王素軍，阮金秀，張振清，張有志，于能江，王桂香，莫李立

(1.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院藥理系，廣東廣州 510006;2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，北京 100850)

抗抑郁作用經(jīng)典古方小補(bǔ)心湯由代赭石、旋復(fù)花、竹葉和淡豆豉4味中藥組成，含有大量的黃酮類化合物。張有志等［1－2］研究結(jié)果表明，小補(bǔ)心湯乙醇提取物總黃酮(BX-2)具有良好的抗抑郁活性，且BX-2抗抑郁作用的效價(jià)強(qiáng)度比小補(bǔ)心湯明顯提高，由于BX-2所含成分多，含量低，目前動(dòng)物體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)研究無(wú)法開(kāi)展，為了研究其體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)嘗試用大鼠原位腸肝循環(huán)灌流模型對(duì)BX-2的體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行初步研究。

1 材料與方法

1.1儀器和試劑Agilent 1100 LC/MS，小補(bǔ)心湯總黃酮和13個(gè)黃酮單體(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院植化室于能江博士提供，HPLC含量＞98%)，甲醇、乙腈(Fisher公司，色譜純)。

1.2大鼠原位腸-肝血管灌流模型和給藥方案參照我們過(guò)去建立的模型條件稍加改進(jìn)［3］，灌流液中含5%牛血清白蛋白。♂性SPF級(jí)SD大鼠5只，體質(zhì)量(200±20)g。BX-2以5%二甲亞砜配制成0.2 g·ml－1，每只大鼠十二指腸給藥1 ml，即 0.2 g BX-2/只大鼠。

1.3樣品采集與處理與文獻(xiàn)報(bào)道的方法相同［3］。

1.4分析測(cè)定條件Agilent 1100 LC/MS，Intersil C8-3色譜柱(250 mm ×2.1 mm，5 μm)，流動(dòng)相為5 mmol·L－1甲酸銨水溶液(A)－乙腈(B)，梯度洗脫，乙腈(B)梯度:0～10 min，20% ～25%;10～15 min，25% ～40%;15～20 min，40% ～55%;20～25 min，55% ～20%;25～40 min，20% ～20%。流速 0.2 ml·min－1，質(zhì)譜檢測(cè)條件與文獻(xiàn)報(bào)道相同［3］。

1.5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用±s表示，吸收程度=化合物進(jìn)入灌流液中量/化合物腸道給量×100%。

2 結(jié)果

2.1色譜及質(zhì)譜條件采用選擇性離子檢測(cè)(SIM)，檢測(cè)離子為負(fù)離子，方法的專屬性強(qiáng)，靈敏度高，灌流液中雜質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定，檢測(cè)離子和色譜保留時(shí)間見(jiàn)Tab 1。

Tab 1 SIM，retention time，contents and absorption extent of 13 flavonoids in BX-2(n=5)

2.213個(gè)黃酮類化合物在BX-2中的含量及灌流2 h后于大鼠腸道的吸收程度BX-2大鼠十二指腸給藥后2 h，13個(gè)黃酮類化合物在灌流液中檢測(cè)到8個(gè)化合物，他們的含量、吸收量和吸收程度，見(jiàn)Tab 1。

3 討論

許多試驗(yàn)研究表明［4－5］，一些天然的黃酮類化合物具有明顯的抗抑郁作用。BX-2給藥后，4號(hào)化合物吸收程度最高(44.8%)，11號(hào)化合物為4號(hào)化合物的吡喃葡萄糖苷，在灌流液中未被發(fā)現(xiàn)，其可能轉(zhuǎn)化為4號(hào)化合物而吸收;10號(hào)化合物在黃酮苷類化合物中吸收較好(11.1%)，與文獻(xiàn)報(bào)道相似［6］，其在腸道較穩(wěn)定，更容易以苷的形式吸收?？傊?，灌流液中發(fā)現(xiàn)的8 個(gè)黃酮類化合物(1、2、3、4、5、6、8、10 號(hào))的藥理活性值得深入研究。另外，本文BX-2采用十二指腸給藥，未考慮胃液影響，各個(gè)化合物的真實(shí)吸收程度尚需要結(jié)合體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的初步研究認(rèn)為大鼠原位腸-肝灌流模型是研究中藥尤其是中藥復(fù)方吸收的一個(gè)較為理想的工具。

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