韓冰 鄧凱 張日俊

植物乳酸桿菌是定植于動物腸道的益生菌群之一[1]，是保護動物腸道的天然屏障[2]。目前，已發(fā)現(xiàn)的植物乳酸桿菌廣泛存在于各種環(huán)境中，比如蔬菜、水果、啤酒、肉制品、作物等。像其他乳酸菌一樣，植物乳酸桿菌也能產(chǎn)生乳酸、細菌素及其它代謝產(chǎn)物。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的一些植物乳酸桿菌細菌素，對食品中的腐敗菌——單核李斯特氏菌有很好的抑制作用[3－4]，但是通常抑菌譜較窄。本研究中提到的由植物乳桿菌YJG產(chǎn)生的細菌素，與以前發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌細菌素相比，抑菌范圍明顯擴大，對一些動物腸道致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌有較好的抑菌作用，基于這方面的考慮，將其作為飼料添加劑，添加到蛋雞飼料中，研究其對蛋雞生產(chǎn)性能等方面的影響，為飼料添加劑的開發(fā)提供了新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株 YJG是由本實驗室從健康雞腸道分離，并通過生理和16S rRNA鑒定為植物乳酸桿菌，于－20℃保存。

1.2 方法

1.2.1 發(fā)酵液的制備

植物乳酸桿菌YJG于37℃培養(yǎng)48 h,離心(12000×g，10 min)，保留上清液。

1.2.2 發(fā)酵上清液活性測定

發(fā)酵上清液活性用瓊脂擴散法來測定。上述發(fā)酵上清液用NaOH調(diào)pH值至4。用二倍稀釋法測定上清液效價[5]。

1.2.3 試驗分組

試驗選用232日齡的產(chǎn)蛋率、體重相近，健康狀況良好的海蘭灰蛋雞225只，采用單因子完全隨機試驗設(shè)計，試驗共分5個處理，每個處理5個重復(fù)，每個重復(fù)9只雞，預(yù)試期10 d，正試期24 d。試驗組1為基礎(chǔ)日糧，即對照組；試驗組2為每千克基礎(chǔ)日糧中添加500 AU植物乳酸桿菌細菌素；試驗組3為每千克基礎(chǔ)日糧中添加1500 AU植物乳酸桿菌細菌素；試驗組4為每千克基礎(chǔ)日糧中添加2500 AU植物乳酸桿菌細菌素；試驗組5為每千克基礎(chǔ)日糧中添加3500 AU植物乳酸桿菌細菌素。

1.2.4 飼養(yǎng)管理

采用密閉式雞舍，四層立體籠養(yǎng)，同一行連著3個籠（45 cm×40 cm）為一個重復(fù)，每籠飼養(yǎng)3只雞。采用自動照明控制系統(tǒng)，自然光照不足時補充光照。飼用干粉料，自由采食和自由飲水（乳頭式飲水器），每天早上8點準時喂料一次并定時對水槽進行清理和消毒。按照常規(guī)程序進行防疫和雞舍消毒。

1.2.5 樣品采集

試驗開始后每天上午8點準時進行喂料并記錄每個重復(fù)的喂料量，每天早上6點、8點、下午3點進行勻料，并觀察雞只的健康狀況，及時淘汰重傷和病弱的雞只。每天下午2點半揀蛋。每天以重復(fù)為單位，記錄產(chǎn)蛋量、總蛋重、破殼蛋數(shù)、畸形蛋數(shù)、死亡淘汰數(shù)，試驗完成后稱量每個重復(fù)的剩料量，并分別統(tǒng)計每個重復(fù)的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比等。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 11.5對數(shù)據(jù)進行方差分析，采用DUNCAN氏多重比較，以P＜0.05為差異顯著性判斷標準，P＜0.01作為差異極顯著判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 效價

通過二倍稀釋法，測得上清液的效價為320 AU/ml。

2.2 細菌素上清液對蛋雞生產(chǎn)性能的影響(見表1)

表1 植物乳酸桿菌細菌素對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

日糧中細菌素添加組的產(chǎn)蛋率與對照組相比，均有極顯著提高。日糧中添加500 AU/ml的細菌素與其他組相比，可以顯著提高平均蛋重，日采食量也有提高的趨勢。與對照組相比，日糧中添加細菌素上清液能顯著降低料蛋比（P＜0.05），其中1500 AU/kg和3500 AU/kg添加組能極顯著降低產(chǎn)蛋雞料蛋比（P＜0.01）。

2.3 細菌素上清液對蛋品質(zhì)的影響(見表2)

細菌素添加組對蛋殼強度、蛋形指數(shù)、蛋黃色澤、哈氏單位均有不同程度的改善，但是差異均不顯著；各組之間蛋殼厚度沒有明顯的差異。

表2 植物乳酸桿菌細菌素對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

3 討論

乳酸菌是腸道益生菌群的一種，它能很好地定植于腸道，并對腸道微生態(tài)起到調(diào)節(jié)作用。而由本研究中的植物乳酸桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)——細菌素，對一些腸道致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等起到明顯的抑制作用，這樣在一定程度上緩解腸道疾病的發(fā)病頻率。本試驗通過在產(chǎn)蛋雞日糧中添加不同水平的植物乳酸桿菌細菌素，研究其對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，并找出其在蛋雞日糧中的最佳用量。結(jié)果表明：日糧中添加500 AU/kg植物乳酸桿菌細菌素對蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重的提升有顯著影響，對降低料蛋比也有顯著的效果；另外對平均日采食量、蛋黃色澤、哈氏單位、蛋殼強度和蛋形指數(shù)都有不同程度的改善。本試驗添加的細菌素，有可能也是通過調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡，進一步影響動物的生產(chǎn)性能。將細菌素作為飼料添加劑用于動物試驗也有其他相關(guān)報道，其中單胃動物的研究較多。在蛋雞日糧中添加0.2%和0.4%的乳酸桿菌素可顯著提高產(chǎn)蛋率和降低料蛋比（P＜0.05）[6]。仔豬日糧中添加0.4%的乳酸菌素酸化粉，斷奶仔豬日增重提高10.1%，腹瀉率比對照組降低34.9%，結(jié)果表明，乳酸菌素酸化粉對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率，有良好改善[7]。在斷奶仔豬日糧中添加0.4%乳酸菌素，仔豬日增重提高19.5%(P＜0.01)，料肉比下降 7.1%(P＞0.05)，并可有效降低仔豬腹瀉率(P＜0.01)[8]。從報道中發(fā)現(xiàn)，添加植物乳酸桿菌細菌素通過調(diào)節(jié)胃腸道菌群平衡，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，保護和促進有益菌的生長，可以有效的降低腹瀉等腸道疾病的發(fā)生，改善動物的生產(chǎn)性能，并且，根據(jù)細菌素的特點，其產(chǎn)生菌對細菌素本身具有免疫耐受性。除了改善動物腸道，飼料中添加細菌素也可以防止飼料被大腸桿菌等致病菌的污染。

4 結(jié)語

目前，飼料添加劑種類繁多，其中微生物飼料添加劑（乳酸菌、芽孢桿菌等）的應(yīng)用較為廣泛，它不僅可以抑制有害菌繁殖，保持腸道菌群正常，還可以起到免疫等其他作用。而由益生菌產(chǎn)生的同樣具有抑菌作用的細菌素，是一種蛋白或多肽類物質(zhì)，對動物也不會造成任何殘留，具有作為開發(fā)成飼料添加劑的潛力。

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