韓冰 鄧凱 張日俊

植物乳酸桿菌是定植于動(dòng)物腸道的益生菌群之一[1]，是保護(hù)動(dòng)物腸道的天然屏障[2]。目前，已發(fā)現(xiàn)的植物乳酸桿菌廣泛存在于各種環(huán)境中，比如蔬菜、水果、啤酒、肉制品、作物等。像其他乳酸菌一樣，植物乳酸桿菌也能產(chǎn)生乳酸、細(xì)菌素及其它代謝產(chǎn)物。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的一些植物乳酸桿菌細(xì)菌素，對(duì)食品中的腐敗菌——單核李斯特氏菌有很好的抑制作用[3－4]，但是通常抑菌譜較窄。本研究中提到的由植物乳桿菌YJG產(chǎn)生的細(xì)菌素，與以前發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌細(xì)菌素相比，抑菌范圍明顯擴(kuò)大，對(duì)一些動(dòng)物腸道致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌有較好的抑菌作用，基于這方面的考慮，將其作為飼料添加劑，添加到蛋雞飼料中，研究其對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能等方面的影響，為飼料添加劑的開(kāi)發(fā)提供了新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株 YJG是由本實(shí)驗(yàn)室從健康雞腸道分離，并通過(guò)生理和16S rRNA鑒定為植物乳酸桿菌，于－20℃保存。

1.2 方法

1.2.1 發(fā)酵液的制備

植物乳酸桿菌YJG于37℃培養(yǎng)48 h,離心(12000×g，10 min)，保留上清液。

1.2.2 發(fā)酵上清液活性測(cè)定

發(fā)酵上清液活性用瓊脂擴(kuò)散法來(lái)測(cè)定。上述發(fā)酵上清液用NaOH調(diào)pH值至4。用二倍稀釋法測(cè)定上清液效價(jià)[5]。

1.2.3 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)選用232日齡的產(chǎn)蛋率、體重相近，健康狀況良好的海蘭灰蛋雞225只，采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)共分5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9只雞，預(yù)試期10 d，正試期24 d。試驗(yàn)組1為基礎(chǔ)日糧，即對(duì)照組；試驗(yàn)組2為每千克基礎(chǔ)日糧中添加500 AU植物乳酸桿菌細(xì)菌素；試驗(yàn)組3為每千克基礎(chǔ)日糧中添加1500 AU植物乳酸桿菌細(xì)菌素；試驗(yàn)組4為每千克基礎(chǔ)日糧中添加2500 AU植物乳酸桿菌細(xì)菌素；試驗(yàn)組5為每千克基礎(chǔ)日糧中添加3500 AU植物乳酸桿菌細(xì)菌素。

1.2.4 飼養(yǎng)管理

采用密閉式雞舍，四層立體籠養(yǎng)，同一行連著3個(gè)籠（45 cm×40 cm）為一個(gè)重復(fù)，每籠飼養(yǎng)3只雞。采用自動(dòng)照明控制系統(tǒng)，自然光照不足時(shí)補(bǔ)充光照。飼用干粉料，自由采食和自由飲水（乳頭式飲水器），每天早上8點(diǎn)準(zhǔn)時(shí)喂料一次并定時(shí)對(duì)水槽進(jìn)行清理和消毒。按照常規(guī)程序進(jìn)行防疫和雞舍消毒。

1.2.5 樣品采集

試驗(yàn)開(kāi)始后每天上午8點(diǎn)準(zhǔn)時(shí)進(jìn)行喂料并記錄每個(gè)重復(fù)的喂料量，每天早上6點(diǎn)、8點(diǎn)、下午3點(diǎn)進(jìn)行勻料，并觀察雞只的健康狀況，及時(shí)淘汰重傷和病弱的雞只。每天下午2點(diǎn)半揀蛋。每天以重復(fù)為單位，記錄產(chǎn)蛋量、總蛋重、破殼蛋數(shù)、畸形蛋數(shù)、死亡淘汰數(shù)，試驗(yàn)完成后稱量每個(gè)重復(fù)的剩料量，并分別統(tǒng)計(jì)每個(gè)重復(fù)的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比等。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 11.5對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，采用DUNCAN氏多重比較，以P＜0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P＜0.01作為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 效價(jià)

通過(guò)二倍稀釋法，測(cè)得上清液的效價(jià)為320 AU/ml。

2.2 細(xì)菌素上清液對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響(見(jiàn)表1)

表1 植物乳酸桿菌細(xì)菌素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

日糧中細(xì)菌素添加組的產(chǎn)蛋率與對(duì)照組相比，均有極顯著提高。日糧中添加500 AU/ml的細(xì)菌素與其他組相比，可以顯著提高平均蛋重，日采食量也有提高的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，日糧中添加細(xì)菌素上清液能顯著降低料蛋比（P＜0.05），其中1500 AU/kg和3500 AU/kg添加組能極顯著降低產(chǎn)蛋雞料蛋比（P＜0.01）。

2.3 細(xì)菌素上清液對(duì)蛋品質(zhì)的影響(見(jiàn)表2)

細(xì)菌素添加組對(duì)蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、蛋黃色澤、哈氏單位均有不同程度的改善，但是差異均不顯著；各組之間蛋殼厚度沒(méi)有明顯的差異。

表2 植物乳酸桿菌細(xì)菌素對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

3 討論

乳酸菌是腸道益生菌群的一種，它能很好地定植于腸道，并對(duì)腸道微生態(tài)起到調(diào)節(jié)作用。而由本研究中的植物乳酸桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)——細(xì)菌素，對(duì)一些腸道致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等起到明顯的抑制作用，這樣在一定程度上緩解腸道疾病的發(fā)病頻率。本試驗(yàn)通過(guò)在產(chǎn)蛋雞日糧中添加不同水平的植物乳酸桿菌細(xì)菌素，研究其對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，并找出其在蛋雞日糧中的最佳用量。結(jié)果表明：日糧中添加500 AU/kg植物乳酸桿菌細(xì)菌素對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重的提升有顯著影響，對(duì)降低料蛋比也有顯著的效果；另外對(duì)平均日采食量、蛋黃色澤、哈氏單位、蛋殼強(qiáng)度和蛋形指數(shù)都有不同程度的改善。本試驗(yàn)添加的細(xì)菌素，有可能也是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡，進(jìn)一步影響動(dòng)物的生產(chǎn)性能。將細(xì)菌素作為飼料添加劑用于動(dòng)物試驗(yàn)也有其他相關(guān)報(bào)道，其中單胃動(dòng)物的研究較多。在蛋雞日糧中添加0.2%和0.4%的乳酸桿菌素可顯著提高產(chǎn)蛋率和降低料蛋比（P＜0.05）[6]。仔豬日糧中添加0.4%的乳酸菌素酸化粉，斷奶仔豬日增重提高10.1%，腹瀉率比對(duì)照組降低34.9%，結(jié)果表明，乳酸菌素酸化粉對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率，有良好改善[7]。在斷奶仔豬日糧中添加0.4%乳酸菌素，仔豬日增重提高19.5%(P＜0.01)，料肉比下降 7.1%(P＞0.05)，并可有效降低仔豬腹瀉率(P＜0.01)[8]。從報(bào)道中發(fā)現(xiàn)，添加植物乳酸桿菌細(xì)菌素通過(guò)調(diào)節(jié)胃腸道菌群平衡，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，保護(hù)和促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)，可以有效的降低腹瀉等腸道疾病的發(fā)生，改善動(dòng)物的生產(chǎn)性能，并且，根據(jù)細(xì)菌素的特點(diǎn)，其產(chǎn)生菌對(duì)細(xì)菌素本身具有免疫耐受性。除了改善動(dòng)物腸道，飼料中添加細(xì)菌素也可以防止飼料被大腸桿菌等致病菌的污染。

4 結(jié)語(yǔ)

目前，飼料添加劑種類繁多，其中微生物飼料添加劑（乳酸菌、芽孢桿菌等）的應(yīng)用較為廣泛，它不僅可以抑制有害菌繁殖，保持腸道菌群正常，還可以起到免疫等其他作用。而由益生菌產(chǎn)生的同樣具有抑菌作用的細(xì)菌素，是一種蛋白或多肽類物質(zhì)，對(duì)動(dòng)物也不會(huì)造成任何殘留，具有作為開(kāi)發(fā)成飼料添加劑的潛力。

[1]Vries M C de,Vaughan E E,Kleerebezem M,et al.Lactobacillus plantarum—survival,functional and potential probiotic properties in the human intestinal tract.International Dairy Journal,2006,16(9):1018－1028.

[2]Gagnon M,Zihler A,Chassard C,et al.Ecology of Probiotics and Enteric Protection.Biomedical and Life Sciences,2011,2:65－85.

[3]Atrih A,Rekhif N,Moir A J,et al.Mode of action,purification and amino acid sequence of plantaricin C19,an anti－Listeria bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum C19.Int J Food Microbiol,2001,68(1－2):93－104.

[4]Enan G,Alalyan S,Abdel－salam H A,et al.Inhibition of Listeria monocytogenes LMG10470 by plantaricin UG1 in vitro and in beef meat.Nahrung,2002,46(6):411－414.

[5]Xie J,Zhang R,Shang C,et al.Isolation and characterization of a bacteriocin produced by an isolated Bacillus subtilis LFB112 that exhibits antimicrobial activity against domestic animal pathogens.African Journal of Biotechnology,2009,8(20):5611－5619.

[6]孫汝江,張日俊.大豆肽和植物乳酸桿菌細(xì)菌素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和血液生化指標(biāo)的影響[D].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[7]李廣運(yùn).乳酸菌素酸化粉飼喂仔豬試驗(yàn)[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn),2005(11):17.

[8]陳紅梅,趙恒壽,韓彥珍,等.乳酸菌素對(duì)仔豬生產(chǎn)性能、飼料養(yǎng)分表觀消化率及糞大腸桿菌數(shù)量的影響[J].養(yǎng)豬,2006(04):3－5.