驗證補氣藥的抗氧化作用。相關(guān)文獻(xiàn)統(tǒng)計結(jié)果見表2～6。

表1 驗證抗氧化作用使用了不同動物模型的文獻(xiàn)篇數(shù)

表2 測定血和組織中SOD來驗證抗氧化作用的文獻(xiàn)篇數(shù)

表3 測定血和組織中GSH-Px來驗證抗氧化作用的文獻(xiàn)篇數(shù)

表4 測定血和組織中MDA來驗證抗氧化作用的文獻(xiàn)篇數(shù)

表5 測定血和組織中LF來驗證抗氧化作用的文獻(xiàn)篇數(shù)

表6 測定血和組織中LPO來驗證抗氧化作用的文獻(xiàn)篇數(shù)

4 小結(jié)

結(jié)果表明，人參、黃芪、絞股藍(lán)、紅景天抗氧化作用的研究文獻(xiàn)均超過10篇[5-12]，各項指標(biāo)測定次數(shù)較多，且結(jié)果有效，說明上述4味中藥研究較為充分，抗氧化作用較為肯定；沙棘、刺五加文獻(xiàn)數(shù)雖少，但也符合本文所定之標(biāo)準(zhǔn)，故認(rèn)為其具有抗氧化作用[13,14]；白術(shù)、甘草、山藥、太子參、大棗、黨參文獻(xiàn)資料較少，動物模型或?qū)嶒炛笜?biāo)不符合再評價標(biāo)準(zhǔn)[15-20]，尚需進(jìn)一步研究，以證實其有無抗氧化作用。機體氧化是多因素綜合作用的結(jié)果，機體中的血可以代表全身狀態(tài)，腦為最早衰老的器官，肝則是最晚衰老的器官，在上述的實驗研究中，對血的相關(guān)測定約占32%，主要組織中，腦組織的測定約占27%，肝組織的測定約占20%。

總體來看，各實驗研究對自由基相關(guān)酶和老化代謝產(chǎn)物測定部位的選擇是可行的，并且兼顧其它，有力地說明了藥物對實驗動物作用的整體效果。文獻(xiàn)中所測定的各項指標(biāo)也符合評價要求。不足在于有些文獻(xiàn)選取指標(biāo)過少，只憑借一、兩種檢測指標(biāo)而得出結(jié)論，不夠全面，缺乏重復(fù)性和氧化機制的深入研究；有些文獻(xiàn)之間的實驗結(jié)果存在不同之處，可能與動物模型標(biāo)準(zhǔn)不盡相同，藥物劑量相差過多，無統(tǒng)一規(guī)范所致。故有必要規(guī)范中藥抗氧化作用的評價方法，如實驗方法、供試藥制備、給藥途徑、重復(fù)次數(shù)等等。因此，本文歸納、整合了各文獻(xiàn)的實驗數(shù)據(jù)，明確具有抗氧化作用的藥物均為：不同實驗人員對3項以上(含)檢測指標(biāo)，進(jìn)行2次以上(含)的重復(fù)實驗，結(jié)果可靠。

從已有81篇文獻(xiàn)來看，補氣藥抗氧化作用機理的研究還比較孤立和分散，缺乏系統(tǒng)的綜合研究。在本文研究中，制定的抗氧化評定標(biāo)準(zhǔn)可行，可操作性強。此外，通過對既往實驗的歸納、整理，本文發(fā)現(xiàn)了科研實驗項目中的空白之處，對今后的實驗選題具有指導(dǎo)意義。

隨著人類生活水平的提高，人們對于如何延長生命更加關(guān)注。自1956年，Harman提出自由基學(xué)說以來，抗氧化已成為延緩衰老的一個重要部分。作為中醫(yī)藥工作者，利用現(xiàn)有資源，研究傳統(tǒng)中藥的藥理作用，開發(fā)廉價、有效的抗氧化新藥是研究的主要方向。中藥品種繁多，單品成分復(fù)雜，復(fù)方組成多樣，有著非常廣泛的研究領(lǐng)域和深遠(yuǎn)的發(fā)展前景。運用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，結(jié)合中醫(yī)傳統(tǒng)理論，挖掘中藥新功用，在嚴(yán)格的實驗檢測標(biāo)準(zhǔn)下，進(jìn)行中藥抗氧化機制的研究，以期獲得國際認(rèn)可，使中藥真正走向世界。

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