茍顯娜，彭成，王忠，劉建林

記憶障礙(Impaired Memory)，指?jìng)€(gè)人處于一種不能記住或回憶信息或技能的狀態(tài)，有可能是由于病理生理性的或情境性的原因引起的永久性或暫時(shí)性的記憶障礙。

腦絡(luò)舒寧膠囊是王永炎院士提出的臨床應(yīng)用的有效方，由女貞子、墨旱蓮等中藥組成，具有滋腎平肝、理氣活絡(luò)的功效。本文通過制作經(jīng)典記憶障礙動(dòng)物模型，探討腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)缺失障礙動(dòng)物模型的智力影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，普通級(jí)，雌雄各半，體重（240±20）g；昆明種小鼠，普通級(jí)，雌雄各半，體重18～22g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（川）2008-11。

1.2 藥品與試劑

受試藥物 腦絡(luò)舒寧膠囊浸膏粉，由北京陽光合和中醫(yī)藥科技有限公司提供。批號(hào)：100401；浸膏粉1 g相當(dāng)于原生藥3.833 g。試驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，試驗(yàn)前用蒸餾水分別配制成0.067 gmL-1、0.133 gmL-1、0.266 gmL-1藥液備用。陽性藥物：甲磺酸雙氫麥角毒堿片（喜得鎮(zhèn)），由天津華津制藥廠和瑞士諾華制藥有限公司聯(lián)合生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：9J856T。規(guī)格：1 mg/片。用蒸餾水配制成0.2 mgmL-1藥液，4℃冷藏備用。

造模藥物 氫溴酸東莨菪堿，由SIGMA公司生產(chǎn)，批號(hào)：648K1200；臨用時(shí)用0.9%生理鹽水配成0.5 mgmL-1溶液備用。亞硝酸鈉，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20070717，臨用時(shí)用0.9%生理鹽水配成6 mgmL-1備用。環(huán)己酰亞胺，由SIGMA公司生產(chǎn)，批號(hào)030M1524，臨用時(shí)用0.9%生理鹽水配成6 mgmL-1藥液備用。酒精，75%酒精，由成都蜀都實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)20100402，臨用時(shí)配成40%的藥液，備用。

1.3 主要儀器

YLS-3TB小鼠跳臺(tái)儀；MT-200Morris型水迷宮跟蹤分析系統(tǒng)；BA-200自動(dòng)避暗測(cè)試儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠、小鼠記憶獲得障礙試驗(yàn)

取健康、合格普通級(jí)SD大鼠60只，按體重隨機(jī)分為空白組、模型對(duì)照組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組；取健康、合格普通級(jí)KM小鼠72只，分組方法同上。喜得鎮(zhèn)組及腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相對(duì)應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，SD大鼠連續(xù)灌胃30 d；小鼠連續(xù)灌胃14 d。末次給藥后1 h，除空白組外，其他各組大鼠腹腔注射氫溴酸東莨菪堿5 mgkg-1，造成記憶獲得障礙模型[1]，對(duì)照組注射等體積生理鹽水。造模20 min后用跳臺(tái)法進(jìn)行訓(xùn)練，記錄大鼠從平臺(tái)跳下的潛伏期和5 min內(nèi)跳下次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)）作為記憶指標(biāo)。

2.2 大鼠記憶鞏固障礙試驗(yàn)

亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型：取健康、合格SD大鼠66只，按體重隨機(jī)分為空白組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組；取健康、合格SD大鼠60只，分組方法同上。喜得鎮(zhèn)組和腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，分別連續(xù)灌胃21 d和14 d。亞硝酸鈉：在給藥的第17d，用MT-200 Morris水迷宮跟蹤分析系統(tǒng)行定位航行訓(xùn)練[2]，末次訓(xùn)練結(jié)束后，除空白組外，各組動(dòng)物立即一次性腹腔注射亞硝酸鈉120 mgkg-1，造成記憶鞏固障礙模型；空白組注射等體積生理鹽水。24 h后進(jìn)行定位航行測(cè)試，于定位航行試驗(yàn)結(jié)束24 h后，進(jìn)行空間搜索測(cè)試。環(huán)己酰亞胺所致記憶鞏固障礙模型：末次訓(xùn)練結(jié)束后，除空白組外，其他各組大鼠立即腹腔注射環(huán)己酰亞胺120 mgkg-1，造成記憶鞏固障礙模型，空白組注射等體積生理鹽水。造模24 h后，用跳臺(tái)法進(jìn)行測(cè)試，記錄大鼠跳臺(tái)潛伏期和5 min內(nèi)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。

2.3 小鼠記憶再現(xiàn)缺失障礙試驗(yàn)

取健康、合格昆明種小鼠66只，按體重隨機(jī)分為空白組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組。喜得鎮(zhèn)組及腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相對(duì)應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)灌胃14 d。末次給藥24 h后，除空白組外，其它各組灌胃40%的酒精10 mLkg-1，造成記憶再現(xiàn)缺失模型[5]，空白組灌胃等體積蒸餾水。造模20 min后進(jìn)行避暗測(cè)試，記錄小鼠的錯(cuò)誤潛伏期和5 min內(nèi)從明區(qū)到暗區(qū)的錯(cuò)誤次數(shù)。

2.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

以上數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包建立實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行分析，以（x±SD）表示各定量指標(biāo)的平均值和分散程度。多樣本均數(shù)的比較采用oneway ANOVA分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)大鼠、小鼠記憶獲得障礙的影響

經(jīng)訓(xùn)練，大鼠跳臺(tái)潛伏期均達(dá)標(biāo)；小鼠跳臺(tái)淘汰1只動(dòng)物。與空白組比較，模型對(duì)照組大鼠、小鼠潛伏期明顯縮短，觸電錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表1、2。

表1 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)東莨菪堿致記憶獲得障礙大鼠的影響(x±SD)

表2 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠跳臺(tái)法測(cè)試的影響(x±SD)

注：與空白組比較，△△P <0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.2 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)大鼠記憶鞏固障礙的影響

3.2.1 對(duì)大鼠亞硝酸鈉致記憶鞏固障礙模型的影響 經(jīng)訓(xùn)練，從喜得鎮(zhèn)組和腦絡(luò)舒寧膠囊中劑量組淘汰有明顯認(rèn)知障礙的大鼠2只，其余大鼠進(jìn)入正常試驗(yàn)。結(jié)果：定位航行測(cè)試：模型對(duì)照組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，到達(dá)平臺(tái)的總路程明顯增加，同時(shí)在第二象限的距離明顯增加，與空白組比較具有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）?？臻g搜索測(cè)試：與空白組比較，模型對(duì)照組平臺(tái)停留時(shí)間明顯縮短，有效區(qū)停留距離明顯縮短，經(jīng)過平臺(tái)的次數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表3、4。

表3 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)亞硝酸鈉記憶鞏固障礙大鼠定位航行測(cè)試的影響 （x±SD）

表4 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)亞硝酸鈉記憶鞏固障礙大鼠空間搜索測(cè)試的影響 （x±SD）

3.2.2 對(duì)大鼠環(huán)己酰亞胺致記憶鞏固障礙模型的影響 經(jīng)訓(xùn)練，所有動(dòng)物均達(dá)標(biāo)。與空白組比較，模型對(duì)照組大鼠潛伏期明顯縮短，觸電錯(cuò)誤次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表5。

表5 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)環(huán)己酰亞胺記憶鞏固障礙大鼠跳臺(tái)法測(cè)試的影響 （x±SD）

3.3 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)小鼠記憶再現(xiàn)缺失障礙的影響

經(jīng)訓(xùn)練，腦絡(luò)舒寧膠囊中劑量組1只動(dòng)物不達(dá)標(biāo)被淘汰。經(jīng)灌胃40%酒精后，模型對(duì)照組小鼠避暗潛伏期明顯縮短，5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，與空白組比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)果詳見表6。

表6 腦絡(luò)舒寧膠囊對(duì)酒精致記憶再現(xiàn)缺失小鼠避暗測(cè)試的影響（x±SD）

4 討論及結(jié)論

學(xué)習(xí)和記憶是動(dòng)物和人類賴以生存的重要腦功能。記憶，是使貯存于腦內(nèi)的信息復(fù)呈于意識(shí)中的功能，是保存和回憶以往經(jīng)驗(yàn)的過程。人類的記憶是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過程，有三個(gè)基本過程：即獲得、鞏固、再現(xiàn)[3]。東莨菪堿是M-膽堿受體阻斷劑，能特異性阻抑信息由第1級(jí)記憶向第2級(jí)記憶的轉(zhuǎn)移過程，從而干擾獲得近期記憶的能力，制造的記憶障礙模型屬于記憶獲得性障礙[4]。腦組織的缺血缺氧會(huì)嚴(yán)重影響動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶功能，亞硝酸鈉為致缺氧劑，它可使血液中的低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，失去運(yùn)輸氧的能力而導(dǎo)致組織缺氧，進(jìn)而引起腦組織缺血缺氧，損害學(xué)習(xí)和記憶過程。蛋白質(zhì)合成是長(zhǎng)期記憶的內(nèi)在基礎(chǔ)，在學(xué)習(xí)過程中形成的新蛋白質(zhì)是記憶的存貯分子，反之，抑制蛋白質(zhì)合成40%即能引起遺忘[5]；環(huán)己酰亞胺作為蛋白抑制劑能明顯損害動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力。乙醇作為中樞抑制劑，較低濃度下（40%）即可明顯破壞記憶過程，而對(duì)中樞和一般運(yùn)動(dòng)功能無明顯影響[5]。本試驗(yàn)在用上述藥物造模后，模型組大、小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯弱于正常組，說明本試驗(yàn)的造模方法是可取的，造模是成功的。

腦絡(luò)舒寧膠囊是王永炎院士提出的臨床應(yīng)用的有效方，由女貞子、墨旱蓮等中藥組成，具有滋腎平肝、理氣活絡(luò)的功效。本試驗(yàn)中，腦絡(luò)舒寧膠囊能夠顯著延長(zhǎng)記憶獲得障礙大、小鼠的跳臺(tái)潛伏期，減少5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；明顯縮短亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙大鼠定位航行測(cè)試的逃避潛伏期，縮短到達(dá)平臺(tái)的總路程，增加空間搜索測(cè)試2min內(nèi)經(jīng)過平臺(tái)次數(shù)和有效區(qū)停留距離，延長(zhǎng)平臺(tái)停留時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；顯著延長(zhǎng)環(huán)己酰亞胺所致記憶障礙大鼠的跳臺(tái)潛伏期和減少5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；明顯延長(zhǎng)記憶再現(xiàn)缺失小鼠潛伏期和5min內(nèi)進(jìn)入暗區(qū)的錯(cuò)誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。以上結(jié)果提示：腦絡(luò)舒寧膠囊可能具有膽堿能樣作用，改善腦部缺血缺氧，改善中樞抑制以及增加腦內(nèi)蛋白質(zhì)合成，從而發(fā)揮其益智作用。結(jié)論：腦絡(luò)舒寧膠囊具有較好的益智作用。

[1] 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:826.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:739.

[3] 曾錦旗,董為偉.記憶障礙動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代康復(fù),2001,5(10):74.

[4] 鄒宇曉,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對(duì)記憶障礙 模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2010,10(1):28.

[5] 陳玉興,周瑞玲,崔景朝,等.益智湯對(duì)三種化學(xué)藥品所致小鼠記憶損傷的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2006,12(1):43.